张晓蕾
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 氟伐他汀对人THP-1细胞TLR4及下游信号转导通路的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨氟伐他汀对脂多糖(LPS)刺激的人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)Toll样受体4(TLR4)及下游信号转导通路的干预作用。方法采用不同剂量的氟伐他汀、LPS处理THP-1细胞,MTT法检测细胞增殖情况,实时荧光定量RTPCR(qRT-qPCR)检测细胞中TLR4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,western blot检测TLR4及下游磷酸化胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化核因子κB(NF-κB p65)蛋白的表达水平。ELISA法测定细胞培养上清中TNF-α蛋白的含量。结果氟伐他汀(10 mg/L)降低LPS刺激的THP-1细胞TLR4(蛋白质和mRNA)的表达(t分别为7.55、7.80,P均<0.05),1、5、10mg/L氟伐他汀能显著抑制LPS刺激的下游分子ERK的磷酸化(q分别为11.78、18.15、18.88,P<0.05);亦能抑制LPS刺激的NF-κB p65的磷酸化(q分别为5.13、6.87、11.68,P<0.05)。同时,氟伐他汀(10 mg/L)能显著干预LPS刺激的细胞TNF-α(蛋白质和mRNA)的表达(q分别为4.23、3.01,P<0.05)。结论氟伐他汀可通过干预LPS刺激的TLR4表达及下游分子ERK、NF-κB p65的磷酸化,抑制THP-1细胞TNF-α的表达,可能为氟伐他汀的抗炎机制之一。
- 王婷周红解鸿翔胥亚刘敬敬张晓蕾
- 关键词：氟伐他汀细菌脂多糖胞外信号调节激酶核因子ΚB
- 基于通用质粒标准品的实时荧光定量PCR检测组织因子剪接异构体F3tv1及F3tv2被引量：1
- 2012年
- 目的建立基于通用质粒标准品的实时荧光定量PCR(qPCR)法检测人组织因子(TF)两种剪接异构体(F3tv1和F3tv2)。方法设计基因特异性上游引物与通用下游引物,通过引物末端延伸法将2种扩增产物进行序列简并,用于构建通用质粒标准品。用qPCR法检测人白血病细胞株THP-1、Jurkat及外周血单核细胞中F3tv1与F3tv2的表达,分析该法的线性范围与特异性。结果所建qPCR方法对F3tv1与F3tv2扩增特异,线性范围均为108～101copies/μL。THP-1与外周血单核细胞中F3tv1相对表达量分别为(5.70×10-4)±(2.62×10-5)与(1.79×10-4)±(4.37×10-5);F3tv2分别为(4.94×10-5)±(2.19×10-6)与(2.98±2.18)×10-6,Jurkat细胞株F3tv1与F3tv2均未检出。结论建立的qPCR方法可对TF两种剪接异构体同时进行精确、定量地检测,为深入研究TF的选择性剪接调控机制提供实验依据。
- 穆原周红胥亚张晓蕾王婷
- 关键词：选择性剪接实时荧光定量PCR
- β_2糖蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定被引量：5
- 2013年
- 目的:制备β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)单克隆抗体(MAbs),并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的人血浆β2GPⅠ免疫BALB/c小鼠,采用PEG融合技术,间接ELISA法和有限稀释法,制备和筛选杂交瘤细胞。杂交瘤细胞继续扩大培养后注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,经硫酸铵沉淀及Protein G纯化MAbs。秋水仙素阻抑法鉴定杂交瘤细胞株染色体数目,ELISA测定滴度,Ig亚类试剂盒鉴定Ig亚类,Western blot鉴定特异性。结果:获得1株稳定分泌MAbs的杂交瘤细胞株β2,该杂交瘤细胞株的染色体数为99～108。进一步研究发现,其培养液和腹水滴度为1∶29和1∶215,其MAbs分类为IgG1/κ,Western blot显示纯化的MAbs及标准anti-β2GPⅠ与β2GPⅠ均有反应条带,具有较好的特异性。结论:成功获得并纯化β2GPⅠ单克隆抗体,为进一步研究β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ复合物在抗磷脂综合征中的作用奠定了基础。
- 胥亚许国莹周红解鸿翔夏龙飞刘敬敬张晓蕾
- 关键词：杂交瘤细胞株单克隆抗体抗磷脂综合征
- Toll样受体4在β2GPI诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟过程中的作用被引量：5
- 2014年
- 目的探讨Toll样受体4(TLR4)在β2糖蛋白I(β2GPI)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)成熟过程中的作用。方法体外联合使用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导TLR4正常(C3H/HeN)及TLR4缺陷(C3H/HeJ)小鼠的骨髓细胞为未成熟树突状细胞(iDC)。用β2GPI或LPS(阳性对照)对iDC进一步刺激后,采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术分析细胞表面分子变化,ELISA测定细胞因子IL-12和TNF-α的分泌水平。结果同C3H/HeJ小鼠相比,C3H/HeN小鼠iDC经β2GPI或LPS刺激后,细胞突起较多,形态上更成熟;细胞表面分子CD11c和MHC-Ⅱ的表达量更高(P<0.05);细胞因子IL-12和TNF-α的分泌更强(P<0.01)。结论 TLR4在β2GPI诱导小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞成熟过程中起重要作用。
- 刘敬敬周红解鸿翔胥亚张晓蕾孔祥民谢娅超何超
- 关键词：抗磷脂综合征树突状细胞TOLL样受体4
- Toll样受体4促进氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体复合物诱导小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化及活性分子的表达被引量：3
- 2014年
- 目的 观察Toll样受体（TLR）4是否参与氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白L/抗β2糖蛋白Ⅰ（ox-LDL/β2 GPI/抗β2GPI）抗体复合物诱导小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化以及相关因子的表达,以探讨TLR4的作用.方法 分离C3 H/HeN（TLR4正常）和C3 H/HeJ（TLR4缺陷）小鼠腹腔巨噬细胞后,根据实验分组分别加入ox-LDL、ox-LDL/β2 GPI、ox-LDL/抗β2GPI、β2GPI/抗β2GPI、ox-LDL/β2GPI/抗β2 GPI、脂多糖（LPS）处理48 h,油红O染色观察C3H/HeN和C3H/HeJ 2组细胞泡沫化情况；收集刺激后2组细胞总RNA及总蛋白,荧光定量聚合酶链式反应检测2组细胞组织因子（TF） mRNA水平,Western blot检测细胞核因子（NF）-κB p65的活化,酶联免疫吸附法检测细胞因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达,采用单向方差及双向方差分析组内及组间差异.结果 （1）C3H/HeN小鼠组腹腔巨噬细胞经ox-LDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激后胞质中脂滴显著增加,与C3 H/HeJ小鼠组比较差异明显.（2） ox-LDL/β2 GPI/抗β2GPI抗体复合物诱导C3 H/HeN小鼠组腹腔巨噬细胞泡沫化过程中,磷酸化-NF-κB p65表达增加,与其空白对照比较差异有统计学意义（P＜0.01）,与ox-LDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物诱导的C3H/HeJ组比较,差异也有统计学意义（0.82 ±0.22比0.57±0.32,P ＜0.01）.（3）ox-LDL/β2 GPI/抗β2GPI抗体复合物诱导C3H/HeN小鼠组巨噬细胞源性泡沫细胞形成时,TF mRNA及MCP-1表达明显增加,与其空白对照比较差异有统计学意义（P＜0.01）,与ox-LDL/β2 GPI/抗β2GPI抗体复合物诱导的C3 H/HeJ组比较,差异也有统计学意义[TF mRNA：0.041±0.023比0.005±0.003;MCP-1：（6 200.0±6.4）pg/ml比（803.3±5.5）pg/ml,P均＜0.01].结论 TLR4能够促进ox-LDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物诱导小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,并促进相关分子的表达及活化,提示TLR4在抗磷脂综合征相关分子诱导巨噬细胞泡沫化过程中发挥重要作用.
- 张晓蕾周红胥亚刘敬敬解鸿翔孔祥民谢娅超严金川
- 关键词：抗磷脂综合征抗原抗体复合物TOLL样受体4泡沫细胞
