王磊
- 作品数：7 被引量：12H指数：1
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- 一种快速两步革兰染色法的建立
- 2022年
- 目的:通过对革兰染色液配方的改良,建立一种快速两步革兰染色法.方法:配制多种两步法革兰染色液,不断优化染色时间,建立一种快速两步革兰染色法,然后将其与临床快速四步革兰染色法染色结果进行比较.结果:两步法A液15s、B液10s染色效果好,分别用两步法、四步法各染100张涂片,其中两步法合格率为94%,四步法为87%.以合格率计算,二者结果经统计学分析无明显差异,两步法可以达到与现有临床快速四步法相同的染色效果.结论:本研究建立的两步革兰氏法能满足临床工作需要,可以用于临床.
- 张蓉张雅惠唐小涵王馨语王磊钟志宏
- 关键词：革兰氏染色快速染色法媒染剂
- 嗅鞘细胞无血清上清液诱导C17.2神经干细胞定向分化及分化后细胞活力检测被引量：1
- 2014年
- 目的探讨体外采用嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)无血清上清液诱导小鼠C17.2神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元定向分化及分化后的细胞活力。方法采用新生3 d昆明小鼠嗅球,分离培养OECs,并制备无血清上清液。C17.2 NSCs置于含15%FBS的H-DMEM/F12培养基培养,传至第3代,待细胞生长至80%融合时,分别加入OECs无血清上清液(实验组)、H-DMEM/F12培养基(对照组)诱导培养;以未诱导的C17.2NSCs作为空白对照组。倒置显微镜下观察诱导后细胞生长情况,于诱导5 d后收集细胞行微管相关蛋白2(microtubuleassociated protein 2,MAP-2)及β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)免疫荧光染色鉴定,Western blot检测细胞巢蛋白(Nestin)、β-tubulin-Ⅲ、MAP-2蛋白表达情况,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率并行MTT法检测细胞活力。结果实验组:诱导后24 h细胞胞体开始收缩,3 d后分化的细胞明显增多,突触增长;对照组:诱导后24 h细胞形态无明显改变,3 d后细胞胞体皱缩,细胞核质浓缩,并发生细胞裂解、破碎。诱导后5 d,免疫荧光染色示实验组分化后细胞β-tubulin-Ⅲ和MAP-2表达均呈阳性,对照组及空白对照组均无表达。Western blot检测显示实验组中NSCs标志物Nestin蛋白表达明显减少,神经元标志物β-tubulin-Ⅲ和MAP-2表达增加,与对照组及空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组LDH漏出率为130.60%±6.86%,显著低于对照组的178.20%±5.44%;细胞活力为62.20%±3.82%,显著高于对照组的18.00%±3.83%;比较差异有统计学意义(P<0.05);但均低于空白对照组的100%(P<0.05)。结论含有OECs分泌蛋白的OECs无血清上清液不仅能诱导NSCs向神经元分化,还能维持分化后细胞活力。
- 王磊段答赵振宇滕晓华刘波葛丽特卢明
- 关键词：神经干细胞嗅鞘细胞诱导分化细胞活力
- 壳聚糖材料在脊髓损伤后神经再生的研究与作用被引量：1
- 2013年
- 背景:组织工程支架材料壳聚糖能复合多种种子细胞和神经因子,维持受损组织正常的解剖结构,防止胶质瘢痕挤压,对脊髓损伤后神经再生具有重要的意义。目的:介绍壳聚糖材料在修复脊髓损伤后神经再生领域的研究现状。方法:由第一作者检索1990至2012年PubMed数据库、CNKI数据库及万方数据库有关壳聚糖材料特性、壳聚糖导管移植治疗脊髓损伤的相关文献。结果与结论:壳聚糖具有良好的物理、化学性能,并且具有良好的生物相容性、生物降解性,免疫抗原性小和无毒性等特殊生物医学特性,与嗅鞘细胞、骨髓间充质干细胞及神经干细胞具有良好的亲和性。壳聚糖材料制备的神经导管、支架能在脊髓损伤后桥接神经断端,维持神经再生的正常解剖结构,提供种子细胞及细胞因子载体,为损伤后神经再生提供良好的微环境,但目前对于壳聚糖导管的研究仍不够全面,仍有很多问题待解决。
- 王磊卢明
- 关键词：生物材料壳聚糖脊髓损伤种子细胞神经再生
- 人嗅黏膜间充质干细胞的体外培养、鉴定及诱导分化的研究被引量：1
- 2015年
- 目的 :建立人嗅黏膜间充质干细胞的获取、分离、培养方法。方法 :通过人嗅黏膜组织贴壁法体外分离、培养嗅黏膜间充质干细胞,观察细胞形态学,绘制其生长曲线,观察其细胞周期分析,进行流式细胞仪检测来观察其细胞表面标记物。结果 :培养的人嗅黏膜间充质干细胞形态上以梭形为主,细胞排列呈放射状,细胞增殖迅速。生长曲线及细胞周期结果提示人嗅黏膜间充质干细胞符合细胞正常生长特征且细胞增殖较活跃。第5代人嗅黏膜间充质干细胞表达间充质干细胞阳性标记物CD73,CD90,不表达造血干细胞标记物CD34,CD45。细胞进行成脂肪组织、成骨组织诱导后,细胞油红O染色可见红色脂滴,茜素红染色后可见钙盐沉积。结论 :人嗅黏膜组织块贴壁培养法是一种有效的具有简便操作性的方法,通过此方法培养出的细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,细胞经诱导后具有多向的分化潜能,为其今后的临床应用提供了充足的种子细胞来源具有重大意义。
- 葛丽特段答王磊赵振宇滕晓华卢明
- 关键词：嗅黏膜间充质干细胞原代培养生物学特性
- 低氧微环境促进嗅黏膜间充质干细胞向神经元分化及其相关机制被引量：1
- 2016年
- 目的:研究低氧微环境下利用嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)上清液诱导嗅黏膜间充质干细胞(olfactory mucosa mesenchymal stem cells,OM-MSCs)更多地向神经元分化及其相关的机制。方法:分离培养OECs和OM-MSCs,应用流式细胞仪和免疫荧光方法分别进行鉴定;实验将OM-MSCs分为3%O_2+低氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)抑制剂利非西呱(lifi ciguat,YC-1)+OECs上清诱导组(A组)、3%O_2+OECs上清诱导组(B组)及21%O_2+OECs上清诱导组(对照组)。采用免疫荧光检测分化后的神经元,采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)和Western印迹分别检测HIF-1α的mRNA及βIII-微管蛋白(βIII-tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic portein,GFAP)的表达,再用膜片钳检测分化后的神经元钾离子通道开放情况。结果:实验各组相比较,B组OM-MSCs诱导后免疫荧光显示βIII-tubulin表达最多,Q-PCR显示B组HIF-1α表达明显增高(均P<0.05);Western印迹表明B组中βIII-tubulin蛋白表达显著增多,而胶质细胞标志物GFAP表达明显降低(均P<0.05);且诱导分化后的神经元经膜片钳检测发现钾离子电流。结论:低氧微环境下的OM-MSCs经OECs上清液诱导能显著提高其向神经元分化的比例,并明显降低了神经胶质细胞的产生,且与细胞HIF-1α信号通路被激活有关。
- 卓毅袁挺段答王磊葛丽特吴沛王昊卢明
- 关键词：低氧诱导因子-1Α嗅鞘细胞神经元
- 大鼠多器官原代细胞共培养模型在新兴污染物研究中的应用
- 魏会妙朱勇飞王磊张天宝
- 人嗅黏膜间充质干细胞的生物学特性被引量：11
- 2015年
- 目的:观察及研究人嗅黏膜间充质干细胞的生物学特性。方法:分离、培养、鉴定人嗅黏膜间充质干细胞,在透射电子显微镜、扫描电子显微镜下观察其超微结构,并在体外诱导其向脂细胞、骨细胞、神经干细胞球和神经元分化。结果:人嗅黏膜间充质干细胞生长以梭形细胞为主,呈放射状排列,高表达表面标志CD73和CD90,不表达CD34和CD45;在扫描电子显微镜下可见细胞表面有短而粗的微绒毛突起,在透射电子显微镜下可见到两种不同的细胞形态;具有成脂、成骨、成神经元干细胞球和神经元分化的能力。结论:人嗅黏膜间充质干细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能,可作为组织工程修复的理想的种子细胞。
- 葛丽特卓毅段答赵振宇赵振宇滕晓华王磊
- 关键词：间充质干细胞嗅黏膜诱导分化超微结构
