张舟
- 作品数：12 被引量：8H指数：2
- 供职机构：沈阳药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会创新基金上海市教育委员会重点学科基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 膜片钳全细胞记录法在研究谷氨酰胺转运蛋白分子机制中的应用被引量：3
- 2009年
- 为了研究中性氨基酸转运蛋白-谷氨酰胺转运蛋白的结构与功能,采用膜片钳全细胞记录法测定谷氨酰胺转运蛋白2介导的电流.结果表明:谷氨酰胺转运蛋白诱导了底物氨基酸和Na+浓度依赖性电流,可用于测定底物氨基酸和Na+对转运蛋白的表观亲和常数Km,SNAT2野生型对丙氨酸的表观亲和常数KmA la为(200±5)×10-6mol/L,对Na+的表观亲和常数KmNa为(100±7)×10-3mol/L.谷氨酸转运蛋白转运底物氨基酸过程是生电的过程,在膜电势负值时氨基酸转运电流增大,可用于转运机制的研究.因此膜片钳全细胞记录法是研究谷氨酰胺转运蛋白分子机制的有效方法.
- 张舟章骏孙传文
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2-HA融合蛋白的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2在哺乳动物组织中广泛表达,具有转运中性氨基酸的功能,在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.为了方便测定SNAT2在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接将HA标签蛋白与SNAT2的C末端连接,构建了真核生物表达载体pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染到HEK293T细胞中,通过Western blot法检测到SNAT2-HA融合蛋白在细胞膜上的正确表达和定位.pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体的成功构建,为今后对SNAT2的结构和功能的研究提供了有效方法.
- 董晓云王函孟雯李洋张舟
- 关键词：融合蛋白
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(SNAT2)多克隆抗体的制备
- 2013年
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(SNAT2)属于SLC38家族,参与小的中性氨基酸跨膜转运,在哺乳动物组织中广泛表达.SNAT2的功能紊乱可以导致许多神经性疾病,如阿尔茨海默症、帕金森症等.采用PCR方法扩增得到SNAT2氨基端75个氨基酸的编码序列,构建重组质粒pET28a-SNAT2-75aa,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达重组蛋白.利用组氨酸标签蛋白经镍柱亲和纯化后得到了纯度在95%以上的SNAT2氨基端蛋白SNAT2-75aa,将其作为免疫原免疫新西兰大白兔,从而获得SNAT2多克隆抗体.采用巯丙基琼脂糖凝胶6B(Thiopropyl sepharose)固定抗原亲和纯化法进一步对该抗体进行纯化,纯化后的抗体效价至少提高10倍.蛋白免疫印迹确定该抗体对SNAT2具有高度的特异性,表明SNAT2多克隆抗体制备的成功,为进一步研究SNAT2蛋白的结构和功能奠定了生化基础.
- 刘丽闵伟勇张舟
- 关键词：转运蛋白抗体蛋白纯化
- 大鼠谷氨酰胺转运蛋白SNAT2-EGFP融合蛋白的表达与鉴定被引量：1
- 2011年
- 谷氨酰胺转运蛋白是中枢神经系统中一种重要的中性氨基酸转运蛋白,对谷氨酰胺的跨膜转运十分重要。为了更方便地研究大鼠谷氨酰胺转运蛋白2(SNAT2)在细胞膜上的表达与定位,利用亚克隆技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)构建于SNAT2的C端,通过菌液PCR、酶切和DNA测序鉴定重组真核表达质粒;将测序正确的重组质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T cells),用Western blot和激光共聚焦电子显微镜荧光检测技术鉴定SNAT2-EGFP的表达与亚细胞定位。结果表明,SNAT2-EGFP融合蛋白重组质粒在细胞中表达并正确定位于细胞膜上。SNAT2-EGFP融合蛋白重组质粒的成功构建为今后深入研究SNAT2的结构和功能提供了一个有效的工具。
- 孟雯王函董晓云李洋张舟
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白融合蛋白
- 辣木改善糖尿病及并发症的研究进展被引量：1
- 2018年
- 目的介绍药用植物辣木改善糖尿病及并发症的研究进展,为辣木药理机制研究提供参考。方法通过查阅国内外相关文献,对辣木改善糖尿病及并发症进行比较全面的总结和综述。结果总结了糖尿病的发展概况,糖尿病及并发症的种类;辣木的生物学特性,辣木的主要功能性成分;以及药用植物辣木改善糖尿病及并发症的研究进展。结论辣木作为补充和替代性药用植物,在改善糖尿病及并发症的方面有显著的作用效果,具有良好的应用前景,应深入探究其药理机制,为进入下一步开发利用提供参考。
- 高成王帆张舟
- 关键词：药用植物辣木糖尿病糖尿病并发症
- pBK-CMV ⊿-EGFP-SNAT2质粒载体构建及其表达鉴定(英文)
- 2012年
- SNAT2是SLC38基因家族编码的Na+偶联中性氨基酸转运蛋白中属于system A的成员之一.它在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.增强型绿色荧光蛋白EGFP的连接对于SNAT2在细胞表达中的定位以及检测都有很大的帮助.采用PCR扩增和酶切技术将EGFP连接到质粒pBK-CMV⊿-SNAT2中SNAT2的N端.通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和测序验证得到pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2质粒载体,将构建好的质粒瞬时转染进人胚肾细胞(HEK293 cells)用Western blot和激光共聚焦电子显微镜检测EGFP-SNAT2的表达与亚细胞定位.结果表明:EGFP-SNAT2在细胞中正确表达并定位于细胞膜上.pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2质粒载体的构建对于进一步研究SNAT2的结构和功能具有重要意义.
- 李洋张舟
- 关键词：EGFP
- 大鼠中性氨基酸转运蛋白SNAT1-HA融合蛋白的构建和表达(英文)
- 2011年
- Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白SNAT1是一种膜蛋白,属于转运蛋白第38家族(SLC38),在中枢神经系统(CNS)中起到重要的生理学作用.为了更容易地检测SNAT1在细胞膜上的表达,以pBK-CMVΔ-SNAT1为模板,用PCR,双酶切和T4连接酶连接的方法在SNAT1的C端加上了一个HA标签蛋白,构建了一个新质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA.用该质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T),转染36 h以后,融合蛋白SNAT1-HA可以用HA抗体检测.Western blot结果显示在约54 kDa处有一条特异性条带,与预期分子量大小一致.利用重组质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA可以更方便地检测到SNAT1在细胞膜上的表达与定位,为进一步研究SNAT1结构与功能奠定了基础.
- 王函孟雯董晓云李洋张舟
- 关键词：融合蛋白
- 大鼠中性氨基酸转运蛋白HA-SNAT3融合蛋白的构建和鉴定(英文)
- 2014年
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT3是SLC38基因家族N系统的成员之一,主要在脑部和视网膜的星形胶质细胞中表达,负责转运谷氨酰胺,在脑部和肝脏的谷氨酸-谷氨酰胺循环中发挥重要作用.为了方便检测SNAT3在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接的方法将HA标签连接到质粒pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT3中大鼠SNAT3的N端,构建了真核生物表达载体pBK-CMVΔ-SNAT3.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染进人胚肾细胞(HEK293T cells),通过Western blotting检测HA-SNAT3融合蛋白的表达.结果表明,HA-SNAT3能够正确在细胞膜上表达.pBK-CMVΔ-SNAT3表达载体的成功构建对于进一步研究SNAT3的结构和功能提供了有效方法.
- 陈琛张舟
- 大鼠谷氨酰胺转运蛋白SNAT1-EGFP融合蛋白的构建与鉴定
- 2017年
- 目的利用分子生物学方法构建大鼠谷氨酰胺转运蛋白1重组质粒p EGFP-N1-SNAT1并进行鉴定。方法对载体p EGFP-N1和质粒p BK-CMV(Δ[1098-1300])-SNAT1双酶切,纯化后连接,构建重组质粒p EGFP-N1-SNAT1。用Western blot检测融合蛋白的表达,采用免疫荧光检测SNAT1在细胞膜上的表达和定位。结果成功构建重组质粒p EGFP-N1-SNAT1并正常表达、定位于细胞膜上。结论重组质粒p EGFP-N1-SNAT1的成功构建为研究SNAT1的结构和功能提供了有效工具。
- 袁燕蒙葛玉丹张舟
- 关键词：融合蛋白增强型绿色荧光蛋白
- 大鼠谷氨酰胺转运蛋白EGFP-SNAT3融合蛋白的表达与鉴定
- 2014年
- SLC38基因家族编码的Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白3(SNAT3)是System N中的一员.它在大脑谷氨酸-谷氨酰胺循环以及肝细胞质膜的谷氨酰胺转运等生理过程中发挥着重要作用.为了方便检测SNAT3在细胞膜上的表达与定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与SNAT3的N末端连接,通过菌液PCR、酶切和DNA测序验证得到pBK-CMV(Δ[1098-1300])-EGFP-SNAT3重组真核表达质粒.用脂质体转染法将构建好的质粒瞬时转染进入人体胚肾细胞(HEK293T cells),利用激光扫描共聚焦显微镜和Western blot技术检测EGFP-SNAT3融合蛋白的表达和亚细胞定位.结果表明,EGFPSNAT3重组质粒在细胞中正确表达并定位于细胞膜上.EGFP-SNAT3重组质粒的成功构建将有助于日后进一步研究SNAT3的结构和功能.
- 李敏闵伟勇张舟
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白质粒构建
