杨玉霞
- 作品数：9 被引量：19H指数：2
- 供职机构：中山大学中山医学院眼科学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 密度梯度离心结合贴壁法培养成年大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性(英文)被引量：9
- 2007年
- 背景:研究骨髓间充质干细胞的培养方法,以获取大量高纯度的骨髓间充质干细胞,对应用组织工程技术重建眼部组织治疗眼部疾病具有重要意义。目的:应用密度梯度离心结合贴壁法进行成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养,观察其生长特性及大量繁殖的可能性。设计:完全随机分组设计/重复测量实验。单位:中山大学中山眼科中心病理科实验室。材料:选用6周龄SD大鼠4只,雌雄不限,清洁级2级,体质量约250g/只,由中山大学动物中心提供,许可证号码SCSK(粤2004/0011)。DMEM/F12培养基(美国GIBCo公司)、胎牛血清(杭州四季青生物工程公司)、胰蛋白酶、依地酸二钠、淋巴细胞分离液。纤维连接蛋白、CD44、CD34、CD31单克隆抗体,免疫组化二步法试剂盒(北京中杉生物技术公司)。方法:实验于2005-09/2006-01在中山大学中山眼科中心病理科实验室完成。①取SD大鼠,断颈处死后于750g/L酒精浸泡10min。无菌条件下,分离并暴露骨髓腔,用注射器吸入应用液直接插入股骨腔,用含肝素的培养液将骨髓腔里的细胞冲洗出来作为细胞混悬液,密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,观察活体细胞生长情况。②将第2代细胞接种于预置在培养板内的无菌盖玻片上,当细胞基本融合时,取出作原位甲醇固定10min,苏木精-伊红染色。原位丙酮固定10min,按二步法作免疫组织化学纤维连接蛋白、CD44、CD34、CD31反应,3,3’-二氨基联苯胺显色,最后将盖玻片反扣在载玻片上,封固、观察。③将细胞按4.25×107L-1的浓度接种于96孔板中,每孔200μL,置培养箱中,分别于接种后1,2,3,4,5,6d各于两排孔中加入20μL/孔四甲基偶氮唑盐,继续培养4h后吸去上清液,每孔加200μL二甲基亚砜,振荡5min后,于570nm波长测吸光度值,绘制细胞生长曲线。主要观察指标:①大鼠骨髓间充质干细胞活体培养观察结果。②2
- 杨玉霞郑健樑张平林健贤张文忻
- 关键词：骨髓
- 用蛋白质芯片技术筛选视网膜母细胞瘤患者血清中标志蛋白被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,Rb)血清标志蛋白,为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断寻找新的方法。方法:采用IMAC30和CM102种蛋白芯片对18例Rb患者和17名年龄匹配的正常小儿血清进行了蛋白质谱检测。统计分析采用Ciphergenproteinchip3.0.2软件,2组间蛋白峰强度的比较采用t检验,率的比较采用Fisher精确概率法。结果:IMAC30蛋白芯片结果显示:与正常幼儿相比,视网膜母细胞瘤患者血清中有26个差异表达的蛋白峰,其中高表达有21个,质/荷比(m/z)分别为:7746、7014、11713、3049、7084、7299、5888、2544、12575、5489、9658、9575、9929、10161、8955、1886、10617、6209、2411、7374和6614;低表达有5个,分别为:8382、7923、7972、8590和66576,统计学检验P值均小于0.001。其中以7014m/z峰进行两组统计学分析时,敏感性和特异性分别为94.4%和82.4%。与正常小儿相比,经CM10蛋白芯片分析显示:视网膜母细胞瘤患者血清中有4个差异表达的蛋白峰,其中高表达有3个,分别为:质/荷比(m/z)分别为5888、6097和7798;低表达蛋白峰为8590m/z。统计学检验P值均小于0.01。当选择7798m/z差异峰进行统计学分析时,敏感性和特异性分别是83.3%和70.6%。结论:视网膜母细胞瘤患者血清中存在较多标志蛋白,SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术有望成为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断的新的有效工具。
- 杨玉霞肖雪媛吴开力王矩菱周立军杨华胜李永平何大澄张平
- 关键词：视网膜母细胞瘤SELDI蛋白质芯片技术差异蛋白
- 卡铂诱导视网膜母细胞瘤SO-Rb50细胞系耐药的研究
- 视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是儿童最常见的眼内恶性肿瘤，也是仅次于白血病的儿童第二常见的恶性肿瘤。近年来发病率有上升趋势[1]，多见于婴幼儿，既可致盲也可致命。尽管目前治疗手段很多，包括光凝、冷凝...
- 杨玉霞
- 关键词：卡铂诱导视网膜母细胞瘤化疗
- 文献传递
- 人视网膜母细胞瘤耐药细胞系SO-Rb50/CBP的建立及耐药相关基因表达检测
- 2010年
- 目的用卡铂诱导人视网膜母细胞瘤SO-Rb50成为耐药细胞SO-Rb50/CBP,检测其生物学特性,并探讨其耐药机制。方法以人视网膜母细胞瘤SO-Rb50为亲本细胞,采用卡铂高浓度间歇诱导法诱导多药耐药细胞SO-Rb50/CBP。MTT法测定其药物敏感性及生长曲线、倍增时间;分别用免疫细胞化学、流式细胞术对MRP、GST-π蛋白表达进行检测,用RT-PCR检测耐药相关基因MRP、GST-π的表达。结果耐药细胞SO-Rb50/CBP的耐药指数为15.7。亲本细胞与耐药细胞群体倍增时间分别为44.32h和50.9h。SO-Rb50/CBP对CBP、DDP、VCR、MMC、VP-16和5-FU的耐药指数分别为15.7、6.89、5.68、4.58、2.28和1.88。免疫细胞化学SO-Rb50/CBP的GST-π和MRP表达的阳性率分别为96.19%和90.21%,亲本细胞两种蛋白的阳性率分别为20.12%和30.48%。SO-Rb50/CBP的MRP及GST-π的mRNA表达水平比SO-Rb50明显增高。结论诱导出耐卡铂的视网膜母细胞瘤细胞SO-Rb50/CBP呈高度耐药,且存在多药耐药现象。其耐药现象的产生,可能与GST-π和MRP耐药蛋白表达的增加有关。
- 杨玉霞孟永周立军李永平郑健樑张文忻林健贤张平
- 卡铂诱导视网膜母细胞瘤SO-Rb50细胞系耐药的研究
- 杨玉霞张平刘杏李永平周立军孟永
- 眼内淋巴瘤伪装成化脓性眼内炎一例
- 2007年
- 患者男，59岁，左眼突然视物不见1个月。眼部检查：左眼视力：光感，光定位不准；非接触眼压计测得眼压：2.394kPa，左眼结膜混合性充血，角膜轻度水肿混浊 ，色素性及灰白色尘状KP（＋），房水闪辉，虹膜表面散在积血及灰白色脓样物质，下方较多，上方虹膜2-3个灰白色小结节，呈干酷样，下方虹膜弥漫隆起，瞳孔区灰白色脓样物质，晶体全白色混浊。
- 张平杨玉霞杨华胜郑健操林健贤张文忻
- 关键词：化脓性眼内炎非接触眼压计伪装眼部检查房水闪辉眼视力
- 急性和慢性眼压升高对血-房水屏障的影响
- 孔香云刘杏黄祥坤曹丹黄晶晶毛真李媚杨玉霞
- SELDI蛋白质芯片技术从血清中筛选视网膜母细胞瘤标志蛋白
- 张平肖雪媛吴开力王矩菱杨玉霞周立军杨华胜李永平何大澄
- 成年大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性被引量：9
- 2006年
- 目的:探讨成年大鼠的骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养方法,为其应用提供大量种子细胞。方法:用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增,对细胞进行免疫组化染色鉴定。结果:取得较高纯度的成体大鼠骨髓MSCs,并保持细胞的活性;成体大鼠骨髓MSCs在体外培养中为贴壁生长,培养3～4d后开始大量增殖,并形成星形、梭形的细胞增殖集群,对分离后所获得的细胞进行免疫组化染色,细胞CD44,FN均阳性,CD34,CD31均阴性。结论:采用密度梯度离心结合贴壁培养法可获得较高纯度的MSCs,是实用、便捷和可行的方法。
- 郑健樑杨玉霞张平林健贤张文忻
- 关键词：间充质干细胞细胞培养骨髓
