朱娟莉
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 供职机构：西安市第一医院更多>>
- 发文基金：西安市科技计划项目陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人色素上皮细胞衍生因子融合蛋白的制备及其抑制新生血管活性的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:人色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)是一种有效的新生血管形成抑制因子和神经营养因子。通过原核细胞表达人PEDF蛋白,鉴定其抑制新生血管的生物学活性。方法:采用PCR法扩增人PEDFcDNA,将其克隆到pET32a载体中,在大肠杆菌BL21中表达人PEDF蛋白。经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,镍柱亲和层析法变性条件下纯化重组融合蛋白。Bradford法测蛋白浓度,采用鸡胚脲囊膜法测其对新生血管形成的影响。结果:成功构建了pET32a-PEDF表达载体。重组人PEDF蛋白在BL21宿主菌中获得了稳定高效表达,鸡胚脲囊膜实验结果显示在重组蛋白浓度为0.4、0.04 ng/ml时均有对新生血管的显著抑制作用(P<0.01),而在4 ng/ml时无抑制作用。结论:成功高效表达及纯化了重组人PEDF蛋白,鉴定其抑制新生血管的生物学活性,并且证实该活性在一定范围内有效,为进一步研究其功能及推广应用奠定了基础。
- 王亚妮刘先宁朱娟莉安娜朱秀萍
- 关键词：原核表达新生血管
- 半巢式PCR扩增联合基因测序鉴定丝状真菌的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的 采用分子生物学方法鉴定痰标本培养分离出的丝状真菌菌种.方法 收集陕西省人民医院检验科2012年2月～5月痰标本分离的丝状真菌菌落20份,采用半巢式PCR联合基因测序法及形态学方法同时鉴定菌种.结果 基因测序法：烟曲霉菌13株,黑曲霉菌3株,土曲霉菌1株,绿色木霉1株,娄地青霉菌1株,淡紫拟青霉菌1株.形态学方法：17株曲霉菌与基因序列分析法结果一致,其余3例未能鉴别出菌种.结论 半巢式PCR扩增联合基因测序鉴定丝状真菌快速、简便、准确,可克服传统表型法鉴定真菌的缺点.
- 刘先宁胡淑玲安娜王亚妮朱娟莉朱秀萍
- 关键词：痰标本丝状真菌
- 基因序列法对50例真菌性角膜溃疡的病原学鉴别及种属分析
- :应用基因序列法对50 例真菌性角膜溃疡进行病原学鉴别并分析其种属分布.方法:收集50 例真菌性角膜溃疡及3 种真菌标准菌株培养物,分别提取基因组DNA,半巢式PCR扩增18S rRNA ITS2 区,扩增产物经测序后,...
- 刘先宁王亚妮安娜朱秀萍朱娟莉
- 真菌性角膜炎致病菌种属的PCR鉴定被引量：9
- 2010年
- 目的通过对核糖体18S rRNA基因内部转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列的PCR鉴定,建立快速、准确地鉴定真菌性角膜炎致病真菌种属的方法。方法采用眼科常见5种致病菌标准菌株;镜检确诊真菌阳性的角膜炎临床标本29例,其中真菌培养阳性15例,真菌培养阴性14例。所有标本均采用液氮研磨结合小玻璃珠振荡法破碎真菌细胞壁,提取真菌基因组DNA,并以此为模板PCR扩增其18S rRNA基因ITS保守区序列,进行基因测序后在基因库中查询致病菌的种属,与镜检结果比对。结果禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、燕麦镰刀菌、烟曲霉、白色念珠菌等5种标准菌株培养物和29例临床真菌样本（包括15例真菌阳性培养物和14例真菌培养阴性的角膜病变组织样本）,各5mg样品中提取的DNA样品的浓度在1.7~22.5mg·mL-1。PCR扩增后5种标准菌株均有目的条带,15例真菌阳性培养物也均有目的条带,14例真菌培养阴性的角膜病变组织样本有2例有目的条带,其余12例没有目的条带。标准菌株的PCR鉴定阳性率100%,镜检确诊真菌阳性的临床样本PCR阳性率58.6%,高于真菌培养法鉴定的阳性率51.7%。PCR产物进行基因测序后在基因库中查出了致病菌的种属,检索结果与镜检结果完全一致。结论通过核糖体18S rRNA基因ITS序列PCR鉴定真菌性角膜炎致病菌的方法特异性强,灵敏度较传统的培养加镜检法更高。若能改进从角膜病变组织中提取真菌基因组DNA的方法,其灵敏度还能进一步提高。
- 安娜王亚妮刘先宁朱娟莉朱秀萍吴洁
- 关键词：真菌性角膜炎PCR
- 17α-己酸羟孕酮对人外周血单个核细胞抵抗地塞米松的逆转作用研究
- 2014年
- 目的探讨17α-己酸羟孕酮对外周血单个核细胞抵抗地塞米松的逆转作用。方法分离健康男性外周血单个核细胞,利用白介素2(IL-2)和IL-4以及植物血凝素刺激外周血单个核细胞,建立地塞米松抵抗的炎症细胞实验模型;单用地塞米松和地塞米松与17α-己酸羟孕酮联合应用于该模型,酶联免疫吸附法检测细胞的IL-2值的改变。结果地塞米松对植物血凝素诱导人外周血产生的IL-2呈现显著的浓度依赖性的抑制作用;用IL-2(13ng·mL-1)和IL-4(6.5ng·mL-1)刺激,再用植物血凝素(15μg·mL-1)刺激外周血单个核细胞可以作为评价地塞米松抵抗的细胞实验模型;在17α-己酸羟孕酮的浓度为10-11,10-10,10-7和10-5 mol·L-1时,可显著提高地塞米松对人外周血产生的IL-2的抑制率,降低地塞米松的IC50(半数抑制浓度)值至少100倍以上。结论 17α-己酸羟孕酮逆转外周血单个核细胞对地塞米松的抵抗,可作为地塞米松等糖皮质激素的增敏剂。
- 汪耀王养正Changqing Lee肖湘华杨华刘先宁安娜朱娟莉朱秀萍
- 关键词：地塞米松糖皮质激素抵抗外周血单个核细胞
- 基因扩增联合测序法对痰标本分离的60株真菌病原学鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的:应用PCR扩增真菌ITS2区基因,结合基因测序法对痰标本中分离的60株真菌进行病原学鉴别。方法:收集痰标本分离的真菌菌落60份及2种真菌标准菌株(白色念珠菌,烟曲霉菌)培养菌落,分别提取基因组DNA,半巢式PCR扩增ITS2区,扩增产物经测序后,结果与NCBI基因库中的核酸序列进行比对,确定致病菌的种属,并对其分布特征进行分析。结果 :2种真菌标准菌株的ITS2区基因序列比对结果与种属一致。痰标本中60株真菌测序鉴定结果为:曲霉菌属24株(其中烟曲霉菌17例、黑曲霉菌3例、黄曲霉菌2例、土曲霉菌1例、变色曲霉1例),青霉菌属3株(小刺青霉菌1株、娄地青霉菌1株、产黄青霉菌1株),念珠菌属29株(白色念珠菌20株、热带念珠菌3株、近平滑念珠菌2株、光滑念珠菌2株、鲁西坦念珠菌1株、季也蒙毕赤酵母菌1株),其它丝状菌还有暗孢节菱孢菌2株,淡紫拟青霉菌1株和串珠状赤霉菌1株。结论:基因测序法能快速、简便、准确地鉴别痰培养的真菌种属,为本地区呼吸道真菌性疾病病原菌流行病学调查及个性化治疗奠定基础。
- 胡淑玲安娜刘先宁张利侠王亚妮朱娟莉朱秀萍
- 关键词：基因扩增真菌病原
- 半巢式PCR扩增ITS2区对50例真菌性角膜溃疡的病原学鉴别被引量：1
- 2012年
- 目的应用半巢式PCR扩增ITS2区方法对50例真菌性角膜溃疡患者进行病原学鉴别，探讨其应用价值。方法收集50例真菌性角膜溃疡患者及3种真菌标准菌株培养物，分别提取菌株基因组DNA，半巢式PCR扩增ITS2区，扩增产物经测序后，结果与NCBI基因库中的核酸序列进行比对，确定致病菌的种属，并进一步对其分布特征进行分析。结果3种真菌标准菌株的测序结果与基因库中一致。50例真菌角膜溃疡患者主要致病菌依次为：镰刀菌属感染24例（其中茄病镰刀菌感染17例，尖孢镰刀菌感染6例，串珠镰刀菌感染1例），占48％；曲霉菌属感染10例（其中黄曲霉感染5例，聚多曲霉感染3例，构巢曲霉感染2例），占20％；青霉菌属感染6例（其中黄绿青霉菌感染2例，多色青霉菌感染2例，草酸青霉菌感染2例），占12％；念珠菌属感染5例（其中白念珠菌感染3例，近平滑念珠菌感染2例），占10％；枝孢霉菌属感染3例（其中草本枝孢霉感染2例，枝状枝孢霉感染1例）；粗糙链孢霉感染1例；互隔交链孢霉菌感染1例。结论半巢式PCR扩增ITS2区能快速、简便、准确地鉴别诊断真菌性角膜溃疡，为个性化治疗及本地区真菌的流行病学调查奠定基诋。
- 王亚妮安娜刘先宁朱娟莉朱秀萍吴洁
- 关键词：角膜溃疡聚合酶链反应
