李文玉
- 作品数：18 被引量：58H指数：4
- 供职机构：潮州市中心医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金广东省卫生厅资助课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 潮州地区人乳头瘤病毒52型E6多态性分析
- 目的 PCR扩增潮州地区人乳头瘤病毒(HPV)52型E6编码区序列,并进行测序和多态性分析。方法提取HPV52单纯感染者宫颈脱落细胞DNA,通过特异性引物扩增HPV52-E6编码区全序列,测序及BLAST多态性分析。结果...
- 罗招云陈强杨立业林敏李文玉詹小芬陈默蕊
- 人类胚胎肌肉细胞体外自发恶性转化抑癌基因的改变
- 2008年
- 目的:研究人类胚胎肌肉源性自发恶性转化细胞系抑癌基因的改变.方法:运用免疫组化、PCR,PCR产物直接测序研究该类细胞系抑癌基因p16,p15,MTAP(甲硫氨酸磷酸化酶)和p53基因及蛋白的改变.结果:在染色体9p21处存在纯合性片段缺失,包括p16,p15及MTAP;对p53基因突变率高发的外显子7,8及内含子7测序发现存在范围较大的突变,外显子突变率高达13%,皆为点突变,而内含子变异更甚,包括小片段缺失、插入、移位及点突变,其几与正常p53序列无明显相似性,在测序的6个细胞系中(含5个不同遗传背景)突变序列具有高度一致性.结论:多种抑癌基因的变异在正常胚胎肌肉细胞自发恶性转化进程中具有重要的作用.
- 王宪耀李文玉陈强郑佳坤周海鹰黄革马廉林广裕黄天华杨立业
- 关键词：恶性转化肉瘤染色体9P21P53基因
- 潮州地区人乳头瘤病毒型别分布特征分析被引量：27
- 2011年
- 目的研究潮州地区人乳头瘤病毒(HPV)感染率及型别分布特征,确定本地区的优势型别。方法采用实时荧光定量PCR和核酸分子快速导流杂交分型技术(HybriMax)对49458名参加新农村合作医疗"宫颈癌筛查项目"的妇女进行HR-HPV检测及分型来筛查宫颈癌。结果潮州地区妇女HR-HPV感染率为8.25%,15种高危亚型(HR-HPV)阳性率94.49%,6种低危亚型(LR-HPV)阳性率5.51%,感染率最高亚型是HPV52(28.86%),其次为16、58、68、33和18型,均为HR-HPV。LR-HPVCP8304感染率是4.71%。结论本地区人群感染HPV优势型别为HPV52。
- 罗招云杨立业翁妙珊林敏李文玉彭幼鹏
- 关键词：人乳头瘤病毒基因分型宫颈癌
- 体外无血清培养基条件下诱导人骨髓基质细胞为神经干细胞的特征(英文)被引量：2
- 2007年
- 背景:体外诱导骨髓基质细胞向神经元样细胞分化的方法主要是应用抗氧化剂如β-巯基乙醇、全反式维甲酸、丹参等,这些诱导方法分化的主要是神经元样细胞,这种细胞是否具有神经元的功能有待进一步观察。目的:观察体外无血清培养基条件下人骨髓基质细胞向神经细胞分化的特点。设计:观察实验。单位:潮州市中心医院。材料:实验于2004-04/2005-12在潮州市中心医院完成。成人骨髓来源于3例骨折患者的股骨和胫骨骨髓,获得患者及其家属的同意及潮州市中心医院伦理委员会批准。重组人碱性成纤维细胞生长因子和重组人表皮生长因子为Sigma公司产品;鼠抗波形蛋白单克隆抗体、鼠抗S100单克隆抗体、鼠抗TrkC单克隆抗体、鼠抗髓鞘基础蛋白单克隆抗体、SP-9000试剂盒和即用型AEC为北京中山公司产品;鼠抗GFAP单克隆抗体、兔抗巢蛋白多克隆抗体、鼠抗神经元特异性烯醇化酶单克隆抗体和鼠抗神经微丝200单克隆抗体在武汉博士德公司购买;鼠抗βⅢ管蛋白单克隆抗体为Sigma公司产品。方法:在手术骨折内固定过程中获得成人骨髓,缓冲液冲洗后分离细胞,原代培养的细胞融合时传代培养,细胞种植在神经干细胞的N2培养基或B27培养基,同时加入20μg/L的碱性成纤维细胞生长因子及表皮生长因子,放入含体积分数0.05CO2的培养箱中37℃常规培养,相差显微镜下观察骨髓基质细胞在无血清培养基中的形态变化,培养2d后采用免疫细胞化学方法检测骨髓基质细胞的神经细胞相关标志物的表达。主要观察指标:骨髓基质细胞的形态变化及神经细胞相关标志物的表达。结果:①从成年人的骨髓中分离出骨髓基质细胞,在体外生长形态类似成纤维细胞,可以维持在未分化状态稳定增殖,体外扩增可超过10代。骨髓基质细胞在无血清神经干细胞的培养基中生长状态类似神经干细胞,可�
- 杨立业李文玉郑佳坤陈强汪朝阳林小聪
- 关键词：神经干细胞骨髓基质细胞分化神经元
- 一种新的肉瘤细胞系及其建立方法和应用
- 本发明涉及一种新的肉瘤细胞系的建立方法、由该方法得到的肉瘤细胞系以及该肉瘤细胞系的应用。所述新的肉瘤细胞系的建立方法为(1)将胚胎肌肉细胞进行原代培养，用组织块培养法或酶消化培养法；(2)细胞生长至融合时进行传代培养；(...
- 杨立业郑佳坤陈强黄天华李文玉温建成刘桂英张松
- 文献传递
- 脂肪组织来源的干细胞体外培养随机恶性转化
- 2013年
- 目的研究脂肪来源干细胞在体外能否恶性转化。方法从小鼠脂肪组织培养出脂肪组织来源干细胞(ADSCs),观察细胞是否发生恶性转化,应用免疫细胞化学方法检测转化细胞的相关标志物的表达,并对其染色体结构进行分析,并将转化细胞移植到裸鼠皮下以检测其成瘤性。结果 1个培养瓶中的细胞在体外培养4个月左右发生了转化,已经永生化,目前体外培养超过100代,细胞仍维持原来的增殖速度。细胞表达中胚层的标志物vimentin,但不表达pan-CK,说明其是间充质来源;同时表达PCNA、Ki67和VEGF-c,不表达p16;染色体分析证明为非整倍体,有广泛的易位;透射电镜下可见细胞表面微绒毛结构;细胞在软琼脂中没有克隆形成能力;裸鼠皮下移植能够形成肿瘤组织,肿瘤组织的主体成分为肉瘤。结论脂肪组织来源的干细胞在体外长期培养能够发生恶性转化,裸鼠皮下移植能够形成肉瘤。
- 刘桂英杨立业李文玉郑佳坤陈辉陈强
- 关键词：肉瘤脂肪组织来源干细胞恶性转化干细胞永生化
- 潮州地区高危型HR-HPV感染与子宫颈病变的关系被引量：4
- 2011年
- 目的探讨潮州地区高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染与子宫颈病变的关系。方法采用实时荧光定量PCR技术对潮州农村35～60周岁的妇女进行HR-HPV检测,对HR-HPV阳性妇女进行核酸分子快速导流杂交分型技术(HybriMax)和液基薄层细胞学(LCT)检查,对低级别鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)及以上患者行阴道镜下组织病理学活检确诊。结果潮州地区妇女HR-HPV感染率为8.25%(4 080/49 458)。发现15种HR-HPV,感染率最高的型别是HPV52,其次为HPV16、58、68、33和18型。HPV16、HPV59和混合型感染者子宫颈病变较严重,与其他型别感染者子宫颈病变程度差异有显著性(P<0.05)。结论潮州地区人群感染HR-HPV优势型别为HPV52,HR-HPV不同型别与子宫颈病变严重程度密切相关。
- 罗招云杨立业林敏李文玉
- 关键词：子宫颈肿瘤高危型人乳头瘤病毒基因分型
- 人类皮肤来源前体细胞的表型和特征
- 2013年
- 背景:研究证实,从人类的皮肤中成功分离出皮肤源性前体细胞并在体外长期培养,可分化为神经元、胶质细胞、平滑肌细胞以及具有周围神经元表型的细胞和许旺细胞。目的:进一步证实人皮肤组织来源的多能干细胞的培养方法和多方向分化能力,尤其向神经细胞、成骨细胞分化的可能性。方法:采用胰蛋白酶消化法培养人皮肤组织来源的前体细胞,应用免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定。取三四代的细胞分别进行神经元诱导分化、成骨细胞诱导分化、von Kossa法钙染色、软骨细胞诱导分化、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色及苏丹黑染色。观察皮肤来源的前体细胞巢蛋白、波形蛋白、βⅢ管蛋白、S100及Ⅱ型胶原的表达。结果与结论:用胰蛋白酶消化法培养出人皮肤组织来源的前体细胞,增殖聚集能够形成悬浮的细胞球,在培养的不同时间都可检测到巢蛋白阳性的细胞。培养的全部细胞表达波形蛋白,在贴壁的细胞中也能检测到βⅢ管蛋白的表达。利用丹参诱导皮肤源性前体细胞向神经元样细胞分化,表达神经细胞的标志物。应用成骨细胞诱导,von Kossa染色发现培养皿中有黑色的钙化结节产生,说明皮肤源性前体细胞能够分化为成骨细胞;将皮肤源性前体细胞向软骨细胞诱导,甲苯胺蓝染色强阳性,部分细胞表达Ⅱ型胶原,证明分化的细胞中含有软骨细胞。实验结果证实,皮肤中存在的多能干细胞能够分化为成骨细胞、软骨细胞、许旺细胞和少突胶质细胞。
- 刘桂英杨立业李文玉郑佳坤
- 关键词：多能干细胞表型成骨细胞软骨细胞许旺细胞
- 人类胚胎来源成肌细胞的培养和鉴定被引量：2
- 2013年
- 背景:人类胚胎骨骼肌含有成肌细胞,其在体外条件下的培养及在体外能否融合形成肌管,以及表达的相应的标志物,目前尚不明确。目的:验证源于人类胚胎骨骼肌的成肌细胞在体外条件下的培养条件,能否在体外融合形成肌管,能否表达神经细胞的标志物。方法:采用组织块培养法对人类胚胎肌肉来源的成肌细胞进行原代培养,以免疫细胞化学染色检测培养的细胞肌肉细胞标志物desmin、myogenin、平滑肌肌动蛋白、myosin和神经细胞标志物β-tubulinⅢ、nestin、neurofilament200(NF200)、胶质纤维酸性蛋白的表达。结果与结论:从人类胚胎肌肉组织中成功培养出成肌细胞,表达成肌细胞的标志物desmin和myogenin,同时也表达神经元特异性烯醇化酶、nestin和NF200,细胞能够在体外融合形成含有多个细胞核的肌管,融合的肌管可以表达NF200、β-tubulinⅢ和胶质纤维酸性蛋白等神经细胞的标志物。结果证实,人类胚胎肌肉来源的成肌细胞能够同时表达神经细胞和肌肉细胞的标志物,培养的成肌细胞和肌管细胞表达神经元特异性烯醇化酶、β-tubulinⅢ、nestin、NF200和胶质纤维酸性蛋白。说明这几种神经细胞标志物不能用于肌肉来源的细胞向神经细胞跨分化的鉴定研究。
- 刘桂英杨立业李文玉郑佳坤陈强
- 关键词：干细胞成肌细胞胚胎肌管胶质纤维酸性蛋白神经元特异性烯醇化酶
- 人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元样细胞的体外研究被引量：14
- 2006年
- 目的探讨人脂肪组织来源的基质细胞(adiposetissue-derivedstromalcells,ADSCs)向神经元样细胞分化的可能性,为神经移植探索新的细胞来源。方法采用胶原酶消化法分离培养成人的ADSCs,含血清的培养基进行培养,胰蛋白酶消化传代,采用第3～9代的ADSCs进行诱导。应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,诱导其向神经元样细胞和脂肪细胞分化,采用苏丹黑B和免疫细胞化学方法对ADSCs进行鉴定。结果成功培养出ADSCs来源的基质细胞,细胞在体外生长形态类似成纤维细胞,可维持在未分化状态并稳定增殖,体外扩增可达20代。细胞表达波形蛋白和巢蛋白,大部分细胞还表达平滑肌肌动蛋白和β管蛋白;应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,可诱导ADSCs向神经元样细胞和脂肪细胞分化,其中0.1%～0.2%的细胞分化为神经元样细胞,40%～50%分化为脂肪细胞。分化的神经元样细胞具有典型的神经元形态,并能表达神经元标志物;部分分化的神经元样细胞仍然表达平滑肌肌动蛋白。结论脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的基质细胞,并能克服间充质细胞的限制,分化为神经元样细胞,但这种细胞是否为有功能的神经元,还需深入研究。
- 杨立业郑佳坤汪朝阳林小聪李文玉许曼丹
- 关键词：分化神经元样细胞
