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嗜盐古生菌AJ4中BR蛋白基因部分片段和16S rRNA基因序列研究被引量：10: 2004年; 为了研究分析新疆阿尔金山国家自然保护区阿牙克库木湖嗜盐古生菌物种与细菌视紫红质(bacteriorhodopsin ,BR)蛋白资源 ,对分离纯化到的极端嗜盐古生菌AJ4 ,采用PCR方法扩增出其 16SrRNA基因 (16SrDNA)和编码螺旋C至螺旋G的BR蛋白基因片断 ,并测定了基因的核苷酸序列 .通过BR蛋白部分片段序列分析表明 ,BR蛋白中对于完成质子泵功能以及与视黄醛结合的关键性氨基酸残基均为保守序列 ,位于膜内侧的序列比位于膜外侧的序列更保守 ;基于BR蛋白基因和16SrDNA序列的同源性比较以及 16SrDNA序列的系统发育学研究表明 ,AJ4是Haloarcula属中新成员 .由此建立了一种快速筛选具有新BR蛋白的新嗜盐古生菌的方法 .; 许学伟吴敏阮红洪洁黄伟达; 关键词：嗜盐古生菌基因序列系统发育

异亮氨酸拉链结构对可溶性CD40L生物学活性的影响被引量：3: 2003年; CD40配基(CD40L)为TNF超家族中的一员,瞬时表达于激活的CD4+的T淋巴细胞上.自然状态下膜上三聚体的CD40L通过和CD40受体(CD40R)结合,在免疫监视和肿瘤免疫中发挥作用.以PCR方法从pcDNA3 CD40L质粒上扩增得到编码CD40L基因的胞外部分sCD40L,并将该片段插入大肠杆菌表达质粒pET30a上,构建得到大肠杆菌表达质粒pET30a sCD40L;同时,在sCD40L的N端融合了异亮氨酸拉链(IsoleucineZipper,IZ)结构,构建得到表达质粒pET30a IZ sCD40L.表达质粒在大肠杆菌中表达,得到可溶性的重组人CD40L和IZ CD40L.SDS PAGE分析结果表明重组人rhsCD40L和IZ rhsCD40L在相应分子质量位置都有明显的条带产生,并得到Westernblotting的确认.非SDS PAGE电泳结果显示,异亮氨酸拉链结构有利于rhsCD40L蛋白形成聚合体结构.B细胞增殖实验和人骨髓瘤细胞株XG2凋亡实验结果都表明,异亮氨酸拉链结构提高了rhsCD40L的生物学活性.; 丁天洪洁徐颖周璇江培翃钱志康张学光黄伟达; 关键词：可溶性CD40L 生物学活性

LPA法克隆嗜盐菌Halobacterium species xz515古紫质基因(英文)被引量：1: 2003年; Halobacteriumspeciesxz515是从中国西藏分离到的嗜盐菌,所含古紫质(古细菌视紫红质的简称命名为AR4)具有与其他已知菌视紫红质相反的质子释放和吸收的顺序而引起重视.连接反应介导的PCR扩增法(LPA)是一种克隆部分序列已知的基因的新型克隆方法.LPA法利用"酶切-连接-PCR"之组合,首先选定一组限制性内切酶,各自单独地酶切细菌总DNA样品,然后酶切产物分别与相应的寡聚核苷酸片段接头连接.连接液混合起来,作为扩增未知序列DNA的模板.通过这种方法,克隆到了包括完整AR4基因开放阅读框和0.4kb上游调控区域的总长度1.3kb的DNA片段.实验结果表明LPA法可以代替传统的构建基因组DNA文库的方法,可以快速有效地获得目标基因相关的序列.; 王奕然洪洁明明丁建东李庆国黄伟达; 关键词：克隆接头

一种具有光致变色特性的膜蛋白/聚合物复合膜被引量：5: 2006年; 通过基因工程技术将古紫质4(archaerhodopsin-4,AR4)膜蛋白的基因转入本身不表达该蛋白质、也不表达玉红素的嗜盐菌株L33中,去除了天然菌株xz515所获得的AR4膜蛋白脂环境中的玉红素,优化了AR4的光致变色性能.将重组古紫质4包埋于聚乙烯醇中制成复合膜,并通过提高体系的pH值,延长了M态的寿命,进一步实现了简单图案记录,验证了该活性蛋白质与聚合物的复合材料具有光信息存储功能.; 马德旺明明洪洁吴佳李庆国黄伟达丁建东; 关键词：细菌视紫红质聚乙烯醇信息存储基因工程

一种具有光学响应的古紫质/聚合物复合膜及其制备方法: 本发明属高分子材料、基因工程和信息材料技术领域，具体涉及一种基于野生性或转基因的古紫质4的、可用于信息存储的聚合物功能复合膜及其制备方法。通过xz515菌株表达或通过基因工程技术，提取、分离和纯化古紫质4的基因，转入到嗜...; 丁建东明明马德旺黄伟达洪洁李庆国; 文献传递

细菌视紫红质基因工程点突变体BR-D96V的获取及其与合成高分子聚乙烯醇的功能性复合材料的制备被引量：1: 2010年; 细菌视紫红质(BR)是嗜盐菌质膜上的一种跨膜蛋白质,具有独特的光学响应,与合成高分子材料的复合有望提供一种信息功能材料.制备了第96位天冬氨酸被缬氨酸取代的BR突变体BR-D96V及其高分子复合膜,并进行了相关基础研究.通过基因工程方法,在本身不表达BR的嗜盐菌L33中实现了新突变体BR-D96V的表达.尽管缬氨酸侧链具有强疏水性,取代天冬氨酸后的蛋白质仍然具有光学响应,但与野生型BR相比,中性的盐溶液环境中突变体BR-D96V的M态寿命延长近两个数量级,有利于未来作为信息材料使用.将此突变体蛋白质与合成高分子聚乙烯醇(PVA)均匀混合后制备得到蛋白质/聚合物复合功能膜,M态寿命比液体条件下又有显著的延长.还发现BR-D96V中间态的寿命对于体系的含水量具有较高的敏感性.; 赵迎春明明洪洁马德旺吴佳李庆国黄伟达丁建东; 关键词：合成高分子细菌视紫红质基因突变

一种基因突变的古紫质4蛋白及其制备方法和应用: 本发明属高分子材料、基因工程和信息材料技术领域，具体涉及一种基于基因突变古紫质4的、可用于信息存储和处理的薄膜，尤其是该蛋白质与聚合物的功能复合膜及其制备方法。通过基因工程技术，对古紫质4蛋白的光循环、质子泵有重要影响的...; 丁建东明明马德旺吴佳黄伟达洪洁李庆国; 文献传递

一种具有光学响应的古紫质/聚合物复合膜及其制备方法: 本发明属高分子材料、基因工程和信息材料技术领域，具体涉及一种基于野生性或转基因的古紫质4的、可用于信息存储的聚合物功能复合膜及其制备方法。通过xz515菌株表达或通过基因工程技术，提取、分离和纯化古紫质4的基因，转入到嗜...; 丁建东明明马德旺黄伟达洪洁李庆国; 文献传递

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洪洁