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王春苗: 作品数：20 被引量：49H指数：5; 供职机构：河北北方学院医学检验学院更多>>; 发文基金：河北省自然科学基金河北省高等学校科学技术研究指导项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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HeLa细胞cDNA文库及酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CPn0308的构建被引量：2: 2012年; 旨在利用酵母双杂交系统构建HeLa细胞的cDNA文库,并构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CPn0308。从HeLa细胞中提取总RNA,应用SMARTTM技术,构建以pGADT7-Rec为载体的HeLa细胞酵母GAL4 AD融合cDNA文库。应用PCR技术扩增目的片段CPn0308,并成功克隆该基因到诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒转化酵母菌株AH109后,检测诱饵载体有无自激活和细胞毒性作用。结果显示,文库展现良好的多态性,重组诱饵载体pGBKT7-CPn0308不具有毒性且未自主激活报告基因,说明该文库和诱饵质粒可用于酵母双杂交系统。; 田颖新王春苗刘雪晴贾晓晖贾天军; 关键词：HELA细胞 CDNA文库酵母双杂交自激活

刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建: 目的克隆刚地弓形虫(Toxplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)基因并构建重组质粒pVAX1-ROP18,并检验其在真核细胞中的表达情况.方法 ROP18 基因和质粒pVAX1 分别经Hind Ⅲ 和...; 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠; 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达

刚地弓形虫ROP12蛋白的生物信息学分析被引量：11: 2015年; 目的通过在线生物程序分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白12(ROP12)的生物信息学特性。方法通过在线ProtParam、SOSUI、SOPMA、TMHMM、MotifScan及SYFPEITHI等程序,同时结合DNASTAR、DNAMAN生物信息学软件,分析TgROP12蛋白的生物学特性,如理化性质、二级结构、结构域及抗原表位等。结果TgROP12蛋白含有236个氨基酸,其为分子式C1125H1786N308O360S3,其分子质量和理论等电点分别为25.48ku和4.53。TgROP12蛋白具有信号肽序列和跨膜结构区域,其二级结构中β-转角和无规则卷曲分别占7.20%和44.92%;TgROP12蛋白含有8个亲水性较高(临界值为2.0)的区域,10个表面可及性较高(临界值为1.9)的区域;TgROP12蛋白含有保守结构区域和翻译后修饰位点各6个,并含有9个B细胞抗原表位和6个T细胞抗原表位。结论生物信息学分析显示TgROP12蛋白的免疫原性较好,可作为弓形虫病疫苗候选分子。; 郭玲玲王春苗张进顺张晓磊贾晓晖姜文静刘楠; 关键词：刚地弓形虫生物信息学

豚鼠衣原体GPIC0474多克隆抗体制备: 2012年; 目的对GPIC0474进行克隆、重组、表达并制备GPIC0474的多克隆抗体,鉴定GPIC0474是否与其相似基因肺炎衣原体包涵体膜蛋白CPn0308具有相似的定位。方法通过PCR扩增GPIC0474,构建pGEX-6P2-GPIC0474重组质粒并转化,筛选阳性克隆提取质粒进行测序分析。对重组质粒进行诱导表达,以GST-GPIC0474为免疫原,对Balb/C小鼠进行常规免疫,分离血清获得多克隆抗体。结果成功制备了GPIC0474的多克隆抗体。结论试验所制备的GPIC0474的多克隆抗体为研究GPIC0474的定位提供了材料,进而为以后研究GPIC0474的功能奠定了基础。; 王春苗贾天军; 关键词：基因克隆表达多克隆抗体

杆状病毒与宿主细胞的相互作用被引量：1: 2012年; 杆状病毒与其宿主之间形成了相互适应的关系,它们之间的相互作用是多方面的,本文对杆状病毒与宿主之间相互作用的研究作了简要的阐述.; 王春苗张艳阳; 关键词：杆状病毒宿主相互作用

刚地弓形虫RH株ROP18-ROP12复合基因真核表达载体的构建被引量：2: 2015年; 目的构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)与ROP12的复合基因真核表达重组质粒,并检验其在真核细胞中的表达情况。方法重组质粒p VAX1-ROP18和p VAX1-ROP12分别经Bam HⅠ和XbaⅠ双酶切,将ROP12基因克隆至p VAX1-ROP18重组质粒。经菌落PCR、酶切及测序鉴定正确的重组表达质粒p VAX1-ROP18-ROP12转染至He La细胞。同时设空质粒组、p VAX1-ROP18转染组和p VAX1-ROP12转染组。提取各组He La细胞的总RNA并逆转录为c DNA,分别进行管家基因β-肌动蛋白和ROP18-ROP12复合基因的RT-PCR鉴定;同时,采用间接荧光免疫法和蛋白质印迹(Western blotting)法检测重组质粒p VAX1-ROP18-ROP12瞬时转染He La细胞后蛋白的表达情况。结果重组质粒p VAX1-ROP18-ROP12的菌落PCR电泳显示在约2 373 bp处出现特异性扩增片段,与预期大小相符。提取重组质粒经HindⅢ、Bam HⅠ和XbaⅠ单酶切、双酶切及三酶切鉴定均正确。测序结果显示,p VAX1-ROP18-ROP12重组质粒与已发表的弓形虫RH株ROP18基因(登录号为AM075204.1)序列一致性为100%,与弓形虫RH株ROP12基因(登录号为DQ096559.1)序列一致性为99%。脂质体转染后各组β-肌动蛋白的RT-PCR扩增产物均为613 bp,与预期大小相符。p VAX1-ROP18-ROP12转染组的ROP18-ROP12复合基因扩增产物大小为2 373 bp,而其他组未见条带。间接荧光法检测显示,在重组质粒转染的He La细胞胞浆中观察到黄绿色荧光,而对照组无黄绿色荧光。Western blotting法检测显示,融合蛋白ROP18-ROP12相对分子质量(Mr)约为85 000。结论构建了重组质粒p VAX1-ROP18-ROP12,该质粒能在真核细胞中表达。; 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖王春苗姜文静朱晓波贾天军; 关键词：刚地弓形虫真核表达

刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建被引量：3: 2015年; 目的 PCR扩增刚地弓形虫(Toxplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)基因,构建真核表达载体pVAX1-ROP18,并检验其在真核细胞中的表达。方法 ROP18基因和质粒pVAX1分别经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,在T4连接酶作用下连接过夜,将连接产物转化至大肠埃希菌E.coil XL1-Blue感受态细胞,经菌落PCR、双酶切及测序正确的重组质粒pVAX1-ROP18转染至HeLa细胞内。试验设空白对照组和pVAX1空质粒对照。提取各组HeLa细胞的总RNA并将其逆转录成cDNA,分别进行管家基因β-actin和ROP18基因的RT-PCR扩增;采用Western blot法检测转染后各组细胞ROP18蛋白的表达情况。结果经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,ROP18基因的RT-PCR扩增片段大小为1 665bp,与预期值相符;ROP18基因重组质粒转化菌菌落PCR产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定,大小为1 665bp,与预期值相符;双酶切重组质粒得到预期酶切片段;重组质粒的目的基因序列与弓形虫RH株ROP18基因(登录号AM075204.1)序列比对完全一致。脂质体转染后各组β-actin的RT-PCR扩增目的片段均为613bp,与预期值相符;pVAX1-ROP18重组质粒转染组的ROP18的RT-PCR扩增目的片段大小为1 665bp,而其他组无该目的基因条带。Western blot检测重组质粒pVAX1-ROP18能够在HeLa细胞内表达ROP18蛋白。结论成功构建了真核表达载体pVAX1-ROP18,且该重组质粒能够在真核细胞内表达ROP18蛋白。; 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠; 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达

弓形虫ROP11核酸疫苗免疫保护作用的研究被引量：7: 2014年; 目的观察ROP11核酸疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法 40只BALB/c小鼠随机分为实验组、空质粒对照组、PBS对照组和空白对照组,每组10只,均通过股四头肌注射免疫小鼠。其中实验组每鼠注射pcDNA3.1(+)-ROP11重组质粒100μg(1μg/μl),空质粒对照组注射pcDNA3.1(+)质粒100μg(1μg/μl),PBS对照组注射无菌PBS缓冲液100μl,空白对照组不注射。共免疫3次,每次间隔2周,末次接种量均加倍。分别于每次注射前和末次注射后第2周检测小鼠血清特异性IgG和细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10。末次注射后2周各组小鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子1×103个/只,观察其存活时间,评价免疫效果。结果 ROP11核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,实验组小鼠血清特异IgG随着免疫次数的增加而显著增高(P<0.05)。血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10均不同程度升高(P<0.05)。重组质粒免疫组、空质粒免疫组、PBS和空白对照组小鼠经RH株弓形虫攻击感染后的平均存活时间为236.3、97.8、96.3和96.2h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ROP11核酸疫苗对BALB/c小鼠弓形虫感染有一定的免疫保护性,为进一步研究ROP11核酸疫苗的生物学功能提供了实验基础。; 张晓磊张丽骞王春苗姜文静贾天军郭玲玲张进顺; 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护

察汗淖放线菌资源探查及抗菌活性筛选: 2023年; 【背景】细菌耐药形势严峻,寻找新型抗生素迫在眉睫。放线菌是生产抗生素的重要药物资源。盐湖是一种高盐度的内陆水体,既往研究表明其中的放线菌物种多样、新资源丰富、生物活性广泛,极具开发潜力。【目的】探究察汗淖盐湖土壤中放线菌菌种的组成,并筛选抗菌活性菌株,为发现新颖的抗菌化合物储备菌种资源。【方法】采用19种选择培养基,以涂布平板法分离放线菌。基于16S rRNA基因的相似度鉴定菌株,并分析其多样性和新颖性。根据菌属类别及其新颖性,选择代表菌株进行Ⅰ型、Ⅱ型聚酮合酶(polyketide synthases,PKS)和非核糖体肽合成酶(non-ribosomal polypeptide synthases,NRPS)抗生素生物合成基因的PCR扩增;代表菌株的发酵液上清和菌体分别经乙酸乙酯和丙酮提取后,采用纸片扩散法进行抗菌活性检测。【结果】从9个土壤样品中分离获得250株放线菌,隶属于放线菌纲的9个目16个科28个属,链霉菌属(88株,占比35.2%)和拟诺卡氏菌属(68株,占比27.2%)为优势菌属。15株链霉菌与近缘菌株16S rRNA基因的最高相似度低于98.65%,推测其归属于4个链霉菌属新种,同时还发现了拟诺卡氏菌属和类诺卡氏菌属新种。75株代表菌株中,66株放线菌至少检出1种抗生素生物合成基因,20株同时检出3种功能基因。筛选出7株抗菌活性较强的放线菌,包括5株链霉菌、1株拟诺卡氏菌和1株原小单孢菌。【结论】察汗淖盐湖土壤中可培养放线菌资源较丰富,部分菌株产生的活性物质抗菌活性强,值得进一步开展次级代谢产物的研究。; 王春苗王聪聪张宁宁董璐王霞冯雪梅付娆李小俊; 关键词：放线菌多样性抗菌活性

基于成果导向教育理念的“病原生物学”课程教学改革探索与实践被引量：10: 2022年; 为进一步提升教学质量,基于成果导向教育(outcome based education,OBE)理念,探索病原生物学课程教学体系的改革和应用效果。课前,教师通过超星泛雅网络教学平台上传学习资料,明确教学目标,精心设计预习任务。课中,教师对学生的预习成果进行测试,进而有目的地实施教学并在课程中融入思政元素,激发学生的学习动力并培养社会主义核心价值观;运用思维导图整合学生的逻辑思维;设置多种互动环节提高学生的主动性。课后,优化考核评价体系,运用综合评价及反馈提高学生的学习效果。教学改革最终实现“以学生为中心,以成果为导向”的目标,培养能力突出的高素质应用型医学人才。; 王春苗卢致民张秀昌王燕李小俊; 关键词：病原生物学教学改革

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