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枯草芽孢杆菌guaB基因克隆及其在大肠杆菌中的表达: 2012年; 克隆枯草芽孢杆菌guaB基因,构建穿梭表达载体,使其在大肠杆菌中获得表达,为构建鸟苷高产工程菌奠定基础。从枯草芽孢杆菌JSIM-G-518基因组扩增出guaB基因,将其连接到pMD19-T上,得到重组质粒pMD-guaB,进行测序和Blast比对分析。该重组质粒经PstI、BamHI双酶切,获得guaB片段连接至pHP13载体上,构建穿梭表达载体pHP13-guaB,并采用双酶切电泳进行鉴定。将该载体转化入大肠杆菌BL21中,通过SDS-PAGE电泳检测guaB基因的表达效果。克隆的guaB基因长度为1 510 bp,与GenBank登录的枯草芽孢杆菌同源性为99%,编码500个氨基酸,确认为控制IMP脱氢酶的基因。穿梭载体pHP13-guaB经双酶切后产生1 510 bp和4.9 kb两个期望的目的条带。SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量的大小为52.9 k,与预期的IMP脱氢酶分子量一致,且该目的蛋白的表达效果比对照组更明显。论文成功实现了枯草芽孢杆菌guaB基因在大肠杆菌中的表达。; 郑惠华庞茂达薛玉玲孙梅华洵璐张一平刘永杰; 关键词：枯草芽孢杆菌克隆

水族箱气单胞菌的鉴定及致病特性分析被引量：4: 2015年; 为了确定南京市某渔场发病鱼感染的病原,本研究采集患鱼脏器,采用平板培养、生化实验和特异性gyr B基因扩增测序等方法进行细菌的分离鉴定;利用PCR技术检测分离株毒力基因的分布,分析其生物学特性,并进一步通过动物实验确定菌株致病力。结果分离到1株水族箱气单胞菌,命名为LK-25。该菌株携带5种主要毒力基因:气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、细胞兴奋性肠毒素(alt)、温敏胞外蛋白酶(epr)和丝氨酸蛋白酶(ahp),其溶血性和溶蛋白能力较强,对斑马鱼的半数致死量为1.02×103CFU/尾,确定为强毒株。进化树分析表明,水族箱气单胞菌与嗜水气单胞菌达卡亚种亲缘关系较近。本研究在国内首次报道发现水族箱气单胞菌,为进一步预防该菌所引起的相关疾病的发生和传播提供理论基础。; 吴亚锋王旭远庞茂达陆承平刘永杰; 关键词：致病特性

针对H3N2犬流感病毒HA2蛋白的单克隆抗体: 本发明提供了一种针对H3N2犬流感病毒HA2蛋白的单克隆抗体，属于生物技术领域。利用2010年分离的H3N2犬流感病毒江苏分离株JS/10，接种10日龄SPF鸡胚，收集血凝效价大于等于6的尿囊液，纯化病毒接种MDCK细胞...; 刘永杰谢星庞茂达林焱赵艳兵梁珊陆承平; 文献传递

肌醇、唾液酸及岩藻糖代谢途径对嗜水气单胞菌致病性的影响被引量：2: 2018年; 【目的】调查肌醇、唾液酸以及岩藻糖代谢途径在嗜水气单胞菌感染宿主过程中对细菌致病性的影响。【方法】采用同源重组技术分别缺失嗜水气单胞菌NJ-35株的肌醇代谢相关基因iolC、唾液酸代谢相关基因nanA和岩藻糖代谢相关基因fucK,测定各缺失株对斑马鱼的半数致死量(LD_(50));将野生株与缺失株共感染鲫鱼,统计野生株和缺失株在不同组织中的细菌载量。【结果】各代谢相关基因的缺失均成功阻断了菌株对相应底物的降解能力。iolC的缺失导致菌株对斑马鱼的LD50升高近12倍,而nanA和fucK的缺失对LD50没有明显影响。野生株与iolC缺失株共感染鲫鱼,肝脏、脾脏和肾脏中野生株的载量显著高于缺失株,表现出明显的生长优势;nanA和fucK缺失株与野生株共感染鲫鱼,野生株和缺失株载量在各组织中均无明显差异。【结论】肌醇代谢途径在嗜水气单胞菌感染致病过程中发挥重要作用,而唾液酸和岩藻糖代谢途径对细菌无明显影响。; 李首纲庞茂达董雨豪刘锦杨媛媛陆承平刘永杰; 关键词：嗜水气单胞菌肌醇唾液酸岩藻糖基因缺失

针对H3N2犬流感病毒HA2蛋白的单克隆抗体: 本发明提供了一种针对H3N2犬流感病毒HA2蛋白的单克隆抗体，属于生物技术领域。利用2010年分离的H3N2犬流感病毒江苏分离株JS/10，接种10日龄SPF鸡胚，收集血凝效价大于等于6的尿囊液，纯化病毒接种MDCK细胞...; 刘永杰谢星庞茂达林焱赵艳兵梁珊陆承平; 文献传递

犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用: 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所...; 刘永杰谢星庞茂达郁磊林焱赵艳兵梁姗马可

嗜水气单胞菌流行株基因组特征及毒力相关基因研究: 嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila），是引起淡水鱼败血症的主要病原，也可引起人类感染发病，是一种人-畜-鱼共患的致病微生物。该菌致病机制复杂，迄今为止还有许多未知毒力因子尚未发现。全面鉴定嗜水气单胞菌...; 庞茂达; 关键词：嗜水气单胞菌致病机制

犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用: 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所...; 刘永杰谢星庞茂达郁磊林焱赵艳兵梁姗马可; 文献传递

南京地区某渔场嗜水气单胞菌流行菌株的鉴定及分子分型被引量：10: 2017年; 为确定南京地区某渔场异育银鲫出血性败血症的病原体,采集该渔场3个饲养塘口患病鱼脏器进行细菌分离培养,基于气单胞菌DNA促旋酶B亚单位(gyr B)基因序列设计引物,PCR扩增后测序进行细菌鉴定;同时,对病原菌生物学特性如溶血性、蛋白酶活性、生物被膜形成能力、运动能力以及对斑马鱼的毒力等进行分析,并进行多位点序列分型(MLST)。结果在3个饲养塘口均分离到嗜水气单胞菌,分别命名为GL-15、GL-17和GL-18;MLST分型显示三株分离菌均为ST251型;生物学特性实验表明,均有溶血性、蛋白酶活性以及运动性,生物被膜形成能力较强,OD595均超过0.5,对斑马鱼的LD50在1.4×103~3.9×103 CFU/尾,属强毒株。本研究为有效防控南京地区嗜水气单胞菌引发的出血性败血症的暴发流行提供了依据。; 曹青张向阳庞茂达王楠楠FURQAN Awan陆承平刘永杰; 关键词：嗜水气单胞菌生物学特性

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庞茂达