王兰岚
- 作品数：44 被引量：433H指数：16
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学电子电信医药卫生更多>>
- 激光微束穿刺法获得抗虫转基因油菜及其后代的研究被引量：11
- 2001年
- 利用激光微束穿刺法将苏云金芽孢杆菌的毒蛋白 (δ endotoxin)基因导入了油菜 ,经聚合酶催化链式反应(PCR)和PCRSouthern杂交证明抗虫基因已导入油菜基因组中并能在T1 代得到遗传。对转基因植株进行了抗虫性测试 ,结果表明某些植株具有较好的抗虫性 ,并且这种抗虫性在T1 代仍能保持。实验结果表明抗虫基因已整合进油菜基因组并得到了稳定的遗传。
- 侯丙凯周奕华刘桂珍宋桂英王兰岚陈正华
- 关键词：抗虫基因油菜转基因植株
- 利用激光微束穿刺法将外源基因导入小麦的研究被引量：61
- 1995年
- 用激光微束穿刺法将携带有新霉素磷酸转移酶（ＮＰＴ－Ⅱ）基因的质粒ｐＪＩＴ１０１导入京花１号小麦幼胚细胞。方法是将小麦幼胚细胞进行高渗缓冲液预处理，用微米级的激光微束处理，然后在卡那霉素培养基上筛选出具抗性的愈伤组织及绿色小植株。第一年，从１５０个小麦幼胚中，在卡那霉素培养基上筛选出４株绿苗，取两株进行ＮＰＴ－Ⅱ酶活性分析，测到了ＮＰＴ－Ⅱ酶的活性。第二年重复实验，从２４５个小麦幼胚中，经筛选获得１株绿苗，进行了叶片ＤＮＡＰＣＲ扩增检测，转化的绿色小苗扩增出所导入的ＮＰＴ－Ⅱ基因编码的片段。结果表明，外源ＮＰＴ－Ⅱ基因已导入了小麦，并实现了整合表达。
- 王兰岚傅荣昭宋桂英张健徐正平孙勇如
- 关键词：小麦激光微束外源基因
- 巴西木的组织培养和快速繁殖研究被引量：13
- 1997年
- 巴西木的组织培养和快速繁殖研究刘桂珍１梁国平２王兰岚１陈正华１（１中国科学院遗传研究所，北京１００１０１；２云南热带作物研究所，景洪６６６１００）关键词巴西木；组织培养；快速繁殖ＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅａｎｄＲａｐｉｄＰｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆＤｒ...
- 刘桂珍梁国平王兰岚陈正华
- 关键词：巴西木快速繁殖
- 黑麦1R染色体微克隆文库的构建与分析被引量：11
- 1999年
- 通过玻璃针分离法 ,从黑麦 (SecalecerealeL .)根尖细胞中期分裂相中显微分离出 2条及 5条 1R染色体。经Sau3A接头介导的PCR(LA_PCR)方法对其进行体外扩增 ,得到了 0 .3～ 2 .5kb之间的DNA片段。以DIG标记的探针进行多次Southern杂交 ,证明显微分离出的染色体的体外扩增产物与黑麦基因组DNA同源 ,并且来自 1R染色体。然后利用 5条 1R染色体的第二轮PCR产物构建质粒文库 ,可得到 2 2 0 0 0 0个重组子。随机挑选 172个重组子进行分析 ,发现插入片段主要介于 30 0～ 180 0bp之间。此外 ,根据基因组点杂交结果推算出该文库包含约 42 %的中、高重复序列和 5 8%的单、低拷贝序列 ,而且文库的冗余度较低。研究构建的黑麦 1R染色体微克隆文库为 1R染色体高密度遗传图谱的建立以及位于其上的重要基因的定位与分离提供了便利。
- 周奕华党本元王槐胡赞民王兰岚陈正华
- 关键词：黑麦
- 玉米单染色体的分离和体外扩增被引量：40
- 1998年
- 建立了玉米单染色体的分离及体外扩增的方法。取95％乙醇固定后经果胶酶和纤维酶酶解的根尖制备染色体标本，用自制的微细玻璃针在倒置显微镜下挑取目的染色体。染色体DNA经Sau3A酶切后与人工合成的Sau3A连接接头连接，经两次PCR扩增获得足以用于构建单染色体DNA文库的扩增产物。片段大小为0．3～5kb，多数为0．5～3．5kb．与前人研究方法相比，所需底物量少（只需1条染色体），扩增片段大，为植物中小型染色体分离、体外扩增进而进行单染色体DNA文库构建奠定了基础。
- 胡赞民党本元周奕华崔丽华王兰岚张铁汉李良材陈正华
- 关键词：玉米染色体DNA扩增
- 抗菌核病转基因油菜植株的获得被引量：37
- 1999年
- 将携带菜豆几丁质酶基因的植物表达载体pBch 通过农杆菌介导法导入甘兰型油菜H165 中。经卡那霉素对T0 、T1 和T2 代植株进行连续的筛选和菌核病(sclerotiniasclerotinorium) 接种试验, 共获得33 株抗菌核病的T2 代植株。对其中的22 株进行PCR 检测, 从6 株扩增得到与菜豆几丁质酶基因大小对应的DNA 带型,Southern 杂交证实其中2 株呈现阳性结果, 表明外源基因已整合到油菜基因组中。对转化植株抗菌核病的接种试验及在菌核病高发区的种植试验表明, 含几丁质酶基因的转化体对菌核病具有抗性, 并已得到T3
- 张丽华党本元周奕华毛勇张铁汉曾君祉王兰岚陈正华
- 关键词：油菜几丁质酶基因育种
- 将菜豆几丁酶基因导入苹果砧木的研究被引量：34
- 1998年
- 以苹果砧木八楞海棠（Ｍａｌｕｓｍｉｃｒｏｍａｌｕｓ）为实验材料，用微束激光穿刺法将菜豆几丁酶基因导入苹果叶片，成功地获得了转基因植株。实验结果表明，以苗龄２６天的小苗上部刚展开的叶片再生频率可达１００％。经高渗缓冲液预处理后用激光微束穿刺导入外源ＤＮＡ可得到较高的转化频率。在１５０个再生叶片中经卡那霉素筛选得到２５株绿苗，经ＰＣＲ扩增检测，３株呈阳性结果，表明外源几丁酶基因已整合到苹果的基因组ＤＮＡ中。
- 赵慧宋桂英张光中刘桂珍李港丽张丽华张丽华徐正平毛勇陈正华
- 关键词：苹果砧木微束激光
- 王百合单染色体DNA文库的构建被引量：30
- 1998年
- 以王百合为模式植物建立了简单快速分离植物单染色体及扩增和克隆其DNA的方法 ,即显微操作分离单个染色体并放入Eppendorf管中 ,经Sau 3A酶切后在染色体DNA片段两端加上Sau 3A寡核苷酸人工接头 ,然后以寡核苷酸人工接头中的一条链为引物进行两轮PCR扩增 .PCR产物为 30 0～ 2 50 0bp ,多数为10 0 0bp左右 ,经Southern杂交证实PCR产物来自王百合基因组DNA .对单染色体第二轮PCR产物进行克隆 ,构建单染色体DNA文库 ,得到约 10 0 0 0 0个重组子 .对其中 84个重组子进行分析 ,插入片段为 30 0～180 0bp ,平均为 780bp .与以往方法相比 ,此方法避免了在纳升体积内酶解、连接等操作 ,扩增底物只需一条染色体而不是以往的几十条 ,而且克隆片段 (平均 780bp)大于以往的报道 (平均 6 50bp) .
- 党本元胡赞民周奕华崔丽华王兰岚李良材陈正华
- 关键词：单染色体DNA文库遗传育种
- 利用激光微束穿刺法将杀虫蛋白基因导入油菜的研究被引量：9
- 1999年
- 利用激光微束照射油菜子叶柄，将来自苏云金杆菌的杀虫蛋白（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ，ＩＣＰ）基因导入油菜细胞中，经植株再生和卡那霉素筛选，获得了转基因植株。对转基因植株进行了ＰＣＲ检测和饲虫实验，发现转基因植株为ＰＣＲ扩增阳性，某些植株表现出了较强的抗虫性。实验结果表明外源抗虫基因已被整合到油菜基因组并得到了表达。
- 侯丙凯宋桂英王兰岚周奕华刘桂诊陈正华
- 关键词：激光微束油菜转基因植株
- 用微束激光穿刺技术将商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入马铃薯的研究被引量：23
- 2000年
- 以马铃薯 (Solanum tuberosum L.)品种“津引 8号”微薯切片作为外植体 ,采用微束激光穿刺技术获得了商陆抗病毒蛋白 (PAP) c DNA的导入、整合与表达 .实验首次利用庆大霉素筛选马铃薯再生苗 ,庆大霉素筛选浓度为 80 mg/ L ,共得到 65株庆大霉素抗性苗 ,全部移栽成活 .PCR扩增和 PCR-Southern杂交分析表明 ,PAP c DNA已经稳定整合到马铃薯基因组 .攻毒实验发现 ,多数转基因植株生长健康 ,对供试病毒 PVX具有高度抗性 .
- 傅道林王兰岚张海燕陈正华
- 关键词：马铃薯
