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杨从文: 作品数：14 被引量：11H指数：2; 供职机构：西南大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学经济管理更多>>

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家蚕卵黄原蛋白受体BmVgR的体外表达被引量：1: 2014年; 【目的】克隆家蚕卵黄原蛋白受体(vitellogenin receptor,VgR),分析其在昆虫细胞中的表达特征,了解正常VgR和突变VgR的表达模式,为阐明其生物学功能提供参考依据。【方法】基于家蚕VgR的基因编码序列设计特异引物,扩增的目的片段连接到载体pET28a上,构建原核表达载体,转化E.coil BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导获得目的蛋白;用镍柱亲和层析方法纯化诱导表达的家蚕VgR肽蛋白;将纯化后的肽蛋白制备BmVgR的兔源多克隆抗体;PCR扩增获得大造和突变型白妙卵(scanty vitellin,vit)的LBD1+EGF1结构域(C11D和C11V)片段,连接到细胞表达载体上,通过细胞转染表达目的蛋白,采用细胞免疫组化检测大造和突变型vit的VgR在细胞里的表达情况;通过Western blot检测细胞培养液中大造和突变型vit VgR的表达量。【结果】原核表达获得了一个大小约为22 kD的融合蛋白,以包涵体形式表达;镍柱亲和层析初纯化得到BmVgR的肽蛋白,进一步切胶纯化后,以此为抗原制备BmVgR的兔源多克隆抗体,其抗体效价>1﹕512 000,纯度为95%以上。转录水平检测表明Sf9和Spli221昆虫细胞中没有BmVgR和BmVg内源基因的表达;在Sf9昆虫细胞中成功表达了家蚕野生型和突变型vit BmVgR的结构域SP+LBD1+EGF1肽段,家蚕突变型vit在BmVgR第1个表皮生长因子同源区域的第3个ClassB区域有编码50个氨基酸残基的核酸序列缺失;细胞免疫组化试验表明,突变型和正常型的C11V和C11D都能在Sf9细胞质中正常表达;制备的BmVgR兔源多克隆抗体和Myc标签抗体同时检测到细胞表达的目的蛋白,表明试验所制备的VgR抗体特异性较好;由于SP+LBD1+EGF1肽段存在信号肽,细胞表达的蛋白会分泌进入细胞培养液中,Western blot对培养液进行蛋白检测,表明突变型vit存在氨基酸缺失,但并不影响肽蛋白的正常表达,且表达量没有明显差异。【结论】EGF1结构域的缺失并不影响SP+LBD1+EGF1肽蛋白的; 罗娟陈恩祥刘红玲彭芷昕杨从文沈关望张海燕邢润苗林英夏庆友; 关键词：家蚕原核表达细胞表达

昆虫醛氧化酶研究进展被引量：3: 2010年; 醛氧化酶(aldehyde oxidase,AO;EC1.2.3.1)是钼-黄素酶家族(molybdo-flavoenzyme family,MFE)中的一类蛋白,通常是由2个相同亚基形成的同源二聚体构成,每个亚基具有2个[2Fe-2S]氧化还原中心、1个黄素辅因子(FAD)和1个底物结合域,与钼-黄素酶家族的另一成员黄嘌呤氧化还原酶结构特征相似。AO可氧化醛类物质和将含氮杂环物质羟基化,在机体代谢过程中的作用至关重要。对醛氧化酶的结构、催化反应机制、系统进化等研究结果进行了综述,重点介绍了昆虫醛氧化酶的研究进展。; 杨从文杨瑜王艳霞费纪涛林英

TILLING技术应用于家蚕化学诱导突变检测的体系优化被引量：2: 2009年; TILLING(Targeting Induced Local Lesions In Genomes)即定向诱导基因组局部突变技术,是近年发展起来的一种高通量检测点突变的反向遗传学方法。本研究从PCR模板量及酶切体系中CELI的酶量两个方面对家蚕TILLING技术的检测体系进行了优化。结果表明:本实验在应用TILLING技术筛选家蚕突变体过程中,用于PCR扩增的家蚕基因组DNA模板最佳用量为20ng;CELI酶切的20μL反应体系中,加入的最适酶量为0.5μL(本实验室从芹菜中自提的CELI酶10倍稀释液)。本研究初步对TILLING技术应用于家蚕化学诱导突变检测体系进行了优化,为TILLING技术在家蚕功能基因组研究中的应用奠定了基础。; 林英陈冬妹杨瑜王艳霞杨从文夏庆友; 关键词：家蚕 TILLING 功能基因组

家蚕蛹特异表达的卵黄原蛋白基因功能与转录调控研究: 卵黄原蛋白(Vitellogenin，Vg)是卵黄磷蛋白(Vitellin，Vn)的前体，Vn是卵形成和胚胎发育的重要营养物质。Vg主要在卵生动物的雌性脂肪体中合成，通过受体介导的胞吞作用进入卵巢，以卵黄颗粒的形式被储存...; 杨从文; 关键词：家蚕卵黄原蛋白转录调控基因功能; 文献传递

应答蜕皮激素的家蚕卵黄原蛋白启动子及其制备方法和应用: 本发明公开了应答蜕皮激素的家蚕卵黄原蛋白启动子及其制备方法和应用，家蚕卵黄原蛋白启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，由1474个核苷酸组成，该启动子含有3个家蚕BrC-Z2的特异性结合位点，能够与BmBrC...; 夏庆友杨从文林英; 文献传递

应答蜕皮激素的家蚕卵黄原蛋白启动子及其制备方法和应用: 本发明公开了应答蜕皮激素的家蚕卵黄原蛋白启动子及其制备方法和应用，家蚕卵黄原蛋白启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，由1474个核苷酸组成，该启动子含有3个家蚕BrC-Z2的特异性结合位点，能够与BmBrC...; 夏庆友杨从文林英; 文献传递

利用Ecotilling技术筛选家蚕E群突变体的突变基因(英文): 2011年; 对突变体的发现与鉴定是揭示基因功能的一种有效手段。为了研究家蚕E群突变体的基因多样性,利用Ecotilling技术平台,对家蚕18个E群突变体中的14个Hox基因片段(总长408 kb)进行突变筛选,获得了48个错义突变和213个沉默突变,其中60%是转换型突变,即嘌呤突变为嘌呤,嘧啶突变为嘧啶。研究结果表明,11个Hox基因片段在不同E群突变体中发生了突变,其中在E群突变体06-250中的Bmshx7基因有不同的错义突变位点,特别在homeobox结构域也有突变发生,这些突变可能会影响到Bmshx7基因的功能,即影响对目标基因的转录调控,最终产生突变体06-250相应的突变表型。研究获得的Hox基因的其它突变信息目前与E群突变体的表型尚无直接关联,但其研究结果可为继续筛选鉴定E群突变基因以及探讨基因的功能提供有价值的信息。; 林英陈冬妹杨瑜王艳霞杨从文夏庆友; 关键词：家蚕基因多样性 HOX基因

Homeodomain家族转录因子BmPOUM2与BmBrC-Z2应答蜕皮激素协同调控BmVg的转录: 卵黄原蛋白是胚胎发育的营养物质之一.蜕皮激素是调节家蚕生理、发育以及行为等的重要激素之一.在前期研究中,我们已经阐明了BmBrC-Z2可以结合在BmVg基因启动子上应答蜕皮激素调节BmVg的转录表达.本研究信息学分析发现...; 林英杨从文刘红玲沈关望张海燕陈恩祥韩超珊张艳嫡徐银莹吴金鑫夏庆友; 关键词：卵黄原蛋白

家蚕化蛹初期血液中卵黄原蛋白BmVg的纯化和鉴定被引量：1: 2014年; 卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)是昆虫血液中发现最早的蛋白质,对于昆虫的繁殖至关重要。以家蚕Vg基因(BmVg)的部分序列构建原核表达载体,转化E.coil BL21(DE3)菌株,在20℃条件下用0.6 mmol/L IPTG进行诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析纯化得到家蚕卵黄原蛋白BmVg的肽蛋白。以BmVg肽蛋白为抗原制备的兔源多克隆抗体效价>1∶512 000。采用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析的纯化方法,从家蚕化蛹初期的血液中纯化获得天然的BmVg蛋白,并用制备的多克隆抗体进行Western blotting检测,鉴定此纯化的天然蛋白质为BmVg蛋白。建立的BmVg分离纯化技术将有助于进一步研究BmVg的合成、转运及利用机制。; 罗娟彭芷昕陈恩祥刘红玲杨从文沈关望张海燕侯勇林英夏庆友; 关键词：家蚕卵黄原蛋白原核表达分离纯化免疫印迹法

家蚕卵黄原蛋白(BmVg)基因启动子的克隆与活性鉴定: 2014年; 卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)在家蚕蛹期脂肪体高量表达,研究家蚕卵黄原蛋白基因(BmVg)的转录调控机制及启动子活性,将有助于利用家蚕蛹生物反应器高效表达外源蛋白。设计特异引物,以家蚕蛹基因组DNA为模板PCR扩增得到BmVg长约1.5 kb的启动子片段。构建由不同长度截短BmVg启动子片段驱动荧光素酶报告基因表达的细胞转染载体pGL3-Vg Promoter,分析转染家蚕胚胎培养细胞BmE-SWU1中的BmVg启动子片段活性,结果显示最低截短至BmVg基因翻译起始位点上游90 bp的启动子片段具有转录活性。进一步用截短法分析不同长度启动子的活性,当启动子-752^-952 bp、-42^-152 bp区域被截掉后,启动子的转录活性明显降低,暗示这2个区域内可能存在与启动子启动效率相关的重要调控元件。; 杨从文沈关望张海燕彭芷昕陈恩祥邢润苗刘红玲韩超珊林英; 关键词：启动子克隆家蚕蛹

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