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方政: 作品数：52 被引量：53H指数：4; 供职机构：南通大学医学院更多>>; 发文基金：南通市应用研究计划项目江苏省教育厅自然科学基金江苏省社会发展科技计划更多>>; 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>

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周期型马来丝虫副肌球蛋白基因克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测被引量：3: 2007年; 目的克隆周期型马来丝虫副肌球蛋白(BmPmy)基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测。方法从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,RT-PCR法体外扩增BmPmy基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化E.coli DH5a,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-T-BmPmy,经测序验证,并进行同源性比较。应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测。结果RT-PCR扩增出一条约2640bp的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与基因库已知的基因序列同源性为99%。经表位预测分析,BmPmy的B细胞表位可能在54～66位、144～152位、770～780位和834～845位氨基酸区域。结论成功构建了BmPmy重组质粒pGEM-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件。; 陈阳方政姜声扬黄为群谢东方吴建军石佑琴; 关键词：原肌球蛋白

医学形态学信息化实验教学实践与思考被引量：8: 2012年; 医学形态学教学是医学生课程学习极其重要的组成部分。与传统教学手段相结合,应用立体式、交互式、网络化教学方法,实现教学信息化,是提高医学形态学实验教学质量的重要途径。良好的信息化教学方式有利于节约教学资源,激发学生学习积极性,提高教师的工作效率和教学质量。; 方政冯愿徐邦生陈莉丁卫泽; 关键词：医学形态学信息化实验教学

周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的用途: 本发明公开了一种周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的用途，以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，扩增马来丝虫myosin基因片段，构建了周期型马来丝虫myosin真核表达重组质粒。根据测序结果分析，推测其氨基酸序列，...; 方政吴佳倩徐倩方浩张波陆施娟陶然刘芹谢东方; 文献传递

马来丝虫肌球蛋白29表位基因真核表达质粒及原核表达蛋白免疫小鼠诱导的免疫应答: 2017年; 目的观察马来丝虫肌球蛋白29(Brugia malayi myosin 29,Bm M29)表位基因真核表达质粒pc DNA3.1(+)-Bm M29和原核表达的纯化重组蛋白r Bm M29免疫小鼠诱导的免疫应答效果。方法在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21诱导表达重组蛋白r Bm M29,纯化后作为重组蛋白疫苗;纯化真核表达重组质粒pc DNA3.1(+)-Bm M29作为核酸疫苗。核酸疫苗免疫注射部位为小鼠后腿胫前肌,重组蛋白为皮下多点注射。60只BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E组,每组12只,分别注射PBS(100μg)、pc DNA3.1(+)/Cp G(100μg/30μg)、pc DNA3.1(+)-Bm M29/Cp G(100μg/30μg)、r Bm M29/Cp G(50μg/30μg)、pc DNA3.1(+)-Bm M29/r Bm M29/Cp G(前2次注射pc DNA3.1(+)-Bm M29/Cp G 100μg/30μg,第3次注射r Bm M29/Cp G 50μg/30μg),共免疫3次,每次免疫间隔2周。初次免疫后第4、6、8周,眼球摘除法采血制备血清,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性Ig G抗体效价。免疫第8周处死小鼠,制备脾细胞悬液培养48 h,ELISA检测培养上清中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。结果 ELISA检测结果显示,A、B、C、D和E组小鼠初次免疫后第4周血清中抗体的吸光度(A490值)分别为0.038±0.050、0.053±0.009、0.360±0.035、0.456±0.025、0.370±0.025,第6周分别为0.045±0.003、0.045±0.005、0.510±0.018、0.548±0.010、0.552±0.018,第8周分别为0.041±0.004、0.044±0.009、0.606±0.047、0.674±0.042、0.770±0.041,C、D、E组均高于A、B组(P<0.05),第8周时,E组Ig G抗体的A490值高于C组和D组(P<0.05)。初次免疫后第8周,A至E组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ的水平分别为(47.72±8.94)、(50.43±2.81)、(304.78±8.42)、(242.28±5.99)、(426.52±6.76)pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P<0.05),E组高于C组和D组(P<0.05);小鼠脾细胞培养上清中IL-4的水平分别为(60.00±11.14)、(57.71±15.95)、(93.17±12.56)、(96.67±11.48)、(101.17±5.81)pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P<0.05)。结论 pc DNA3.1(+)-Bm M29核酸疫苗和r; 夏瑜椰徐倩孙婷婷方浩刘蔚陆施娟方政; 关键词：马来丝虫基因疫苗蛋白疫苗

周期型马来丝虫肌球蛋白部分编码基因Bm-M55的克隆与真核表达: 根据Bm-M55基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的编码基因。用TA克隆方法将目的基因克隆至载体pGEM-TEasy中,经PCR和双酶切鉴定并测序后,亚克隆至真核表达质粒...; 方政谢东方黄为群沈勤童海燕徐邦生; 关键词：周期型马来丝虫肌球蛋白真核表达载体 COS-7细胞; 文献传递

周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆及序列分析被引量：2: 2007年; [目的]克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease of periodic Brugiamalayi,BmCP)基因到原核载体中,测定其序列,为进一步的研究奠定基础。[方法]从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增出BmCP基因序列,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pMD18-T-BmCP,经测序验证,并进行同源性比较。[结果]RT-PCR扩增出一条约1201bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%。[结论]成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶重组质粒pMD18-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件。; 黄为群方政陈阳姜声扬吴建军谢东方; 关键词：周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆

周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂复合基因真核重组质粒的构建与表达被引量：2: 2011年; 目的构建周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氰酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂（GAPDH/CPI）复合基因真核重组表达质粒,为研制复合多价疫苗奠定基础.方法依据GenBank中BmGAPDH及BmCPI基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,RT-PCR扩增目的编码基因.PCR产物经TA克降后,克隆至载体pGEM-T Easy中.取阳性重组质粒pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI以及真核重组表达载体分别双酶切,将酶切后的载体和目的片段进行连接,构建真核重组表达质粒pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI.将复合基因重组质粒瞬时转染人HeLa细胞后,进行RT-PCR验证,将表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行分析和鉴定.结果分别克隆了pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI重组质粒,经酶切鉴定分别得到877、621 bp特异性片段,与预期值吻合.成功构建了复合基因重组真核表达载体pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI,酶切鉴定所产生的片段大小与预期吻合.复合基因真核重组表达质粒转染HeLa细胞后得到高水平表达,SDS-PAGE分析显示重组蛋白相对分子质量（Mr）约为54×103.结论成功构建了周期型马来丝虫GAPDH/CPI复合基因重组表达质粒,并在哺乳动物细胞内得到正确表达.; 刘晓骏郭晓峰张赛楠陆施娟方浩徐邦生方政; 关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂 HELA细胞

简便的周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法: 本发明公开了一种简便的周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法，包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克隆的筛选和鉴定、Bm‑MYOSIN二级结...; 方政王颖颖方浩徐倩吴佳倩张波王慧陶然谢东方; 文献传递

马来丝虫肌球蛋白基因序列及编码产物预测被引量：1: 2009年; 目的克隆周期型马来丝虫肌球蛋白（BmMyosin）基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测。方法依据公布的BmMyosin基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,反转录PCR（RT-PCR）扩增目的编码基因。扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌（E.coli）DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-BmMyosin,经测序验证,并进行同源性比较。应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测。结果RT-PCR扩增出一条约1 292 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为98.45%。经表位预测分析,BmMyosin的B细胞表位可能在287-300位、339-350位和416-422位氨基酸区域。结论成功构建了周期型马来丝虫肌球蛋白重组质粒pGEM-T克隆载体,对其编码产物进行B细胞表位预测。为蛋白质特性分析及免疫学研究提供基础依据。; 谢东方方政童海燕徐邦生黄为群沈勤; 关键词：周期型马来丝虫肌球蛋白基因克隆 B细胞表位

易操作周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法: 本发明公开了一种易操作周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法，以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，扩增马来丝虫myosin基因片段，构建了周期型马来丝虫myosin真核表达重组质粒。根据测序结果分析，推测其氨...; 方政吴佳倩徐倩方浩张波陆施娟陶然刘芹谢东方; 文献传递

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