程璐
- 作品数：9 被引量：52H指数：5
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫缓殖子期特异性抗原1基因的克隆、表达及对重组抗原的免疫反应性分析被引量：8
- 2007年
- 目的克隆与表达弓形虫缓殖子期特异性抗原1(BAG1)的基因,并分析重组抗原的免疫反应性。方法诱导体外培养的弓形虫RH株速殖子向缓殖子转化,用RT-PCR法从缓殖子期弓形虫扩增BAG1基因片段,进行序列分析;构建表达重组质粒pET32a(+)-BAG1,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达;表达蛋白经次氨基三乙酸镍(Ni-NTA)琼脂糖亲和层析纯化后,蛋白质印迹(Western blotting)分析与ELISA分析其免疫反应性。结果从缓殖子期弓形虫克隆的BAG1基因长690bp,构建的重组质粒pET32a(+)-BAG1经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达重组BAG1。Western blotting分析显示纯化的重组BAG1(SAG1)能被弓形虫慢性感染血清识别。ELISA结果表明重组BAG1抗原检测350份人血清弓形虫IgG抗体的阳性率为17.4%,显著高于重组SAG1抗原的阳性率12.6%(P<0.05)。结论原核表达的重组BAG1抗原具有特异的免疫反应性。
- 王琼吴焜陈晓光郝丽程璐
- 关键词：弓形虫基因表达免疫反应性
- 弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统的构建被引量：3
- 2008年
- 目的构建弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统,为弓形虫基因功能研究提供工具。方法通过PCR和酶切连接,首先构建弓形虫主要表面抗原1(SAG1)基因启动子驱动的绿色荧光蛋白基因载体pBSK-SAG1/5UTR-eGFP-SAG1/3UTR(pBSK-SAG1/GFP),然后构建以弓形虫热休克蛋白HSP70基因启动子驱动的反向重复序列RNAi载体pBSK-HSP70/5UTR-IntronC-HSP70/3UTR,将载体pBSK-SAG1/GFP中的SAG1/5UTR-eGFP-SAG1/3UTR片段克隆到载体pBSK-HSP70/5UTR-IntronC-HSP70/3UTR中形成载体pBSK-GFP-Hairpin,再将该载体中的GFP-Hairpin片段克隆到载体pHANA-0.5中形成弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统pHANA-hairpin。通过PCR分别扩增SAG1和缓殖子蛋白1(BAG1)基因的正向和反向序列,通过酶切连接,将正向和反向序列克隆到载体pHANA-hairpin中,分别构建靶向SAG1和BAG1基因的RNAi载体pHANA-hairpin/SAG1和pHANA-hairpin/BAG1。结果酶切鉴定和测序结果表明成功构建载体pHANA-hairpin、pHANA-hairpin/SAG1和pHANA-hairpin/BAG1。结论弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统成功构建,为下一步基因功能研究奠定基础。
- 吴焜程璐王琼郝丽陈晓光
- 关键词：弓形虫RNA干扰反向遗传学速殖子
- 老年尿路感染患者血清PCT、CRP水平变化及其临床意义被引量：18
- 2019年
- 【目的】分析老年尿路感染患者血清降钙素原(PCT)和C反应蛋白(CRP)水平的变化及其临床意义。【方法】选择2017年1月至2018年10月本院收治68例老年尿路感染患者的临床资料,根据尿路感染部位分为上尿路感染(A组,n=32)和下尿路感染(B组,n=36),选择同期于本院健康体检正常的30例志愿者作为对照组(C组)。检测各组血、尿白细胞计数(WBC)及血清PCT、CRP水平,并对PCT、CRP水平进行相关性分析。【结果】A组、B组血WBC、尿WBC及血清PCT、CRP水平均显著高于C组,且A组血清PCT、CRP水平均显著高于B组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后A组、B组血清PCT、CRP水平均显著低于治疗前,且A组血清PCT、CRP水平高于B组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清PCT水平与CRP呈显著正相关(r=0.73,P=0.009<0.05)。【结论】血清PCT、CRP水平联合检测可较好的辅助诊断老年尿路感染发生情况,有助于临床用药,值得在临床实践中推广应用。
- 习明程璐江文聪华伟周宇林万颂
- 广州及其周边地区福寿螺体内广州管圆线虫感染的现状调查被引量：10
- 2007年
- 目的了解广州及其周边地区福寿螺感染广州管圆线虫的情况,为防治提供依据。方法人工消化174只福寿螺,显微镜下检查消化液中有无广州管圆线虫幼虫。结果广东省广州市花都区、广州市越秀区、兴宁、化州、蕉岭、茂名等六地的福寿螺感染率分别为25.0%、23.1%、24.2%、18.5%、14.3%、13.3%,广东省东莞采集的福寿螺未发现感染广州管圆线虫。结论广东省广州市花都区、广州市越秀区、兴宁、化州、蕉岭、茂名等六地存在广州管圆线虫的自然疫源地。
- 郝丽吴焜程璐王琼陈晓光
- 关键词：福寿螺广州管圆线虫
- 弓形虫RH株体外培养及速殖子与缓殖子相互转化体系的建立被引量：3
- 2008年
- 目的建立弓形虫RH株体外培养及速殖子与缓殖子相互转化体系。方法纯化弓形虫RH株速殖子,接种于NIH3T3细胞单层,进行体外培养。接种4h后,换用pH8.1的碱性培养基进行速殖子向缓殖子的诱导转化培养,RT-PCR检测缓殖子蛋白1(BAG1)基因的表达。将诱导的缓殖子重新用pH7.2的培养基在常规环境下培养,诱导缓殖子向速殖子转化。为探索温度对速殖子向缓殖子转化的影响,将接种RH株速殖子的NIH3T3细胞分别放在37℃、39℃、41℃、43℃中诱导转化培养,RT-RCR检测BAG1基因的表达。结果弓形虫RH株能在NIH3T3细胞单层中生长增殖,更换高pH值碱性培养环境后,能诱导弓形虫速殖子转化为缓殖子,RT-PCR检测出缓殖子期特异蛋白BAG1基因的表达,并且随着诱导时间的延长,BAG1基因mRNA的转录水平逐渐提高,表明有更多的速殖子转化为缓殖子。恢复pH7.2的常规培养条件,碱性诱导的缓殖子能转化为速殖子。在41℃诱导条件下,能诱导RH株速殖子转化为缓殖子。结论成功构建弓形虫体外培养及速殖子与缓殖子相互转化体系,为转化机制的研究奠定基础。
- 吴焜王琼郝丽程璐陈晓光
- 关键词：弓形虫体外培养速殖子
- 弓形虫缓殖子期特异抗原SAG2C基因的克隆、鉴定与生物信息学分析被引量：5
- 2008年
- 目的克隆并鉴定弓形虫PRU株表面抗原SAG2C基因序列和cDNA序列,对比不同毒力弓形虫株(PRU、RH、ME49)中SAG2C基因序列,进行生物信息学分析。方法根据SAG2C基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从Prugniaud(PRU)株弓形虫基因组DNA和总RNA中扩增SAG2C基因,克隆入pMD19-T载体并进行序列测定。应用DNAMAN软件、NCBI网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)分析3种虫株之间SAG2C基因的同源性;利用生物信息学网站ExPASy(http://us.expasy.org/)对获得的基因及推导出的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果PCR扩增得到弓形虫PRU株SAG2C基因及其全长cDNA序列,酶切及PCR鉴定获得了正确的重组质粒,测序结果表明,获得SAG2C基因序列1225bp,全长cDNA序列1095bp,编码364个氨基酸。同源性分析显示,弓形虫Prugniaud株和RH株SAG2C基因同源性为97.14%;Prugniaud株与ME49株cDNA序列同源性为96.89%;编码氨基酸序列同源性为92%,N端为信号肽,C端疏水序列预测它为糖基磷脂酰肌醇固着蛋白,存在13个潜在抗原表位及多个保守功能区域。结论成功克隆了弓形虫缓殖子期特异抗原SAG2C基因序列及其全长cDNA序列,序列分析显示其为糖基磷脂酰肌醇固着蛋白。
- 程璐陈晓光吴焜杨培梁
- 关键词：弓形虫基因克隆生物信息学
- 截短弓形虫表面抗原SAG2C的基因克隆、蛋白表达及其初步应用
- 2014年
- 目的克隆截短的弓形虫表面抗原SAG2C基因,在大肠埃希菌中表达SAG2C蛋白,并探讨其在弓形虫病诊断中的应用。方法对已知的弓形虫SAG2C基因序列进行部分取舍,用RT-PCR技术从弓形虫Prugniaud(PRU)株的总RNA中扩增截短的SAG2基因片段,插入载体pET32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,应用Western blot和ELISA检测重组表达蛋白的免疫反应性。用重组SAG2C蛋白ELISA法检测弓形虫感染血清特异抗体,观察初步应用效果。结果从弓形虫PRU株总RNA中扩增出截短的SAG2C基因片段,成功构建了重组表达质粒pET32a(+)-tSAG2C;该重组质粒经IPTG诱导能表达可溶性大小为51ku的SAG2C蛋白。Western blot显示重组SAG2C能被弓形虫感染小鼠血清识别;以重组SAG2C蛋白、重组SAG1蛋白及BAG1蛋白ELISA检测精神病患者血清弓形虫抗体,阳性率分别为8.07%(23/285)、4.56%(13/285)和7.37%(21/285),差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了重组质粒pET32a(+)-tSAG2C,表达的融合蛋白具有免疫反应性,具有用于弓形虫感染诊断的潜在价值。
- 程璐吴焜陈晓光
- 关键词：弓形虫表面抗原克隆蛋白表达免疫反应性
- TORCH病原及其检测技术研究进展被引量：9
- 2008年
- TORCH是一组具有胎儿致畸作用病原微生物的缩写,妊娠早期感染危害更大,因此准确的产前诊断是避免不良妊娠结局的关键。本文就TORCH病原及其检测技术的研究进展予以综述。
- 程璐陈晓光
- 关键词：TORCH妊娠病原学
- 弓形虫缓殖子期特异性抗原SAG2C的基因克隆、蛋白表达及重组抗原的初步应用
- 刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)是一种专性细胞内寄生的单细胞原虫，能感染几乎所有的恒温动物(包括人类)，引起人兽共患的弓形虫病，估计全世界成年人中至少有1/3的人感染。弓形虫作为一种机会性致病原虫，在免疫功...
- 程璐
- 关键词：弓形虫病基因克隆蛋白表达重组抗原
- 文献传递
