李传峰
- 作品数：98 被引量：209H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 兔病毒性出血症病毒突变株及其构建方法、用途
- 本发明公开了一株兔病毒性出血症病毒突变株及其构建方法、用途；所述兔病毒性出血症病毒突变株，含有基因组编码的衣壳蛋白VP60，次级结构蛋白VP10和非结构蛋白p11、p28、p35、p32、VPg、3C样蛋白酶和RNA依赖...
- 刘光清朱杰孟春春李传峰陈宗艳
- 文献传递
- SYBR Green II荧光定量PCR结合熔解曲线鉴别不同亚型兔病毒性出血症病毒方法的建立被引量：2
- 2017年
- 本研究建立了一种荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR)结合熔解曲线区分不同亚型兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)方法。根据GenBank数据库中已公布的不同亚型RHDV(经典RHDV和RHDV2)的衣壳蛋白VP60序列保守区设计了1对特异性引物,利用SYBR Green II荧光染料,在实时荧光定量PCR方法的基础上结合熔解曲线进行分析,经典RHDV和RHDV2熔解温度(Tm)分别为(86.3±0.1)℃和(85.1±0.1)℃,扩增产物的熔解曲线分析均只出现单特异峰。结果表明,本研究建立的方法能够快速地鉴别经典RHDV和RHDV2。
- 谭永贵刘腾朱杰郭慧敏吴巧梅李琦缪秋红陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：兔病毒性出血症病毒荧光定量PCR熔解曲线
- 犬细小病毒SH14株的分离鉴定及其VP2基因序列分析
- 引言 犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)是感染犬的重要病原之一,主要危害幼犬,特别是2月龄至6月龄幼犬.主要表现为急性出血性胃肠炎和幼犬急性心肌炎.CPV传染性强,发病率和病死率高,给我国养犬业带来...
- 唐井玉李传峰陈宗艳孟春春王权刘光清
- 基于荧光定量PCR熔解曲线法的DHAV分型检测法
- 本发明公开一种基于荧光定量PCR熔解曲线法的DHAV分型检测法：病毒RNA的提取和cDNA合成；阳性标准模板的制备；基于荧光定量PCR熔解曲线法的甲型鸭肝炎病毒分型检测方法的建立；方法验证：特异性试验、敏感性试验、重复性...
- 刘光清孟春春黄云秀李传峰陈宗艳
- 新型鸭细小病毒SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：4
- 2020年
- 本研究以新型鸭细小病毒VP3基因保守区域克隆至pMD19-T载体上获得的阳性质粒作为标准阳性质粒,建立一种检测新型鸭细小病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。结果显示:在5.17×10^1~5.17×10^7拷贝数呈良好的线性关系,相关系数R^2为0.999、斜率为3.595,灵敏度可达到5.17拷贝数;该方法用于检测鸭常见传染病呼肠孤(DRV)、禽流感(AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭病毒性肝炎(DHV)、鸭星状病毒(DAstV)无非特异性扩增,特异性良好;对安徽、山东、江苏等地鸭场采集的疑似病料进行初步检测,发现48份样品中阳性率达70.8%,与普通PCR方法检测结果相比,本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法更灵敏。本研究成功建立了一种检测新型鸭细小病毒SYBR GreenⅠ荧光定量方法,为新型鸭细小病毒的监测奠定了坚实基础。
- 周洁文周洁文戚睿斌朱杰朱杰李传峰郭鑫
- 羊口疮病毒F1L融合Fe蛋白的表达与鉴定被引量：2
- 2020年
- 本研究克隆了羊口疮病毒安徽分离株的F1L基因,融合Fe蛋白编码基因后,插入载体pET-32a中,构建了重组质粒pET-F1L-Fe。将pET-F1L-Fe转化BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达重组蛋白F1L-Fe。SDS-PAGE分析结果显示,羊口疮病毒F1L-Fe基因在BL21(DE3)获得了正确表达。将大量表达的F1L-Fe蛋白进行纯化,然后免疫BALB/c鼠,制备了抗F1L蛋白的多克隆抗体。最后,以制备的多克隆抗体对F1L-Fe融合蛋白进行Western-blot检测和分析,结果表明F1L-Fe蛋白能与制备的多克隆抗体发生特异性反应,具有良好的反应原性。本研究结果为进一步研发羊口疮病毒亚单位疫苗提供了物质基础。
- 邢雪王元红李传峰缪秋红曹昳王桂军刘光清
- 关键词：羊口疮病毒多克隆抗体
- 基于猫细小病毒VP2蛋白B细胞抗原表位的间接ELISA方法的建立与应用
- 2022年
- 为建立一种检测猫细小病毒抗体的间接ELISA方法,将猫细小病毒VP2蛋白共有的多个B细胞抗原表位进行串联表达为重组蛋白并纯化作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时比较了间接ELISA方法的其他反应条件。结果显示,抗原包被量为8μg/m L,血清最佳稀释度为1∶400,二抗的最佳工作稀释度为1∶10000;TMB底物显色液37℃避光显色反应15 min。特异性试验结果显示,同猫杯状病毒和猫疱疹病毒阳性血清均无交叉反应。此方法对猫细小病毒阳性血清的敏感性为1∶5120,组内、组间变异系数均小于10%。与包被全病毒的方法平行比较,显示其检测阴阳性血清的值高度一致。结果表明,基于猫细小病毒串联表达的VP2蛋白B细胞抗原表位建立的间接ELISA方法适合临床样本的检测,为猫瘟的防控工作提供了技术支撑。
- 王真真汤傲星刘春草宋若楠贾楠楠杜汉宇李娜朱杰朱杰李传峰刘光清王金泉
- 关键词：猫细小病毒VP2蛋白间接ELISA
- 甲型鸭肝炎病毒2A蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2014年
- 采用RT-PCR方法从甲型鸭肝炎病毒ZJ-V株的RNA模板中扩增出2A基因,将其克隆到表达载体pET-30(+)中,经酶切和测序鉴定后转化表达宿主菌BL21(DE3)细胞中,以IPTG诱导表达His-DHAV-2A融合蛋白.结果表明:目的蛋白在1mmol/L IPTG诱导4h的情况下以可溶性形式表达.表达产物经Ni柱纯化后获得了高纯度的融合蛋白.以纯化后的His-DHAV-2A融合蛋白为抗原免疫白兔制备多抗,Western-blot试验表明制备的多抗可与目的蛋白发生特异性反应.以上结果说明,DHAV的2A蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的多抗血清可用于2A蛋白的表达检测.
- 胡文孟春春李传峰陈宗艳梁瑞英李宁黄云秀吴润刘光清
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- J亚群禽白血病毒gp85基因表达及初步应用被引量：1
- 2011年
- J亚群禽白血病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)的囊膜糖蛋白GP85是亚群特异性抗原。将ALV-J的gp85基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)EcoRⅠ和SalⅠ两个酶切位点之间,经IPTG诱导在大肠杆菌中以His-Tag融合蛋白的形式获得了高效表达,Western blot显示该表达产物具有生物学活性。GP85蛋白经纯化、复性后免疫家兔,制备了抗ALV-J GP85的多克隆抗体。以纯化的蛋白为抗原包被ELISA检测板,对疑似血清样本进行了实验室检测,检出率较高。本研究为ALV-J的诊断和流行病学调查奠定了基础。
- 张伟伟杨宗伟陈宗艳王超李传峰刘光清
- 关键词：囊膜糖蛋白ELISA
- 绵羊BST-2B基因的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2017年
- 为了表达含有绵羊BST-2B(o BST-2B)基因的重组蛋白,用RT-PCR方法扩增绵羊肺细胞的o BST-2B基因,并将其克隆至原核表达载体p GEX-4T-1中,构建重组表达质粒p GEX-4T-o BST-2B。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组o BST-2B蛋白。将表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗o BST-2B的多克隆抗体。蛋白免疫印迹分析和间接免疫荧光试验检测结果显示,该抗体具有较好的反应原性。本试验成功制备的o BST-2B蛋白及多克隆抗体,为研究o BST-2B蛋白的生物学功能及羊传染病的致病机制提供了良好的基础材料。
- 刘腾张莉谭永贵郭慧敏朱杰缪秋红李传峰陈宗艳刘光清
- 关键词：原核表达多克隆抗体
