李赢
- 作品数：19 被引量：103H指数：7
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学理学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 重组枯草芽孢杆菌分泌表达腺苷酸脱氨酶被引量：2
- 2015年
- 目的:利用基因重组技术,构建腺苷酸脱氨酶高效表达的重组菌株。方法:以前期构建的产腺苷酸脱氨酶重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28α-AMPD中来源于鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)目的基因为模板,设计特异性引物扩增腺苷酸脱氨酶基因,亚克隆至游离型表达载体pHY-WZX,转化枯草芽孢杆菌WB600。结果:成功筛选获得了一株产腺苷酸脱氨酶重组枯草芽孢杆菌WB600/pHY-AMPD,进一步在摇瓶中探究了发酵培养基成分对重组酶发酵的影响。获得了较优发酵培养基为:葡萄糖10 g/L、?酵母膏30 g/L、CaCl2 0.5 g/L、柠檬酸三钠1 g/L、NaH2PO4 10 g/L、K2HPO4 10 g/L、(NH4)2SO4 5 g/L,37℃、200 r/min发酵60 h摇瓶发酵液酶活力可达到(2 230±50)U/m L。结论:本研究实现了鼠灰链霉菌来源的腺苷酸脱氨酶基因在枯草芽孢杆菌中表达。
- 郭自涛张梁李由然李赢顾正华丁重阳石贵阳
- 关键词：腺苷酸脱氨酶枯草芽孢杆菌
- 枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件优化被引量：18
- 2016年
- 对1株枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵培养基以及发酵条件进行了优化,最终确定了摇瓶最佳发酵培养基为:甘油40 g/L、豆粕粉30 g/L、麸皮10 g/L、Na2HPO44 g/L、K2HPO40.3 g/L。摇床最佳发酵条件为:温度30℃、转速250 r/min、接种量体积分数6%,在此发酵条件下,酶活达到6 082.7 U/m L,发酵强度为56 U/(m L·h)。在15 L发酵罐进行了初步验证,通过流加甘油分批发酵,在第25h酶活达到最大值,为11 871 U/m L。
- 李洪康李由然李赢顾正华丁重阳石贵阳张梁
- 关键词：中性蛋白酶枯草芽孢杆菌发酵优化
- 大肠杆菌TdcC、SstT和LIV-1系统缺失对胞外L-苏氨酸积累的影响被引量：6
- 2017年
- 【目的】比较分析苏氨酸吸收系统TdcC、SstT和LIV-1缺失对大肠杆菌吸收和积累胞外苏氨酸的影响。【方法】从菌株E.coli W3110出发,敲除tdcC、sst T和liv J基因,构建Tdc C、SstT和LIV-1系统单缺失和多缺失菌株,将过量表达苏氨酸操纵子基因的重组质粒pKKthr AC1034TBC分别转入原始菌和重组菌,考察各菌株吸收和积累胞外苏氨酸的能力。【结果】敲除tdc C和sst T基因的重组菌T04的苏氨酸吸收能力比原始菌W3110降低了43.28%,T04(pKKthr AC1034TBC)胞外苏氨酸积累量最高达到1.09 g/L,比对照菌W3110(pKKthr AC1034TBC)高出172.5%。敲除tdcC、sstT和livJ基因的重组菌T07的苏氨酸吸收能力比T04降低了12.97%,然而T07(pKKthr AC1034TBC)胞外苏氨酸积累量最大为0.63 g/L,与T04(pKKthr AC1034TBC)相比降低了42.2%。【结论】阻断Tdc C和Sst T系统,能有效降低大肠杆菌吸收苏氨酸的能力,提高苏氨酸的胞外积累量。阻断LIV-1系统,虽然能减少大肠杆菌对苏氨酸的吸收,却不利于菌株积累胞外苏氨酸。
- 杨冬美李华李由然张梁丁重阳李赢顾正华石贵阳
- 关键词：L-苏氨酸大肠杆菌基因敲除
- 黑曲霉阿魏酸酯酶在毕赤酵母中的组成型表达被引量：7
- 2017年
- 【目的】实现黑曲霉来源的阿魏酸酯酶在毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)中的组成型表达。【方法】以黑曲霉(Aspergillus niger)基因组为模板,经重叠延伸PCR扩增得到阿魏酸酯酶基因(AnfaeA),将其与载体pGAP9K相连,构建重组表达载体p GAP9KAnfae A,经SalI线性化后电转入毕赤酵母GS115中,得到重组菌株。高效液相色谱法测定发酵液中阿魏酸酯酶活力,并对重组菌进行了发酵优化。【结果】克隆得到783 bp的阿魏酸酯酶编码基因并实现了其在毕赤酵母中的组成型表达。重组菌发酵84 h后,上清液中酶活达5.72±0.10 U/m L。重组酶(reAnfaeA)经分离纯化后比酶活为59.75 U/mg,大小约为40 k D。发酵优化结果为:葡萄糖40.0 g/L,蛋白胨10.0 g/L,酵母膏30.0 g/L,CaCO_3 0.2 g/L,种龄28 h,接种量3%(体积比),装液量50 m L/250 m L。在此条件下发酵培养,酶活达15.60±0.23 U/m L。【结论】阿魏酸酯酶在毕赤酵母中的组成型表达,对研究毕赤酵母组成型表达系统和阿魏酸酯酶的发酵生产具有一定的借鉴意义。
- 黄雪月张梁李赢李由然顾正华丁重阳石贵阳
- 关键词：黑曲霉阿魏酸酯酶GAP启动子组成型表达发酵优化
- 高效利用稻壳联产木糖、多孔炭和二氧化硅被引量：7
- 2015年
- 用稀酸水解半纤维素制得木糖母液,并通过正交实验得到最佳水解条件,即在130℃、稀酸质量分数2%、反应6 h的条件下,水解率可达到96.8%(以稻壳中的半纤维素为基准),去除杂质精制后木糖产率为62.8%.水解后的稻壳残渣用来制备稻壳基多孔炭和二氧化硅,其中多孔炭孔隙发达、孔径均一,可用来对木糖母液进行脱色处理,在脱色过程中对木糖的吸附损失小,达到精制木糖的目的.同时,在制备稻壳基多孔炭的过程中可同步制取高纯度二氧化硅.
- 李赢石刚张梁李由然石贵阳倪才华
- 关键词：稻壳木糖多孔炭二氧化硅
- 紫薯色素的提取与纯化被引量：3
- 2015年
- 通过响应面得到紫薯色素最佳提取条件:柠檬酸水溶液浓度0.75%、料液比1:25、温度70℃,其紫薯色素提取率为299.0 mg/100 g。然后,利用大孔吸附树脂进一步纯化,结果表明:NKA-9大孔吸附树脂吸附解吸紫薯色素效果最好。采用p H2.0、65%的乙醇溶液以1.0 m L/min的洗脱流速洗脱得到紫薯色素纯度为10.35%。
- 石刚靳璇周雪映姜帅倪才华李赢
- 关键词：天然色素响应面
- 腺苷酸脱氨酶在乳酸克鲁维酵母中构建表达被引量：1
- 2016年
- 【目的】实现鼠灰链霉菌来源经密码子优化后的腺苷酸脱氨酶基因在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis GG799)中组成型表达。【方法】以鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)来源的腺苷酸脱氨酶(AMP)基因经密码子优化后作为模板,设计特异性引物,PCR扩增AMP脱氨酶基因opt-AMPD,以p KLAC1为载体构建重组表达质粒p KLAC1-opt-AMPD,经Sac II线性化后电转化法转入K.lactis GG799,筛选得到重组菌株,测定酶活,经His TrapTM HP纯化后得到AMP脱氨酶,并优化重组菌的发酵培养基。【结果】对AMP脱氨酶基因进行了密码子优化后,构建了重组K.lactis GG799/p KLAC1-opt-AMPD,实现组成型表达,密码子优化后AMP脱氨酶酶活提高到586±50 U/m L。SDS-PAGE结果显示,纯化后的AMP脱氨酶为单一条带,蛋白大小约为60 k D。优化的发酵培养基为(g/L):葡萄糖40、蛋白胨20、酵母粉15、Na Cl 8、KCl 10、Mg SO4 2,30°C、200 r/min发酵120 h,酶活达到2 100±60 U/m L。【结论】实现了密码子优化后的腺苷酸脱氨酶基因在乳酸克鲁维酵母GG799内的组成型表达,为实现腺苷酸脱氨酶的重组高效表达和发酵生产进行了有益探索。
- 许强张梁李由然李赢顾正华丁重阳石贵阳
- 关键词：乳酸克鲁维酵母腺苷酸脱氨酶发酵优化
- 稻壳基羧甲基纤维素的制备与其制膜性能研究被引量：3
- 2015年
- 羧甲基纤维素(CMC)是一种水溶性纤维素,具有良好的增黏、乳化以及热稳定性,然而其制备的主要原料-精制棉价格高、来源不足。本文以粮食生产的副产物稻壳为原料,先制备纤维素,后采用溶媒法制备得到羧甲基纤维素。通过试验确定醚化温度80℃、纤维素单体和氯乙酸钠的物质的量比1∶4,在此条件下制备的CMC取代度为0.76,黏度为23 MPa·s。FTIR分析表明纤维素的羧甲基化反应已经完成。通过测定不同CMC添加量制备的膜的水蒸汽透过系数(MVP)、透油系数(P0)和断裂强度、断裂伸长率,发现稻壳基CMC具有良好的成膜性能。CMC添加量增加,膜的透水性增强,柔韧性增加。
- 李赢姜帅靳璇张玮佳倪才华石刚
- 关键词：羧甲基纤维素取代度黏度
- TiO2/Si复合材料的制备及其性能研究被引量：3
- 2016年
- 为了提高单晶硅表面的光学利用效率,本文采用水热法在其表面生长一层平均棒长为900±50 nm,直径为100±20 nm的金红石相Ti O2纳米棒阵列。通过积分球反射光谱对这种Ti O2/Si复合材料进行抗反射性能表征,发现这种复合材料具有较好的抗反射性能;通过测量Ti O2/Si复合材料的光电流性能,发现其具有高效的光电转化效率,可有效提高太阳光的利用率;通过探讨Ti O2/Si复合材料对亚甲基蓝的降解,发现其在光催化降解染料效率方面具有显著的提高效果。
- 何飞李赢张欣倪才华石刚
- 关键词：硅二氧化钛抗反射光电转化效率光催化
- 复合重组磷脂酶用于大豆油脱胶的工艺优化被引量：5
- 2016年
- 利用实验室前期构建的重组大肠杆菌所产磷脂酶A_1(phospholipase A_1,PLA_1)和磷脂酶C (phospholipase C,PLC)进行大豆油酶法脱胶研究,探讨自主开发重组酶进行酶法脱胶的可行性。以诺维信商品酶Lecitase Ultra^(TM)为对照,研究酶法脱胶反应温度、反应pH值、反应时间、搅拌速率、复合磷脂酶添加量工艺参数对大豆油脱胶的影响,并采用正交试验对脱胶工艺条件进行优化。研究结果表明,大豆油复合酶法脱胶的最佳工艺参数为:反应温度45℃、反应pH 6.5、反应时间3 h、搅拌速率300 r/min、PLA_1和PLC添加量分别为7 940 U/kg和23 130 U/kg。复合磷脂酶对大豆油脱胶的效果与诺维信商品酶Lecitase Ultra^(TM)基本一致,大豆油磷含量可降至5 mg/kg以下,能够满足物理精炼的要求,为进一步开发具有知识产权的食品级油脂脱胶用酶制剂产品提供了理论依据。
- 程实王长坤张梁李赢石贵阳杨盛荣陈国安
- 关键词：重组大肠杆菌大豆油酶法脱胶正交试验
