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高灵敏度巢式PCR方法扩增HBV全长基因组被引量：3: 2011年; 探讨一种用于乙型肝炎病毒（HBV）基因组扩增的灵敏度高、广谱性好的巢式聚合酶链式反应（nested PCR）方法，适用于较低病毒拷贝数标本的HBVDNA扩增．通过设计两套通用巢式引物。实现对各基因型（A，B，C，D，E，G）HBV均具有较高的扩增效率；采用两步法分段扩增HBV基因组，对两段目的产物进行测序拼接获得HBV的全基因序列．应用本方法对4组病毒拷贝量（IU／mL）分别为：〉1．0×10^4，1．0×10^3～1．0×10^，2．0×10^2～1．0×10^3，〈2．0×10^2的100份血清标本进行全长基因组扩增，其中75份获得阳性结果，各组阳性率依次为：100％，66．7％，60％，25％．有效扩增灵敏度为2．0×10^2～1．0×10^3IU／mL；而一步法只在病毒拷贝量〉1．0×10^4 IU／mL的标本组中获得15份阳性结果，总的阳性率仅为15％，说明该方法扩增灵敏度明显高于一步法．因此。本方法为HBV流行病学调查研究HBV基因组序列提供了更高的灵敏度，可在流行病学调查中发挥重要作用．; 张天英陈清瑞杨炳春陈仕海袁权葛胜祥; 关键词：乙型肝炎病毒基因组

应用离心方法提高杆状病毒对哺乳动物细胞转导实验效率被引量：4: 2007年; 重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体已获得了日益广泛的应用。为进一步提高转导实验的效率,本研究利用已构建的带有CMV启动子-增强型绿色荧光蛋白(eGFP)表达盒的重组杆状病毒BacV-CMV-EGFPA,在CV-1细胞中探索了应用离心方法提高转导实验效率的可行性。结果显示离心方法可显著提高单位时间内重组杆状病毒对哺乳动物细胞的转导效率,同时不会对靶细胞造成损伤。通过对离心时间、离心后孵育时间、病毒上清的稀释缓冲液的进一步摸索优化,结果显示病毒上清以PBS为稀释缓冲环境室温600g水平离心1h即可获得高水平的转导效率,优于在PBS环境中27℃孵育8h的效果。该方法可在获得高转导效率的同时显著缩短实验时间,具有快捷、高效、低损伤的特点,可作为一种常规操作方法用于日常实验。本研究进一步应用该方法对多种不同来源和类型的哺乳动物细胞株进行基因转导,结果显示该方法可适用于多数不同种属和组织来源的哺乳动物细胞,其中对贴壁细胞的效果最为显著。; 程通杨炳春许辰煜张涛杜海莲王颖彬张军夏宁邵; 关键词：杆状病毒哺乳动物细胞转导离心

人乳头瘤病毒假病毒制备方法的优化被引量：5: 2009年; 人乳头瘤病毒假病毒可广泛应用于中和抗体鉴定和疫苗免疫性评估等研究.本研究对多质粒共转染293FT细胞生产HPV假病毒的方法进行了深入优化,结果显示不同的HPV结构蛋白表达质粒转染比例对于假病毒生产效率有显著的影响,HPV主要结构蛋白L1的表达水平是影响生产效率的主要因素,L2表达质粒的用量过高或过低均不利于假病毒的生产,而报告质粒的用量对假病毒生产效率的影响相对较小.综合比较显示,在该体系中L1和L2表达质粒和报告质粒以合适比例(如1∶1/10∶1/2)进行共转染可获得更为理想的生产效率.本研究同时也在293FT细胞中对磷酸钙转染方法进行了优化,通过磷酸钙与质粒用量的交叉配比试验获得了较优的转染条件.通过优化,建立了更为高效的HPV假病毒大量制备方法,在HPV16、HPV18、HPV6、HPV11假病毒生产中的应用结果显示较原方法可显著提高生产效率.本研究为HPV假病毒中和实验的规模化应用提供了有利条件.; 郑舟周国栋张雅丽张涛杨炳春邱竹英程通张军夏宁邵; 关键词：人乳头瘤病毒表达质粒

重组慢病毒对不同哺乳动物细胞基因转移及表达效率的研究被引量：4: 2008年; 慢病毒是一种具有独特优点和巨大应用潜力的哺乳动物细胞基因转移载体,我们对慢病毒载体对不同哺乳动物细胞的基因转移及表达效率进行了平行比较研究.应用第三代重组慢病毒系统构建了携带CMV启动子-EGFP报告基因表达元件的重组慢病毒Lenti-EGFP,分别对多种不同哺乳动物细胞进行转导实验,在转导48 h后应用流式细胞仪检测报告基因在不同细胞株中的转移及表达效率.我们共使用了29种哺乳动物细胞株,包括14种人类组织细胞,5种猴组织细胞,9种鼠组织细胞,1种兔组织细胞.结果显示,重组慢病毒具有良好的基因转移能力,可有效进入多数哺乳动物细胞,对不同种属来源的细胞没有表现出特别的偏嗜性,但对贴壁培养细胞的基因转移效率明显高于对悬浮培养细胞.本研究为重组慢病毒系统的合理使用提供了基础.; 张雅丽程通蔡毅君张涛魏丽华杨炳春郑舟张军夏宁邵; 关键词：慢病毒绿色荧光蛋白哺乳动物细胞

乙型肝炎病毒突变型表面抗原在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其免疫活性研究: 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)是严重危害人类公共健康的世界性问题。在我国，HBV携带者约占人口总数的10％，现患慢性乙型肝炎约3000万人。HBV的感染不仅能够引起急、慢性病毒性肝炎，而且部分...; 杨炳春; 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原杆状病毒; 文献传递

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杨炳春