张尧 作品数:91 被引量:293 H指数:9 供职机构: 重庆医科大学附属第一医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市教委科研基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 交通运输工程 更多>>
骨髓间充质干细胞外泌体调控肾癌细胞胆固醇代谢及其增殖、侵袭和迁移 被引量:1 2021年 目的探讨骨髓间充质干细胞外泌体(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs-Exos)对肾癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,明确骨髓间充质干细胞外泌体对肾癌细胞脂质代谢的影响及分子机制。方法通过透射电镜和免疫印迹对提取的骨髓间充质干细胞外泌体进行鉴定,摄取实验验证肾癌细胞对骨髓间充质干细胞外泌体的摄取情况。将肾癌细胞Renca分为对照组(常规培养+PBS)和实验组(小鼠BMSCs-Exos 20μg/mL处理Renca细胞),采用CCK-8实验观察两组细胞的增殖能力;Transwell实验观察两组细胞的侵袭和迁移能力。液相色谱质谱联用的脂质组学分析肾癌细胞脂质代谢物差异,采用Western blot和qRT-PCR检测胆固醇代谢途径关键酶的表达。结果在骨髓间充质干细胞上清液中成功提取分离骨髓间充质干细胞外泌体,透射电镜下呈典型的“杯口状”囊泡,Western blot检测结果发现外泌体标志性蛋白CD63、CD9高表达,且摄取实验表明骨髓间充质干细胞外泌体可被肾癌细胞摄取。细胞功能实验发现,与对照组比较,骨髓间充质干细胞外泌体处理后肾癌细胞的增殖(P<0.05)、侵袭和迁移能力(P<0.01)均增加。液相色谱质谱联用脂质组学分析显示,外泌体处理后肾癌细胞中牛磺熊去氧胆酸明显降低(P<0.05),胆固醇升高(P<0.05)。骨髓间充质干细胞外泌体可调控HMGCR、CYP7A1、CYP7B1表达以影响肾癌细胞胆固醇代谢,促进肾癌细胞增殖和迁移。结论骨髓间充质干细胞外泌体可通过调控肾癌细胞内胆固醇代谢关键酶的表达,影响细胞胆固醇代谢,以调控肾癌的增殖、侵袭和迁移能力。 王和西 刘学洋 柳明 聂东梓 张尧关键词:肾细胞癌 骨髓间充质干细胞 外泌体 胆固醇代谢 肿瘤侵袭 膀胱癌MB49细胞exosomes对MDSCs增殖及活性的影响 被引量:4 2015年 目的探讨膀胱癌MB49细胞来源的外泌体(exosomes)对MDSCs细胞扩增、活化的影响及机制。方法用超滤联合蔗糖重水密度梯度离心法分离纯化膀胱癌MB49细胞分泌的exosomes;电镜形态学分析及Western blotting鉴定;流式细胞仪检测MDSCs比例;ELISA检测VEGF和IL-6;RT-PCR和Western blotting检测cyclin D1、Arg-1 m RNA和蛋白的表达;Western blotting检测p-STAT3和p-NF-κB的变化。结果成功分离纯化得到膀胱癌MB49细胞分泌的exosomes。exosomes可促进MDSCs扩增及活化。实验组MDSCs比例明显升高;Cyclin D1及Arg-1 m RNA和蛋白的表达均上调;p-STAT3和p-NF-κB的表达也上调。结论膀胱癌MB49细胞来源的exosomes能促使MDSCs细胞扩增、活化。研究和分析MDSCs的免疫抑制机制,为疾病的治疗寻找行之有效的新靶点。 刁建军 宋学东 杨雪 王清松 罗春丽 张尧 吴小候关键词:MDSCS 膀胱癌 扩增 荷瘤小鼠脾脏髓源抑制细胞的分选及鉴定 2014年 目的研究荷瘤小鼠脾脏中髓源抑制细胞(myeloid derived suppresser-cell,MDSCs)的分选与鉴定方法。方法常规培养小鼠肾癌细胞(Renca细胞),于Balb/c小鼠皮下建立小鼠肾癌模型;分离小鼠脾脏制成单细胞悬液,磁珠分选Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs;台酚蓝染色检测细胞存活率;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测其细胞纯度;显微镜下观察细胞形态;免疫荧光测其表面Gr-1、CD11b荧光表达情况;RT-PCR检测Cox2和Arg-1的m RNA的表达情况;小鼠皮下成瘤实验观察MDSCs促肿瘤生长。结果成功建立小鼠肾癌模型,磁珠分选后经FCM检测Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs细胞可达92.3%,显著高于分选前(P<0.01);免疫荧光鉴定结果显示:分选后的细胞形态完整,Gr-1和CD11b的荧光表达于细胞膜且2种荧光可以融合;RT-PCR检测分选后的MDSCs细胞群的Cox2和Arg-1的m RNA相对表达量显著高于分选前(P<0.05);小鼠皮下成瘤观察到MDSCs组与实验对照组有显著差异(P<0.05)。结论用免疫磁珠从荷瘤小鼠脾脏中成功分选得到MDSCs,具有较高纯度和良好的生物活性,为后续实验提供了理想的细胞来源。 刁建军 杨雪 宋学东 陈仕友 王胤 王晓蓉 罗春丽 张尧 吴小候关键词:MDSCS 脾脏 磁珠分选 肾上腺醛固酮-皮质醇共分泌瘤2例 被引量:1 2019年 近年来关于肾上腺醛固酮破质醇共分泌瘤(aldosterone-and cortisol-producing adenoma,A/CPA)病例越来越多,为进一步了解A/CPA患者的临床特点,本文对在重庆医科大学附属第一医院治疗的2例A/CPA病例作如下报道,并结合国内已有病例报道进行分析。我们建议临床医生常规让每一位原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism,PA)患者在行肾上腺静脉取血(adrenal vein sampling, AVS)或行肾上腺腺瘤手术前都进行地塞米松抑制实验以排除合并库欣综合征的可能。从而避免错误判断AVS结果,也可避免术后肾上腺功能减退和肾上腺危象的发生。 谭建宇 程庆丰 李启富 张莹宵 杨琴 杜志鹏 杨淑敏 何文雯 宋颖 胡金波 杨溢 张尧 何云峰 苟欣关键词:肾上腺疾病 醛固酮增多症 库欣综合征 醛固酮瘤 人IL-12基因与糖基化磷脂酰肌醇信号肽序列融合基因真核双表达质粒的构建及表达 被引量:1 2009年 目的将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)信号肽序列与人白细胞介素12(hIL-12)基因拼接成融合基因,构建该融合基因的真核双表达质粒,并检测融合基因在肾癌细胞的表达。方法将人胎盘碱性磷酸酶-1(hPLAP-1)C末端信号肽序列与hIL-12的P40亚基基因进行拼接,亚克隆至真核双表达质粒pBudCE4.1,再将IL-12的P35亚基基因亚克隆至pBudCE4.1的另一个多克隆位点。酶切及测序鉴定质粒。将质粒转染肾癌细胞株RC-2,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测其表达。结果分别成功扩增出IL-12P40基因987bp和P35基因762bp,合成hPLAP-1C末端信号肽序列117bp,并将GPI信号肽序列与P40基因成功拼接,成功构建了真核表达载体pBudCE4.1/IL-12A/IL-12B-GPI(命名为pBIG),经酶切及测序鉴定正确。激光共聚焦显微镜观察带锚定蛋白的IL-12在肾癌细胞膜上高表达,并能被磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C洗脱。结论真核双表达载体pBIG的构建及表达,为进一步制备肾癌疫苗奠定了基础。 张尧 何百成 王莹莹 陈刚 张家模 吴小侯关键词:白细胞介素12 基因融合 真核细胞 不离断肌纤维小切口法治疗输尿管结石的临床分析 2007年 目的探讨适宜在基层医院广泛开展的治疗输尿管结石的微创术式。方法对106例输尿管结石患者分别应用不离断肌纤维小切口法(小切口组)、传统开放手术(传统手术组)、经输尿管镜碎石(输尿管镜组)治疗,并进行临床比较分析。结果小切口组46例,平均手术时间(28.7±6.4)min,平均出血量(21.8±12.1)ml,平均住院时间(3.8±1.6)d,平均住院费用(3200±350)元,均明显低于传统手术组,差异具有统计学意义(P〈0.01);输尿管镜组平均手术时间(40.3±10.7)min,平均住院费用(5600±270)元,明显高于小切口组,差异具有统计学意义(P〈0.01)。结论不离断肌纤维小切口法治疗输尿管结石具有经济、微创、有效、安全等优势,适宜在基层医院广泛开展。 张尧 孙先禹 吴小侯 何俊 曾定胜 康川疆关键词:输尿管结石 治疗学 输尿管镜下60瓦钬激光治疗输尿管结石1289例疗效分析 被引量:1 2011年 目的:总结分析我科使用60瓦钬激光治疗输尿管结石的疗效。方法:对于诊断明确的输尿管结石,在输尿管镜下,采用60W钬激光进行碎石治疗。结果:1289例患者碎石成功1197例,成功率92.86%,其中中下段结石967例碎石成功948例,成功率98.04%,上段结石322例碎石成功249例,成功率77.33%。结论:对于输尿管结石尤其是输尿管中下段结石,使用钬激光治疗可以取得良好的效果。 何云锋 吴小候 唐伟 尹志康 陈刚 张尧关键词:输尿管镜 结石 激光 原发性醛固酮增多症的诊断及治疗观察 被引量:1 2015年 目的回顾性总结原发性醛固酮增多症(PHA)的诊断及治疗经验。方法选取2009年1月至2013年12月重庆医科大学附属第一医院诊断为PHA患者84例,根据临床表现、血钾、24h尿钾、血气分析、立位醛固酮与肾素比值(ARR)、肾上腺静脉取血(AVS)、卡托普利抑制试验、CT定位检查及术后病理确诊为PHA,采用后腹腔镜肾上腺肿瘤切除术治疗,将患者分为典型临床表现组和不典型临床表现组;比较两组患者肿瘤大小、术前美国麻醉师协会(ASA)分级、手术时间、术中出血量、术前准备时间、术后住院时间。结果典型组与不典型组肿瘤最大径、手术时间、术后住院时间、术中出血量比较,差异无统计学意义(P>0.05);典型组和不典型组术前准备时间、术前ASA分级比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论典型和不典型PHA诊断及治疗无差别;典型组较不典型组手术风险高,需要较长的术前准备时间;AVS适用于早期PHA确诊或定位困难者。 刘文聪 王德林 程庆丰 张鑫 李美才 张尧 蒲军 何云锋 吴小候 李启富 何江关键词:醛固酮增多症 腹腔镜下腹股沟淋巴结清扫术3例报道 2014年 目的:探讨并总结腹腔镜下腹股沟淋巴结清扫术的手术经验及安全性、可行性。方法回顾性分析3例腹腔镜下腹股沟淋巴结清扫术手术时间、术中出血量、住院时间、清扫淋巴结数量,并总结手术经验。结果3例患者手术平均时间154.3min,平均术中出血量为12.7ml,平均住院时间为11.3d,平均清扫淋巴及数量为23.3枚。均无手术并发症发生。结论腹腔镜下腹股沟淋巴结清扫术相比开放性腹股沟淋巴结清扫术而言,能够有效降低手术并发症发生率,具有安全、可行、微创的特点。 杨磊 王德林 张尧 蒲军 吴小候关键词:腹腔镜 应用PASO标准评估两种手术方式治疗单侧醛固酮瘤疗效的对比研究 2021年 目的通过应用原发性醛固酮增多症手术结局(PASO)标准比较肾上腺全切与部分切除术治疗单侧醛固酮瘤的疗效,为单侧醛固酮瘤的手术方式选择提供依据。方法回顾性分析2013年1月至2020年3月该院泌尿外科收治的245例单侧醛固酮瘤患者的临床资料,其中行后腹腔镜肾上腺全切术(TA)124例(50.6%,TA组),行后腹腔镜肾上腺部分切除术(PA)121例(49.4%,PA组)。术后随访6~72个月,中位24个月。比较两组患者基本特征、手术资料、围术期并发症、术后激素补充和术后随访结果。结果245例患者手术均获成功,无中转开放手术患者。两组患者手术时间、术中出血量、24 h血红蛋白下降值、围术期输血率、术后临床指标、术后住院时间、术后激素补充百分比比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。TA组患者中多发瘤15例(12.1%);肾上腺静脉取血诊断准确率为89.4%,CT诊断准确率为76.4%。依据PASO标准,TA组患者总体临床缓解率(完全缓解、部分缓解,97.6%)、总体生化缓解率(99.2%)与PA组(分别为94.2%、99.2%)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。TA组患者复发率(0)低于PA组(2.5%),但差异无统计学意义(P>0.05)。结论单侧TA可能是单侧醛固酮瘤更有效的手术方式。 刘学洋 张尧关键词:醛固酮瘤 腹腔镜 肾上腺切除术