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王乃福: 作品数：28 被引量：87H指数：5; 供职机构：天津出入境检验检疫局更多>>; 发文基金：天津市科技支撑计划国家质检总局科技计划项目天津市滨海新区科技计划项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>

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一种鉴别非洲猪瘟病毒和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：11: 2016年; 为建立一种快速、敏感和特异的鉴别检测非洲猪瘟病毒（ASFV）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）的方法,以ASFV CP530R基因和HP-PRRSV NSP2基因为靶序列分别设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种二重荧光RT-PCR检测方法,对该方法的特异性、定量线性范围、敏感性和重复性进行了评价及初步应用。结果显示,该方法对ASFV和HP-PRRSV呈现特异性扩增,不与伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒和猪流感病毒发生交叉反应。该方法对含有ASFV CP530R靶序列的质粒标准对照（pCR2.1-ASFV-CP530R）定量检测的线性范围为6.1×101~6.1×108 copies/μL,对含有HP-PRRSV NSP2基因靶序列的RNA标准对照（HPPRRSV-NSP2-RNA）的定量线性范围为4.1×101~4.1×108 copies/μL,最低检出限分别为61copies/μL和41copies/μL。对3个浓度的pCR2.1-ASFV-CP530R和PRRSV-NSP2-RNA进行组内和组间重复性试验,Ct值的变异系数均小于1.60%,表明该方法具有良好的重现性。用该方法对276份实际样品进行ASFV和HP-PRRSV同时检测,全部样本的ASFV检测结果为阴性,有8份样本的HP-PRRSV检测结果为阳性,其余样本HP-PRRSV检测结果为阴性。上述结果表明,本研究建立的方法可为实际样本中ASFV和HP-PRRSV的同时鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。; 王建华赵祥平董志珍王玉玲赵丹肖妍张俊哲陈小金王乃福陈本龙; 关键词：非洲猪瘟病毒高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒

两种方法检测牛地方流行性白血病的比较被引量：3: 2013年; 目的分析ELISA方法和AGID方法检测奶牛地方流行性白血病的一致性。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)两种方法,平行检测来自乌拉圭的3998份奶牛血清中的牛白血病病毒抗体。结果 ELISA和AGID对牛地方流行性白血病病毒抗体的阳性符合率、阴性符合率及总符合率分别达到100%(18/18)、99.42%(3975/3998)、99.87%(3993/3998),表明两种方法的符合率较高,均可用于奶牛地方流行性白血病的诊断和血清学筛查,其中ELISA方法阳性检出率高于AGID方法。; 王作佳赵祥平王乃福张永年王玉玲刘亚峰董志珍

含H5N1-HA基因重组腺病毒疫苗的构建及其诱导免疫应答的初步探讨: 2009年; 目的构建包含H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗并探讨其免疫效果。方法用Admax系统构建包含H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗，并用PCR、Western—Blot等方法对重组病毒疫苗进行鉴定；疫苗免疫小鼠后，通过H1实验和ELISPOT实验检测其体液免疫和细胞免疫反应，评价其免疫效果。结果成功得到了含有H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗；基因表达鉴定表明，HA基因能够在细胞中进行表达；血凝抑制实验结果显示小鼠产生的针对HA抗体滴度在1：320和1：640之间；ELISPOT结果显示实验组和对照组（PBS）相比斑点数量差异有统计学意义（P〈0．05），以上免疫结果表明重组腺病毒载体疫苗可以诱导小鼠产生良好的特异性体液和细胞免疫反应。结论含H5NA—HA的重组腺病毒疫苗可以诱导小鼠产生良好的免疫反应，为研制人禽流感疫苗打下基础。; 张晓光李魁彪马晶王乃福张晓梅桑云虎董婕徐红曾毅; 关键词：流感病毒A型流感病毒A型腺病毒疫苗

一种驽巴贝斯虫病免疫印迹检测方法及试剂盒制备: 本发明公开了一种驽巴贝斯虫病免疫印迹检测方法及试剂盒，本发明驽巴贝斯虫病免疫印迹检测方法，是以辣根过氧化物酶标记的羊抗马二抗结合物、化学发光底物在获得诊断抗原和阳性对照血清的基础上建立的；本发明方法试剂用量少成本低、特异...; 王玉玲左锋王建华柴宏森王乃福赵林立侯艳梅赵祥平; 文献传递

A型猪流感病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：1: 2016年; 根据A型猪流感病毒(SIV)的基质蛋白(M)编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条Taq Man探针,建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等猪的其他常见病毒无交叉扩增反应;该方法对M基因RNA对照(SIV-M-RNA)的最适线性检测范围为3.8×10~1~3.8×10~8拷贝数/反应,标准曲线方程为Y=-3.4365X+40.091,相关系数(R^2)为0.999 8,最低检出限为38个拷贝数的SIV-M-RNA。对3个不同浓度(3.8×10~3~3.8×10~5 copies/μL)的SIV-M-RNA进行组间和组内重复试验,每个浓度的Ct值变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对860份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪场猪鼻拭子样本进行SIV检测,结果进口猪鼻拭子样本的SIV检测均为阴性,17份国内猪场猪鼻拭子样本SIV检测为阳性。本研究提供了一种快速、敏感和特异的A型猪流感病毒检测方法。; 王建华陈小金肖妍王玉玲谭旭菲赵丹张俊哲陈本龙王乃福董志珍赵祥平; 关键词：TAQMAN探针荧光RT-PCR

多重基因遗传表达分析系统及其应用研究进展: 2015年; 核酸检测技术广泛用于生命科学、微生物学及医学领域。随着分子生物学的发展,在经典技术的基础上研究人员又开发出多种新型检测技术。其中多重基因遗传表达分析系统(gene expression profiler genetic analysis system,Ge XP)技术作为聚合酶链式反应和芯片的换代技术,具有特异性好、灵敏度高的特点,能够同时检测多个目的基因,真正意义上实现了高通量检测。本文详细介绍了Ge XP技术的原理以及优缺点,并对Ge XP技术在畜牧兽医研究、转基因食品检测、微生物检测及医学研究中的应用进行阐述,以期为该技术将来在食品检测方面的推广提供参考。; 陈小金王乃福黄晨董志珍; 关键词：多重PCR 微生物检测食品检测

猪戊型肝炎病毒检测技术的研究进展被引量：1: 2015年; 猪戊型肝炎是一种新的人畜共患病,其病原戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是无囊膜的RNA病毒,主要通过消化道进行传播。研究发现,世界上许多国家的猪群中普遍存在HEV抗体及猪戊型肝炎病毒RNA携带。与患病猪群密切接触、食用未煮熟的猪肉或猪肉制品、被污染的水源及水产品,这些因素都可增加戊型肝炎的患病风险。猪作为戊型肝炎病毒的宿主,不仅对公共卫生和食品安全构成威胁,同时对人类戊型肝炎流行病学有很大的影响。本文简要介绍了HEV的病原学以及抗原抗体检测方法,包括血清学、免疫学及分子生物学方法等,并对国内外开展的戊型肝炎检测技术的研究进展进行综述。; 陈小金吴冬雪刘国红王乃福董志珍; 关键词：猪戊型肝炎病毒人畜共患病

致泻性大肠杆菌基因芯片检测方法的建立被引量：11: 2014年; 建立一种多重PCR技术结合基因芯片检测方法,实现多种致泻性大肠杆菌(EPEC、ETEC、EIEC、EHEC、EAEC和大肠杆菌O157)的快速、准确检测。筛选肠致病性大肠杆菌、产肠毒素大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、肠聚集性大肠杆菌及大肠杆菌O157的特异基因作为目的基因。设计9对引物和23条探针,进行多重PCR扩增,制备寡核苷酸芯片。将多重PCR扩增产物与带有特异探针的芯片杂交。用扫描仪扫描,判定细菌种类及型别。该基因芯片可特异性的检测EPEC、ETEC、EIEC、EHEC、EAEC和大肠杆菌O157,具有良好的特异性,致病菌检测灵敏度可达104cfu/mL。所建立的多种致泻性大肠杆菌基因芯片方法检测方法特异性好,灵敏度高,具有较好的实用性。; 王乃福吴冬雪张霞刘培张海英高旗利; 关键词：致泻性大肠杆菌基因芯片多重PCR

荧光定量PCR方法检测榛果过敏原成分被引量：1: 2014年; 目的建立榛果过敏原成分的荧光定量PCR检测方法,并将此方法与酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法进行比对实验。方法根据榛果成分oleosin特异性基因设计并筛选合适的引物和探针,优化反应体系和反应条件,建立榛果过敏原成分的荧光定量PCR检测方法,对荧光定量PCR方法与ELISA方法检测结果进行分析。结果建立的榛果过敏原成分荧光定量PCR方法特异性良好,可用于榛果过敏原成分的定量检测,但检测灵敏度低于ELISA检测方法。结论所建立的榛果过敏原成分的荧光定量PCR检测方法特异性好,灵敏度达到10 mg/kg,具有较好的实用性,ELISA检测方法灵敏度高于荧光定量PCR法,但当榛果过敏蛋白被破坏后有可能出现假阴性结果。; 吴冬雪张霞黄晨刘国红王乃福; 关键词：荧光定量PCR 酶联免疫吸附法

施马伦贝格病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立: 2014年; 目的建立施马伦贝格病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）快速检测方法.方法从GenBank数据库中获得施马伦贝格病毒S基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorerV4软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物、内引物,建立施马伦贝格病毒等温扩增快速检测方法.结果 RT-LAMP检测方法对施马伦贝格病毒RNA的灵敏度达到10个拷贝,所用引物对赤羽病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病毒、水泡性口炎病毒及牛病毒性腹泻病毒无特异性扩增,表现出良好特异性.结论建立的施马伦贝格病毒等温扩增快速检测方法灵敏度高、特异性强,为快速检测施马伦贝格病毒提供了新方法.; 王乃福吴冬雪张霞董志珍王玉玲王建华赵祥平; 关键词：施马伦贝格病毒核酸扩增技术

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