李碧
- 作品数：13 被引量：48H指数：4
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划国家现代农业产业技术体系建设项目四川省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- PRRSV体外感染Marc-145细胞对NF-κB p65/p50转录时相及核易位的影响
- 2013年
- 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染对细胞核转录因子-κB(NF-κB,p65/p50)mRNA转录时相及核易位的影响,探讨PRRSV感染导致的免疫抑制与NF-κB的活化异常是否有一定的相关性,运用实时荧光定量PCR技术对PRRSV感染Marc-145细胞不同时期NF-κB p50、p65mRNA的转录水平变化进行定量分析,并提取不同感染时期Marc-145细胞核蛋白,利用免疫印迹法检测细胞核内具有活性的p50、p65水平变化。荧光定量结果表明,Marc-145细胞感染PRRSV后第8～12小时,p50、p65转录水平急剧下调,第12～120小时p50、p65mRNA含量一直维持在较低水平,与接毒前及对照组同时期的转录水平相比,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。免疫印迹结果表明,Marc-145细胞感染PRRSV后第12～96小时,细胞核内均未检测到p50的表达;感染后第12小时,细胞核内p65表达下调,第48～96小时未检测到p65的表达。可见,PRRSV体外感染Marc-145细胞能够抑制NF-κB p65/p50mRNA的转录及核易位。以上结果支持PRRSV感染早期无力的先天性免疫应答可能与NF-κB活化水平的低下有关的观点,为进一步研究PRRS的感染机制及NF-κB的功能提供新的思路和依据。
- 王潇娣朱玲周远成陈蕾李碧蔡雨函徐志文
- 关键词：转录时相
- 抵抗素与脂多糖对猪肺泡巨噬细胞炎性细胞因子的表达调控及分子机制研究
- 猪传染性胸膜肺炎由胸膜肺炎放线杆菌（A.pleuropneumoniae）引起,是严重危害我国养猪业健康发展的重要疫病之一。近年研究发现,造成胸膜肺炎严重肺损伤的主要病理学机制是由A.pleuropneumoniae或A...
- 李碧
- 关键词：抵抗素猪肺泡巨噬细胞炎性细胞因子
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立及临床应用被引量：21
- 2015年
- 根据Gen Bank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的N基因,针对其保守序列,设计并合成1对引物,可特异性扩增长度为590 bp目的条带,成功建立了检测TGEV的RT-PCR方法。以等量同一浓度的同一TGEV阳性病毒液进行重复性试验,其3次扩增特异性条带大小均为590 bp。以猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV),猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)进行特异性试验,其结果显示仅TGEV扩增得到预期特异性目的条带。以TGEV阳性病毒液提取的c DNA用紫外分析仪确定核酸质量浓度为1 g/L后,用dd H2O按10倍稀释,稀释度为10-1~10-5,其均能扩增出590 bp特异性条带。在猪传染性胃肠炎高发季节的2013年9月至2014年1月对四川成都、德阳、绵阳、遂宁、南充各地猪场送检的疑似猪传染性胃肠炎感染病猪的临床样品15份,进行检测,其猪传染性胃肠炎阳性率为100%。并且对四川成都、德阳、绵阳、遂宁、南充各地猪场保育舍随机采集的1~10周龄仔猪临床样品500份,进行检测,其1~2周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为17%,病死率为100%,3~4周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为14%,病死率为78.6%,5~6周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为9%,病死率为44.4%,7~8周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为4%,病死率为25%,9~10周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为1%,病死率为0%。从地区来看,在这500份样品中,成都、德阳、绵阳、遂宁、南充地区此病的阳性率分别为15%,6%,10%,6%,8%。以上结果显示所建立的TGEV RT-PCR检测方法,重复性好,特异性强,敏感性高,可用于该病的临床诊断。
- 王黎李碧周远成朱玲徐志文郭万柱
- 关键词：N基因RT-PCR
- 伪狂犬病毒gE、gI和US9三基因缺失株的构建
- 2017年
- 伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)是一种疱疹病毒,在自然界具有极广泛的宿主类群,是中国养猪业发展主要威胁之一。为了研究病毒的神经传导机制,实验采用Lipofectamine3 000转染试剂,将PP63质粒与伪狂犬病毒Fa株基因组DNA共转染BHK-21细胞,空斑筛选得到gI/gE/US9重组缺失病毒,并命名为SA215-T。采用PCR、基因测序、Western Blot、电镜检查和生长曲线测定等方法检测重组病毒PRV-SA215-T。研究结果显示,Western Blot未发现gE基因的表达,SA215-T株的电镜形态与野毒株无明显差异,SA215-T株与亲本毒株Fa株在细胞中的生长曲线差异不明显且均达到了较高的病毒滴度。
- 樊毅李碧郭万柱李萍黄剑波杨凡姜子义赵军许思遥邓益超殷玥毛汐语吕雯婷徐志文朱玲
- 关键词：重组病毒基因缺失
- 奶牛隐性乳房炎三种致病菌的多重PCR检测方法的建立被引量：7
- 2019年
- 为建立快速并能同时检测无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌3种奶牛隐性乳房炎致病菌的方法,根据无乳链球菌16S r RNA基因、金黄色葡萄球菌NUC耐热基因、绿脓杆菌ETA基因序列并参考文献各合成一对特异性引物,通过对PCR反应各项参数的调整优化,建立多重PCR检测体系,并同时进行灵敏性试验和特异性试验。结果显示:该检测方法可以同时扩增出无乳链球菌270 bp、金黄色葡萄球菌153 bp和绿脓杆菌375 bp的特异性片段以及细菌16S rRNA 1500 bp的通用片段,而对于其他的6种病原菌只能扩增出1 500 bp的通用片段,具有较强的特异性。三种特异性引物扩增条带与Gen Bank上的细菌基因序列同源性为99%。增菌培养24h,该体系对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的最低灵敏度分别为8×10~4、4×10~4、1. 5×10~5CFU·m L^(-1)。本研究建立的检测方法能够完成无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的快速检测,对于生产上奶牛隐性乳房炎的鉴别诊断和快速检测具有重大意义。
- 王宇李碧阳明贤左之才
- 关键词：奶牛隐性乳房炎无乳链球菌金黄色葡萄球菌绿脓杆菌多重PCR
- 猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR鉴别被引量：2
- 2018年
- 为建立一种快速鉴别猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的方法,根据猪伪狂犬病毒(PRV)全基因序列,并参照SA215、Bartha-K61疫苗株基因缺失位点特征,在单一检测野毒株与疫苗株的基础上,针对g E、g B和TK基因设计引物,首次建立了同时检测猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR检测方法。通过一次PCR检测能区分感染野毒株、疫苗株SA215和Bartha-K61,且与猪圆环Ⅱ型病毒(PCV-2)、细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。多次试验证明该方法简单、可靠且敏感度高,可用于科学研究和临床诊断等方面。
- 姜子义李碧蔡瑶颜久淇龚双燕樊毅黄剑波朱玲徐志文
- 关键词：PRV多重PCR疫苗株变异株
- 抗胰岛素蛋白(resistin)促进体外培养的牛肺泡巨噬细胞炎症因子的产生及其机制被引量：3
- 2018年
- 目的探讨抗胰岛素蛋白(resistin)与过氧化物酶体激活物受体γ(PPARγ)的关系及其促炎效应。方法采用100 ng/m L牛resistin诱导牛肺泡巨噬细胞0、1. 5、3、6、12、24 h,采用实时荧光定量PCR检测牛肺泡巨噬细胞PPARγ、核因子κB(NF-κB)、resistin的mRNA水平,Western blot法检测PPARγ、NF-κB蛋白的表达变化,ELISA检测培养细胞上清液促炎细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果 Resistin处理1. 5 h后,牛肺泡巨噬细胞PPARγmRNA水平显著降低,且存在时间依赖效应; NF-κB、resistin的mRNA水平在6 h后显著升高,12 h达到峰值; PPARγ蛋白水平在12 h显著降低,NF-κB蛋白在12 h显著升高; IL-1β、TNF-α于1. 5 h后呈时间依赖效应极显著升高。结论 Resistin能促进牛肺泡巨噬细胞产生IL-1β和TNF-α等炎症因子,这可能与抑制PPARγ和激活NF-κB途径有关。
- 阳明贤左之才李碧梁爽苟丽萍任志华马晓平
- 关键词：促炎细胞因子
- 伪狂犬病毒SA215-T的构建与神经传导研究
- 伪狂犬病毒具有侵染神经的能力，利用这一性质，该病毒已成功应用于对内脏、腺体和肌肉的神经标记。伪狂犬病毒减毒株神经传导是目前较热门的研究方向。减毒株通常缺失了gE、gI和US9三个基因，其中gE和gI是伪狂犬病毒重要的毒力...
- 李碧
- 关键词：伪狂犬病毒神经传导
- 文献传递
- 伪狂犬病毒神经传导研究被引量：8
- 2014年
- 伪狂犬病毒对神经系统的传导具有跨突触传导、自我复制和宿主范围广等特性,自20世纪70年代起,便开始运用于神经解剖学研究领域。四十年的应用实践使伪狂犬病毒神经传导有了许多新的进展,无论是在病毒神经传导机理上,还是在传导应用中。伪狂犬病毒神经传导机理,着重于阐释病毒对初级神经细胞的侵染过程和对次级神经细胞的传导方向;传导应用则着重于探索新的神经传导毒株和对病毒传导技术进行革新。目前,伪狂犬病毒神经传导理论和应用尚有许多未知的领域需要研究,结合分子生物学技术的探索会使神经传导研究事半功倍。
- 李碧朱玲周远成郭万柱徐志文
- 关键词：伪狂犬病毒神经传导分子机制
- 抵抗素通过TLR4/MyD88依赖途径促进牛肺泡巨噬细胞炎症因子产生被引量：4
- 2019年
- 目的:探讨牛抵抗素的促炎效应以及与TLR4/MyD88依赖途径的联系。方法:本试验采用终浓度为100 ng/ml的牛抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞0、1.5、3、6、12、24 h,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4/MyD88依赖途径信号通路相关基因(TLR4、MyD88、IRAK4、NF-κB)mRNA表达量,免疫印迹法(Western blot)检测抵抗素诱导12 h后上述蛋白表达,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞上清中细胞因子IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果:牛肺泡巨噬细胞经100 ng/ml终浓度抵抗素诱导后,TLR4、MyD88、IRAK4、NF-κB基因表达量6 h极显著上调(P<0.01),12 h达到峰值;蛋白表达量在12 h极显著上调(P<0.01);促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α于1.5 h后极显著升高且呈时间依赖效应(P<0.01)。结论:牛抵抗素可诱导牛肺泡巨噬细胞释放IL-6、IL-1β和TNF-α等促炎细胞因子,促进细胞炎症反应,这可能与TLR4/MyD88依赖途径信号通路有关。
- 岳梦佳左之才阳明贤李碧岑垚姚彩霞
- 关键词：抵抗素促炎细胞因子
