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李晓
作品数:
2
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供职机构:
华中科技大学同济医学院
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发文基金:
湖北省卫生厅科研基金
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相关领域:
生物学
医药卫生
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合作作者
侯晓华
华中科技大学同济医学院
陶晓南
华中科技大学同济医学院
罗文娟
江西省妇幼保健院
谢军平
华中科技大学同济医学院
熊亮
卫生部
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谢军平
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陶晓南
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李晓
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侯晓华
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年份
2篇
2009
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小鼠骨髓源性树突状细胞体外诱导培养方法的比较研究
2009年
目的探讨最佳体外诱导培养小鼠成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)的方法。方法分离、纯化6周龄C57BL/6小鼠骨髓单核细胞,以含10%胎牛血清、20ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)和10ng/ml重组小鼠白细胞介素-4(IL-4)的RPMI-1640培养基培养7d,然后将细胞分成对照未刺激组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激组和TNF-α+脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激组。继续培养48h后,观察各组细胞形态,检测IL-12、IL-6浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86和MHC II。结果培养9d后,两刺激组培养的细胞经相差显微镜观察有DC生长。TNF—α刺激组细胞培养上清液中IL-6、IL-12含量显著高于对照组(P〈0.01),但显著低于TNF—α+LPS刺激组(P〈0.05)。3组均高表达CD11c,各组间无显著差异;而CD80、CD86和MHC II表达阳性率TNF-α刺激组显著高于对照组(P〈0.01),TNF-α+LPS刺激组显著高于单纯TNF—α刺激组(P〈0.05)。结论联合使用TNF-α与LPS刺激可使DC成熟度提高,分泌IL-6、IL-12增加。
谢军平
罗文娟
李晓
熊亮
侯晓华
陶晓南
关键词:
树突状细胞
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
白介素-4
肿瘤坏死因子-Α
脂多糖
重组腺病毒载体Ad5-EGFP感染人树突状细胞的研究
2009年
目的探讨重组腺病毒载体AdS—EGFP感染人树突状细胞(dendritic cell,DC)的最佳条件。方法采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞(PBMC),再以黏附法分离出单核细胞,加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)、重组人白细胞介素-4(rhIL-4)、重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)等细胞因子诱导培养出DC,动态观察细胞形态,流式细胞仪检测其表面标志。AdS—EGFP以梯度感染复数值(MOI)10、100、200、400、600、800、1000pfu/cell感染人DC,于感染后24、48h,荧光倒置显微镜观察增强的绿色荧光蛋白(EGFP)表达,KS400型图像分析仪测定感染后48h的感染效率。结果MOI从10-800pfu/cell时,EGFP阳性细胞数量逐渐增多,感染效率和病毒滴度呈量效关系,当MOI为800pfu/cell时可获得较佳的感染效率,EGFP阳性细胞数量达到峰值,感染率达到95.25%。结论Ad5-EGFP是感染人DC的较理想载体,通过选择恰当的MOI值能提高细胞对重组腺病毒的摄人,从而提高感染效率。
谢军平
罗文娟
侯晓华
熊亮
李晓
陶晓南
关键词:
基因转导
树突状细胞
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