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DEN-2临床分离株E基因部分序列原核蛋白表达: E蛋白是登革病毒(Dengue Virus,DEN)的包膜蛋白,存在抗体依赖的增强感染作用表位和免疫保护表位。近年来,有学者曾用多种表达系统来表达E蛋白,用于E蛋白结构与功能的研究及基因工程疫苗的研制。本课题将DEN B...; 刘世国左丽王娇; 文献传递

两株DEN-2 E基因部分序列pcDNA3．1重组质粒免疫BALA/c小鼠外周血淋巴细胞膜表面分子表达的动态观察: 本文通过用DEN2 B株、NGC株E基因部分序列与质粒pcDNA3.1构建的重组质粒对BALB/c小鼠进行初次和加强免疫,动态检测实验小鼠外周血细胞淋巴细胞膜表面分子的表达水平,研究不同毒株E基因部分序列重组质粒诱发小鼠...; 王娇左丽李学政王丛; 文献传递

登革2型病毒NGC株感染白纹伊蚊C6/36细胞中浓核病毒DNA的扩增和序列测定: 2008年; 目的:探索白纹伊蚊C6/36细胞对登革2型病毒(Dengue Type 2 virus,DEN2)不敏感的原因。方法:根据Genbank提供的DEN2新几内亚株(NGC株)NS1基因序列设计引物,设立病毒对照组、病毒DNA酶(DNase)处理组和细胞对照组,通过提取核酸、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、限制性内切酶(HindⅢ)酶切、1.5%琼脂糖凝胶电泳检测RT-PCR及其酶切产物,并对其扩增产物进行序列测定,用软件比对与白纹伊蚊C6/36细胞浓核病毒(Densonucleosis virus,DNV)基因的同源性。结果:经RT-PCR,细胞和病毒组均出现约1300bp的条带,不能被HindⅢ酶切,而病毒DNase处理组未能扩增出此条带;经GenBank比对,该片段序列与白纹伊蚊C6/36细胞DNV部分序列的同源性达95%以上。结论:C6/36细胞对DEN2不敏感的原因是由于伊蚊C6/36DNV的污染。; 王娇左丽周永兵; 关键词：登革热病毒伊蚊属

两株登革2型病毒E基因部分序列pcDNA3．1重组质粒免疫BALA/c小鼠特异性抗体产生水平的比较: 利用DEN2 B株、NGC株E基因部分序列与质粒pcDNA3.1构建的重组体,对BALB/c小鼠进行初次和加强免疫,动态检测小鼠外周血产生特异性IgM/IgG类抗体和特异性中和抗体水平,研究不同毒株E基因部分序列重组质粒...; 王娇左丽王丛李学政; 文献传递

两株登革2型病毒E基因重组质粒免疫BALB／c小鼠产生特异性抗体水平的比较: 2009年; 目的用含登革2型病毒（Dengue type2virus，DEN2）B株和NGC株E基因部分序列pcDNA3．1重组质粒初次和加强免疫BALB／c小鼠，观察免疫小鼠体液免疫应答的差异。方法用两株含DEN2E基因部分序列（1～476bp）的pcDNA3．1重组质粒与含有佐剂的重组质粒共同免疫BALB／c小鼠，初次免疫后第14天、28天分别加强免疫1次，共免疫3次。收集初次免疫后第14、28、42、70和98天外周血标本，间接ELISA法测定小鼠血浆特异性IgM／IgG类抗体水平，细胞病变抑制法检测特异性抗体水平。结果不同DEN2毒株E基因部分序列的pcDNA3．1重组质粒初次和加强免疫BALB／c小鼠诱导特异性IgM、IgG类抗体的产生存在差异，B株重组质粒加强免疫小鼠后特异性抗体效价水平较高并持续较长时间。结论DEN2两毒株E基因部分序列重组质粒免疫小鼠后诱生的特异性抗体类别、水平存在差异。; 王娇左丽王丛李学政; 关键词：登革2型病毒 E基因重组质粒 BALB/C小鼠特异性抗体

登革2型病毒NGC株E基因部分序列原核蛋白表达被引量：1: 2008年; 目的:构建登革2型病毒NGC株E基因区1～476bp的原核表达载体并进行原核表达。方法:将登革2型病毒NGC株E基因区部分序列克隆入原核表达载体pET28a(+),命名为pET28a(+)-En;经酶切、PCR及测序鉴定后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE、Western印迹鉴定表达蛋白;对表达蛋白进行纯化,并滴定对C6/36细胞的TCID50。结果:(1)成功构建了pET28a(+)-En原核表达重组质粒,SDS-PAGE分析表明,E基因区部分序列获得高效表达,相对分子量约为23kD,表达量约占菌体总蛋白的29%;Western印迹表明该目的蛋白可与登革2型病毒鼠单克隆抗体结合;(2)用Ni柱亲和层析法纯化原核表达蛋白,纯度达90%;(3)DEN-2NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞的TCID50为10-4.88/0.1ml。结论:pET28a(+)-En可在BL21(DE3)菌株中高效表达,DEN-2NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞有一定的细胞毒作用。; 刘世国左丽王娇; 关键词：登革热病毒基因基因表达

DEN-2分离株E基因部分序列原核蛋白表达: 2009年; 目的通过构建登革2型病毒(DEN-2)临床分离株(B株)E基因区1-476bp的原核表达载体,进行原核表达,为DEN-2E蛋白功能的研究提供基础依据。方法将DEN-2B株E基因区部分序列克隆入原核表达载体pET28a(+),命名为pET28a(+)-Eb;经酶切、PCR及测序鉴定后转化BL21(DE3)菌株,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白印迹(Western blot)鉴定表达蛋白;对表达蛋白进行纯化,并滴定对C6/36细胞的细胞半数致死量(TCID50)。结果成功构建了pET28a(+)-Eb原核表达重组质粒;SDS-PAGE分析表明,E基因区部分序列获得高效表达,其相对分子量约为23kDa,表达量约占菌体总蛋白的29%;Western blot表明,该目的蛋白可与DEN-2鼠单克隆抗体结合。用Ni柱亲和层析法纯化原核表达蛋白,纯度达90%。DEN-2B株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞的TCID50为10-5.31。结论pET28a(+)-Eb可在BL21(DE3)菌株中高效表达;DEN-2B株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞有明显的细胞毒作用。; 刘世国左丽王娇; 关键词：原核表达

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王娇