田芳
- 作品数：12 被引量：29H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重大科学仪器设备开发专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：理学生物学一般工业技术医药卫生更多>>
- 原子转移自由基聚合修饰银丝固定化酶反应器的制备及在蛋白质组鉴定中的应用
- 2013年
- 针对传统溶液酶解存在的酶解时间较长、酶自切物干扰以及蛋白酶不能重复使用等缺陷,通过电子转移生成催化剂的原子转移自由基聚合法修饰银丝,并以其为载体制备了一种新型的固定化酶反应器。用质谱考察了银丝固定化酶反应器(SW-Trypsin)的酶解效率、重复性和回收率。结果表明:绒毛状聚合物修饰的SW-Trypsin的酶解效率较高,酶解标准蛋白牛血清白蛋白(BSA)20 min后,肽段的氨基酸序列覆盖率可达93%,高于传统溶液酶解方法酶解16 h所得79%的覆盖率。使用该固定化酶反应器于一个月内8次酶解BSA所得的氨基酸序列覆盖率在89%到97%之间,平均覆盖率为94%,显示出良好的稳定性。另外,该固定化酶反应器酶解马心肌红蛋白(MYO)的回收率为87.67%。最后,用SW-Trypsin酶解腾冲嗜热菌全蛋白20 min,所鉴定到的氨基酸序列覆盖率和蛋白数量与同样条件下溶液酶解16 h的结果接近,且零漏切位点肽段的比例更高。加之容易分离的优点,SW-Trypsin在蛋白质组学的应用中具有良好的前景。
- 周廉淇张姣田芳张养军钱小红
- 关键词：蛋白质组学质谱银丝
- 质谱方法实现抗体类药物糖链修饰的鉴定与定量研究被引量：4
- 2018年
- 目的：基于液质联用的串联质谱技术,建立基于完整糖肽水平的抗体药糖型定性定量分析方法,并用于生物仿制药糖型研究。方法：基于液相色谱质谱技术,从完整糖肽水平对糖型进行定性定量分析,同时与传统超高效液相荧光检测（ultra performance liquid chromatography_fluorescence detection,UPLC-FLR）结果比较,获得最优分析策略,并用于曲妥珠单抗仿制药批次间糖型定性定量分析。结果：UPLC-FLR方法定量分析了贝伐单抗7种糖型;液质联用方法定量19种糖型;经亲水相互作用色谱（hydrophilic interaction liquid chromatography,HILIC）富集后,定量22种糖型。曲妥珠单抗仿制药批次间糖型定量结果显示良好的一致性。结论：基于液质联用的方法,具有速度快、灵敏度高、检测糖型种类多等优势,有望作为一种稳定的抗体药物糖蛋白位点特异性定量分析策略。
- 黄怡李晓宇田芳钱小红应万涛
- 关键词：液质联用抗体药物
- 金属元素标记结合毛细管液相色谱-质谱用于蛋白质N-末端肽的鉴定及相对定量新方法研究
- ＜正＞N-末端区域是蛋白质及多肽的重要结构和功能部位,包含许多有价值的生物学信息,对末端肽的鉴定对蛋白质的生物学功能研究具有重要意义。例如,N-末端氨基酸类型可影响蛋白质的半衰期（N端规则,the N-end rule）...
- 张养军颜辉郝斐然李佳斌李楠楠田芳李贤玉钱小红
- 关键词：化学修饰蛋白质组学
- 文献传递
- 金属标记结合液相色谱-质谱的蛋白质定量新方法研究
- 张养军王雪颖王昕田芳钱小红
- 关键词：液相色谱质谱
- 金属标记结合高效液相色谱-选择离子监测质谱的蛋白质绝对定量新方法被引量：1
- 2014年
- 建立了金属标记结合高效液相色谱-选择性离子监测质谱（SIM）的蛋白质绝对定量新方法。实验考察了金属标记效率、金属标记的稳定性、标记后肽段的色谱保留和质谱行为、新定量方法的线性范围和准确度。实验结果表明金属标记具有标记效率高，稳定性好，色谱保留行为一致等优点。另外，金属标记-选择离子监测质谱绝对定量方法灵敏度高，其定量限低至1 fmol，线性范围为1-500 fmol，线性范围内 R2值大于0.99，具有良好的线性关系；经过测量，标准肽段的回收率为117.01％，说明该方法具有较高的准确度。将该方法应用于腾冲嗜热菌中烯醇酶蛋白的定量分析，相对标准偏差为5.47％，表明该方法的精密度高。以上结果表明该方法可以用于生物样本中的蛋白质的绝对定量分析，为比较简单的生物样本中蛋白质的绝对定量方法提供了一种新的选择。
- 李佳斌周廉淇颜辉李楠楠郝斐然田芳张养军
- 关键词：高效液相色谱蛋白质
- 18O同位素标记定量肽段串联体蛋白质结合同位素稀释-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法被引量：2
- 2013年
- 建立了定量肽段串联体蛋白质(concatamers of Q peptides,QconCATs)结合18O同位素标记-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法。首先对QconCAT重组蛋白质进行了纯度表征,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表征结果表明重组蛋白质的纯度在99%以上,相对分子质量约为63.4 kDa。对QconCAT重组蛋白质酶切后的肽段混合物进行质谱分析,并经pFind和pLabel软件处理,验证了目标肽段。还考察了QconCAT重组蛋白质的酶切效率和18O标记效率,并对QconCAT蛋白质结合18O标记-同位素稀释-多反应监测质谱方法进行了评价。实验结果表明,采用该方法对腾冲嗜热厌氧菌(Thermoanaerobacter tengcongensis,TTE)中选定蛋白质的肽段进行绝对含量测定时,相对标准偏差小于20%,准确度较高,说明该方法可用于复杂生物样本中蛋白质的绝对定量。更重要的是所建方法不仅解决了细胞培养氨基酸稳定同位素标记(SILAC)技术的重标试剂价格昂贵的问题,也为定量蛋白质组学提供了一种新的方法。
- 李楠楠周廉淇毛心丽张姣卫军营林虹君李佳斌田芳张养军钱小红
- 关键词：同位素稀释
- 蜕皮素诱导基因表达细胞系的建立及其应用
- 2003年
- 目的 :建立一个可诱导表达目的基因的细胞系以研究新基因的功能。方法 :将含蜕皮素受体基因的表达载体pVgRXR稳定转染NIH3T3细胞 ,经zeocin抗性筛选 ,获得单克隆抗性细胞株 ,并进一步将可诱导表达质粒pIND_LacZ分别转染各单克隆细胞 ,经松甾酮 (ponasterone)A诱导和 β_半乳糖苷酶活性检测 ,鉴定出阳性单克隆。 结果与结论 :在建立稳定表达功能性蜕皮素受体的NIH3T3细胞系的基础上 ,我们进一步建立了一个可诱导表达红系分化相关基因 (EDAG)的细胞系 ,并对目的基因诱导表达特性及诱导目的基因表达后细胞表型的改变进行了初步观察 ,结果提示EDAG可能与血液细胞的增殖分化密切相关。
- 詹轶群许望翔田芳杨晓明
- 关键词：蜕皮素转染细胞系
- 基于质谱技术的蛋白质组定量方法被引量：1
- 2011年
- 对不同状态下的蛋白质在表达和修饰水平上进行精确定量,对于探索蛋白质的生物功能、发现疾病的生物标志物都具有重要意义,也是当前蛋白质组学的一个重要研究前沿。近年来,各种蛋白质组定量的新技术和新方法不断涌现,但仍面临着巨大挑战。本文就基于质谱技术的多种蛋白质组定量方法的基本原理、近几年的研究进展和应用进行评述。
- 王昕田芳张养军钱小红
- 关键词：蛋白质组学质谱
- 采用磁性载体制备的固定化酶反应器的载体粒径对蛋白质酶解性能的影响被引量：5
- 2013年
- 研究了以不同粒径的磁性颗粒为载体的固定化酶反应器在蛋白质酶解过程中,其粒径大小对团聚、酶解效率和漏切位点等的影响。实验结果表明,纳米级颗粒的酶负载量为亚微米级的3.5倍左右。但当酶固定量相同时,酶解效率基本相当。而在一定程度上加大磁性颗粒的粒径后,团聚现象得到明显改善。选择磁性载体粒径为20nm的固定化酶反应器,对其性能进一步考察。结果显示胰蛋白酶与牛血清白蛋白(BSA)的质量比为1∶1时,即能于1 min内实现快速酶解;当酶解10 min时,其零漏切位点肽段数和蛋白质序列覆盖率基本达到稳定,并明显优于溶液酶解水平。通过对漏切位点的统计分析比较,发现固定化酶解与溶液酶解时的漏切位点规律基本类似。因此,采用不同粒径磁性载体制备的固定化酶反应器均可在蛋白质组学研究中提供快速、高效的酶解。
- 张姣周廉淇田芳张养军钱小红
- 关键词：磁性颗粒蛋白质组学
- 纳米材料在蛋白质分析中的应用被引量：4
- 2013年
- 纳米材料因具有易与蛋白质结合而不影响其生化性质,可用于多种中间体的合成,可与酶、抗体结合而提高其性能等独特的优势而在蛋白质分析中得到了广泛的应用,尤其是与生物技术结合后,对纳米材料在蛋白质分离、富集和检测等方面的作用的研究已成为当前的热点。本文综述了纳米金、石墨烯、碳纳米管和碳纳米球在蛋白质分析中的应用,并对其未来的发展前景进行了展望。
- 林虹君张爱红田芳张姣张养军钱小红
- 关键词：纳米金石墨烯碳纳米管蛋白质分析
