浅野龙太郎
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：日本东北大学大学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金北京市卫生局科学研究项目北京市优秀人才培养资助更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重叠延伸PCR法克隆重组复合干扰素被引量：6
- 2008年
- 目的:用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人工优化的干扰素-重组复合干扰素(consensus interferon,cIFN)基因,用原核表达系统对其进行表达,鉴定表达的cIFN活性.方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子,人工设计cIFN的高表达基因,用overlap PCR法合成cIFN全基因,用基因重组技术构建其原核表达载体pRA-cIFN,在大肠杆菌BL21中进行高效表达,用SDS-PAGE和Western blotting鉴定cIFN表达,用GuHCl阶段透析法进行蛋白变性、复性,用TALON(His)6亲和层析柱进行纯化,用ELISA、MTS比色定量法及血凝抑制试验检测cIFN的免疫活性和生物活性.结果:成功合成了cIFN全基因,其DNA长度与理论长度534 bp相符;用基因重组技术成功构建了cIFN原核表达载体pRA-cIFN,并用大肠杆茵BL21进行了高效表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果显示,表达蛋白主要以包涵体形式存在,其分子质量符合理论值23-3 kDa;用GuHCl阶段透析法成功进行包涵体蛋白的复性,亲和层析法纯化后cIFN的ELISA、MTS比色定量法及血凝抑制试验结果显示。表达蛋白具有明显的cIFN免疫学活性、剂量依赖性PLC/PRF/5细胞增殖抑制作用和HBsAg分泌抑制作用.结论:重叠延伸PCR法是获得重组复合基因的有效简便的方法,我们通过重叠延伸PCR法获得并表达的cIFN具有明显的抗病毒、抗细胞增殖活性.
- 刘顺爱浅野龙太郎郭晶晶刘志英余康康徐道振
- 关键词：重叠延伸PCR原核表达活性鉴定
- 人源抗HBsAgscFv与重组复合干扰素融合蛋白的高效表达及活性鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的 :制备人源抗乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)单链抗体 (scFv)与重组复合干扰素 (consensusinterferon ,cIFN)的融合蛋白 ,并鉴定其活性。方法 :把人源抗HBsAgscFv cIFN融合蛋白的表达载体pRA cIFNscFv转化到大肠杆菌菌株BL2 1之后大量表达抗HBsAgscFv cIFN融合蛋白。SDS PAGE和Westernblotting鉴定表达蛋白 ,经纯化并变性复性包涵体蛋白后用ELISA、流式细胞仪、MTS非放射性活细胞比色定量法及HBsAg血凝抑制试验等进行融合蛋白的抗HBsAg抗体活性和干扰素活性测定。结果 :SDS PAGE和Westernblotting结果显示 ,抗HBsAgscFv cIFN融合蛋白在BL2 1大肠杆菌中大量表达 ,表达量超过 10mg L培养基 ;ELISA和流式细胞仪结果显示 ,所表达的目的蛋白具有抗HBsAg和IFNα的免疫活性 ,且特异性良好 ;MTS和HBsAg血凝抑制试验结果显示 ,融合蛋白具有明显的PLC PRF 5细胞增殖抑制活性和HBsAg分泌抑制活性 ,表明所获得的抗HBsAgscFv cIFN融合蛋白具有抗HBV病毒活性和HBV感染细胞增殖抑制活性。结论 :用基因工程方法成功制备了人源抗HBsAgscFv cIFN融合蛋白 ,此融合蛋白具有抗HBsAg抗体活性和IFNα活性 。
- 刘顺爱浅野龙太郎王学熊谷泉工藤俊雄徐道振
- 关键词：HBSAG人源单链抗体融合蛋白
- 人源抗HBsAg scFv与重组复合干扰素融合蛋白的制备及研究
- 制备人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)抗体scFv与重组复合型干扰素(consensus Interferon,cIFN)的融合蛋白,以抗体作为载体把抗病毒制剂—cIFN导向到HBV感染细胞,探索高效且减少干扰素的...
- 刘顺爱浅野龙太郎熊谷泉工藤俊雄徐道振
- 文献传递
