徐波
- 作品数：13 被引量：19H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院毒物药物研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胍丁胺-I1咪唑啉受体对μ-阿片受体脱敏和下调的影响
- 2007年
- 目的:观察胍丁胺通过激活I1咪唑啉受体对阿片预处理引起的μ-阿片受体脱敏和下调的影响。方法:以CHO-μ和CHO-μ/IRAS(imidazoline receptor antisera-selected protein,咪唑啉受体抗血清选择性蛋白)细胞作为研究对象,用[35S]GTPγS和3H-二丙诺啡(diprenorphine)结合实验方法,确定胍丁胺-I1咪唑啉受体作用系统对μ-阿片受体脱敏和下调的影响。结果:在正常CHO-μ和CHO-μ/IRAS细胞中,μ-阿片受体的表达量和对配体的亲和力无显著差异;两细胞中μ-阿片受体对激动剂刺激的反应一致。阿片受体激动剂DAMGO[(D-Ala2,N-Me-Phe4,Gly5-ol)-脑啡肽(enkephalin),10μmol/L]处理CHO-μ/IRAS细胞30 minμ-阿片受体出现脱敏,而胍丁胺(10 nmol/L^100μmol/L)不影响μ-阿片受体脱敏过程。DAMGO(1μmol/L)处理两细胞12 h后可出现μ-阿片受体的下调,胍丁胺(1~100 nmol/L)浓度依赖性地抑制CHO-μ/IRAS细胞中μ-阿片受体的下调,而相同浓度胍丁胺在CHO-μ细胞中无此作用。胍丁胺这一作用能被I1咪唑啉受体阻断剂依法克生(efaroxan,Efa)所阻断。结论:胍丁胺通过激活I1咪唑啉受体可抑制DAMGO长期处理所致的μ-阿片受体下调,此作用可能与胍丁胺抑制阿片依赖有关。
- 高燕吴宁李斐王勃徐波苏瑞斌李锦
- 关键词：胍丁胺Μ-阿片受体脱敏下调
- T-2毒素对CHL细胞的微核试验
- 1993年
- T-2毒素是1种单端孢霉烯类毒素，为判断该毒素是否具有诱变性，我们对其进行了CHL细胞微核试验，T-2毒素由上海农科院植保所提供培养物，本所提取。细胞为中国仓鼠肺细胞克隆亚系CHL-1，细胞培养于HAMF-12培养基，37℃，5％、CO2，95％温度下单层培养，另加10％新生牛血清，细胞接种量为每25ml培养瓶2-4×10^5，接种后24h加入T-2毒素等，
- 徐波关贵民王治乔孙金苏
- 关键词：微核试验T-2毒素CHL细胞中国仓鼠肺细胞上海农科院
- 盐酸戊乙奎醚对中国仓鼠肺细胞体外染色体畸变的影响被引量：1
- 2003年
- 徐波王治乔
- 关键词：盐酸戊乙奎醚抗胆碱药染色体畸变动物实验
- 建立DBT细胞模型比较药物对MHV-A59病毒的抗毒作用
- 2005年
- 目的:利用病毒学方法建立对小鼠肝炎病毒(MHVA59)易感的星形胶质瘤细胞(DBT)模型,在细胞水平上建立抗冠状病毒药物的筛选的实验方法。方法:通过测定细胞病变效应(CPE)的半定量法及噬斑定量法测定组织培养感染量(TCID50);以PEG沉淀法部分纯化病毒,利用免疫学方法免疫动物制备抗MHVA59的多克隆抗体;以血清学方法进行中和实验及酶联免疫方法定量测定病毒抗体的滴度及特异性;以100倍的TCID50病毒量感染细胞同时加不同稀释度的药物,在同一条件下,动态观察不同时间的细胞的CPE变化。以能保护CPE<50%为阳性。并比较药物的最低抗毒浓度。结果:制备的抗体对MHV病毒具有特异性的翻转作用;合成新药Cinanserin和Pkumdlcvs1003对MHV所致的细胞感染具有不同程度的保护作用。结论:建立的MHVA59敏感的DBT细胞模型可以用于抗冠状病毒药物的筛选。
- 付红焱徐波王宏军宫泽辉
- 关键词：肝炎病毒酶联免疫抗体
- 稳定表达大麻受体2的CHO细胞株的构建
- 2009年
- 目的建立稳定高效表达人重组大麻受体2(CB2)的中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞株,为体外高通量筛选CB2激动剂和拮抗剂奠定基础。方法通过脂质体介导的方法将构建的表达载体pcDNA3.1(+)-CB2转染入CHO-K1细胞中,然后用含G418的选择性培养液进行筛选,挑取耐药克隆;培养并收集耐药克隆细胞,用RT-PCR方法做进一步筛选;序列测定鉴定整合基因的序列;筛选的阳性克隆用放射性配体-受体结合实验进行进一步的鉴定和受体活性分析。结果转染细胞在含G418的选择性培养基中生长出28个耐药单克隆,用RT-PCR方法检测出17个CB2mRNA表达量较高的阳性克隆;RT-PCR扩增片段测定鉴定正确;挑选其中最优的克隆进行放射性配体-受体结合实验,结果显示,表达受体具有与CB2激动剂WIN55212-2特异结合的活性,其Kd和Bmax值分别(1.21±0.47)nmol.L-1和(3.12±0.7)nmol.g-1蛋白,这一结果与天然CB2的特性相似。结论建立了稳定高效表达人重组CB2的CHO-K1细胞株。
- 李素燕颜玲娣徐波宫泽辉
- 关键词：基因转染CHO细胞
- 大鼠μ阿片受体及人咪唑啉-1受体在CHO细胞中的共同稳定表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :建立共同稳定表达大鼠 μ阿片受体及人咪唑啉 1受体的哺乳动物细胞表达系统。 方法 :采用脂质体介导的方法 ,将编码大鼠 μ阿片受体和人咪唑啉 1受体的基因导入CHO细胞中 ,以放射配体 受体结合试验分析受体的表达水平 ,用cAMP积累试验分析表达受体的功能。结果 :在共同稳定表达大鼠 μ阿片受体及人咪唑啉 1受体的CHO细胞中 ,表达的 μ阿片受体对3 H 二丙诺啡 (diprenorphine)的Kd 和Bmax值分别为 (0 .2 4± 0 .0 2 )nmol/L和 (1.83±0 .13)pmol/mg蛋白 ;表达的咪唑啉 1受体对3 H 可乐定的Kd 和Bmax值分别为 (3.72± 0 .2 5 )nmol/L和 (4 3.5 9± 6 .83)fmol/10 6细胞。表达的 μ阿片受体抑制福司科林 (forskolin)刺激下cAMP的积累 ,表达的咪唑啉 1受体抑制吗啡慢性处理、纳洛酮催促引起的cAMP超射。结论 :首次建立了共同稳定表达 μ阿片受体和咪唑啉 1受体的细胞模型。
- 吴宁苏瑞斌徐波李锦秦伯益
- 关键词：CHO细胞阿片样受体
- 咪唑啉-1受体哺乳动物细胞稳定表达系统的建立被引量：3
- 2004年
- 目的 :在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞上稳定转染咪唑啉 1受体。方法 :用脂质体介导方法将I1R蛋白cDNA稳定转染到缺乏天然I1R的CHO细胞中。结果 :建立了单独稳定转染I1R而无α2 肾上腺素受体表达的细胞系 ,为独立考察I1R的功能和信号转导通路提供了理想的细胞模型。结论 :成功建立了稳定表达咪唑啉 1受体的细胞模型。
- 赵琰苏瑞斌吴宁徐波刘茵路新强李锦
- 关键词：卵巢CHO细胞转染
- 咪唑啉Ⅰ型受体候选蛋白——非G蛋白偶联受体信号转导与ERK相关被引量：1
- 2005年
- 目的:研究在咪唑啉Ⅰ型受体(imidazoline-1receptor,I1R)激动剂莫索尼定和利美尼定作用下,I1R抗体选择性蛋白(imidazolinereceptorantiseraselectedprotein,IRAS)的信号转导机制。方法:采用[35S]-GTPγS结合实验,确定IRAS是否与G蛋白相偶联;采用蛋白免疫印迹方法,研究IRAS的激活与ERK磷酸化之间的关系。结果:以稳定表达有IRAS的CHO细胞(CHO-IRAS)为实验对象研究发现,利美尼定、莫索尼定在多种实验条件下均不能提高[35S]-GTPγS结合量,表明IRAS不与G蛋白偶联,而利美尼定和莫索尼定在激活IRAS的同时,能够浓度依赖性地显著升高ERK磷酸水平,其刺激作用能被I1R拮抗剂依法克生完全拮抗。结论:IRAS不与G蛋白偶联,ERK可能是IRAS偶联的信号分子之一。
- 李斐吴宁徐波赵琰苏瑞斌李锦
- 关键词：G蛋白信号转导细胞外信号调节激酶
- 胍丁胺-咪唑啉受体作用系统调节阿片依赖的发现
- 李锦苏瑞斌吴宁李昕路新强魏晓莉刘茵李松郑建全李斐徐波
- 吸毒给中国社会、经济和公共卫生造成了严重危害。虽然在中国滥用的毒品种类较多，但从危害程度、影响范围和发展趋势来看以阿片类毒品为最。其根本原因是阿片依赖和复吸的神经生物学机制不清楚，没有理想的防阿片复吸药物。传统观点认为阿...
- 关键词：
- 关键词：阿片依赖戒毒
- μ阿片受体C末端相互作用蛋白筛选及功能研究
- 2006年
- 目的：MOR细胞内的磷酸化位点主要位于C-末端，本研究筛选细胞内与MOR的C末端有直接相互作用的蛋白，以研究其对MOR磷酸化、内吞、脱敏及复敏等过程的影响。方法：BaeterioMateh 细菌双杂交，为新发展起来研究蛋白与蛋白之间相互作用有效方法。PCR法扩增目的片断，双酶切后与载体连接。Western Blot验证蛋白表达。结果：以大鼠MOR（rMOR）cDNA为模板，PCR扩增C末端（末端340—398氨基酸）作为诱饵融合于pBT载体的入阻遏蛋白（λcI）上，命名pBT—C。Western Blot证明该诱饵蛋白表达正确。大鼠脑cDNA文库融合到pTRG载体的RNA多聚酶的α亚单位的N末端。两种重组质粒共同转入Screening Reporter报告菌后接种于选择性筛选培养基。共筛选得到154个克隆，通过双选筛选平板进一步确证为124个克隆。将双选得到的克隆与诱饵质粒分离，诱饵与阳性克隆两两共转在选择性培养基上再筛选以验证此克隆确实依赖于蛋白间的相互作用，排除自身激活作用。二次筛选确证19个阳性克隆，部分测序结果显示阳性克隆包括代谢相关氧化还原酶、肌动微管微丝形成相关蛋白、参与蛋白磷酸化的蛋白、热休克蛋白以及保守的跨膜受体等。结论：MOR的C-末端除了与蛋白激酶相互作用外，还与细胞内其他蛋白有相互作用。这就提示依赖与耐受的形成过程中可能有其他蛋白参与。
- 周培岚由振东徐波颜慧宫泽辉
- 关键词：Μ阿片受体C末端蛋白质相互作用
