罗宝正
- 作品数：40 被引量：109H指数：6
- 供职机构：珠海出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目珠海市软科学研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 实时荧光RT-PCR鉴别检测美洲型PRRSV及其变异株被引量：3
- 2011年
- 本研究建立了美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV）通用实时荧光RT-PCR和PRRSV变异株特异性实时荧光RT-PCR检测方法,对方法的灵敏度和特异性进行了验证,并对24个临床可疑样品进行检测。结果显示,实时荧光RT-PCR可以检测到0.47 TCID50的病毒培养液,灵敏度略高于病毒分离方法;两个实时荧光RT-PCR都具有良好的特异性,无交叉反应。在对24个临床可疑样品的检测中,阳性率与病毒分离方法一致（21/24）,检测时间也缩短为70 min。本研究建立的方法有潜力应用于传统美洲型PRRSV及其变异株（NSP2 1594~1680缺失）感染引起的PRRS和高致病性PRRS的监测和鉴别诊断。
- 罗宝正王连想薄清如王爱民徐海聂黄好兴
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株实时荧光RT-PCR
- TaqMan探针荧光PCR检测副猪嗜血杆菌方法的建立和应用被引量：5
- 2011年
- 为了建立基于TaqMan探针荧光PCR技术检测副猪嗜血杆菌的方法,本试验参考GenBank已发表的副猪嗜血杆菌(Hemophilus parasuis,HPS)转录起始因子infB基因序列,利用生物学软件Primer Express 2.0设计特异性引物和探针;并对副猪嗜血杆菌标准菌株提取DNA后进行PCR扩增,将产物测序鉴定后克隆到pMD18-T载体,再转化到大肠杆菌感受态细胞,细菌培养后对菌液进行PCR扩增,把产物测序鉴定后获得的重组质粒作为标准阳性对照;最后将建立的TaqMan探针荧光PCR方法进行灵敏度、特异性、稳定性试验。结果显示,该检测方法可以达到1μl 1.0×101拷贝数量级的灵敏度;另外,该方法可以将HPS和大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌分开,特异性良好;稳定性试验显示,2次批内变异系数分别为0.65%和0.92%,批间变异系数为1.31%,稳定性良好。对口岸送检的56份猪肉和12份血浆蛋白粉样品进行检测,结果表明TaqMan探针荧光PCR方法和细菌分离方法的检测效果一致。
- 罗宝正王振全薄清如徐海聂沙才华廖秀云陈伟生
- 关键词：副猪嗜血杆菌荧光PCR
- TaqMan探针荧光RT-PCR检测狂犬病病毒被引量：5
- 2012年
- 根据GenBank已公布的狂犬病病毒(rabies virus,RV)核蛋白(N)基因序列设计并合成一对特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的荧光RT-PCR检测狂犬病病毒方法。对狂犬病疫苗提取核酸后进行RT-PCR扩增,将目的条带切胶回收,克隆测序,重组质粒作为标准阳性对照。对建立的TaqMan探针荧光RT-PCR方法做灵敏度、特异性、重复性及稳定性试验。结果显示,该方法可以达到10拷贝/μL的灵敏度,可以将狂犬病病毒与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒和犬副流感病毒分开,方法重复性好,稳定可靠。
- 王振全罗宝正薄清如周昌芳白鸽许远靖王冲吴殿君
- 关键词：狂犬病病毒TAQMAN探针荧光RT-PCR
- 化学合成siRNA抑制H5N1亚型禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中的增殖
- 2013年
- 为研究RNA干涉对H5N1亚型禽流感病毒的增殖抑制作用,针对H5N1亚型禽流感病毒的NP和PA基因,设计4对siRNA干涉序列,并将其转染到鸡胚成纤维细胞,6h后接种H5N1亚型禽流感病毒液,在病毒感染后的16～56h内测定细胞上清中的病毒血凝价及观察细胞病变,并在病毒感染36h后检测NP、PA、HA和β-actin基因的mRNA水平。结果显示4对siRNA均能不同程度地抑制H5N1亚型禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中的增殖,但以PA为靶基因设计的一对干涉序列效果最优;实验还证实随着时间的延长,干涉效应逐渐减弱。本实验为研究RNA干涉技术防控禽流感提供了依据。
- 李儒曙于丹罗宝正薄清如徐海聂沙才华廖秀云
- 关键词：SIRNAH5N1亚型禽流感病毒鸡胚成纤维细胞增殖
- Taqman探针荧光PCR法检测熊源性成分被引量：2
- 2017年
- 为了对熊源性成分进行有效鉴定,本研究根据熊科动物线粒体DNA(mtDNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 3.0设计了一套特异性引物、探针,用以建立Taqman探针荧光PCR检测熊源性成分的方法。结果显示,所建立方法特异性强,15份熊属动物组织样品均出现特异性扩增曲线,20份阴性对照动物样品均未出现扩增曲线;方法灵敏度高,最低可以检测到10个拷贝数量级的重组质粒DNA,对熊胆粉稀释106倍后,仍可扩增出熊DNA;方法稳定性好,对相同的样品在不同时间进行2次重复检测,批内变异系数分别为0.88%、1.13%,批间变异系数为1.38%。结果表明,本研究建立的方法可应用于熊属动物组织及其加工品中的熊源性成分的检测。
- 邵建宏罗宝正薄清如赵福振帖丽莎徐海聂廖秀云彭玉芬陈敬
- 关键词：荧光PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒及其变异株荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
- 罗宝正王连想薄清如孙彦伟王爱民马静云徐海聂黄好兴伍时达毕英佐
- 本研究建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒及其变异株荧光RT-PCR方法，其中猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR可以检测所有美洲型PRRSV，变异株荧光RT-PCR只检测PRRSV变异毒（1594-1680变异）。所建立...
- 关键词：
- 关键词：病毒荧光RT-PCR变异株猪繁殖与呼吸综合征
- 基因芯片鉴别诊断禽流感和新城疫病毒方法的建立和应用
- 薄清如罗宝正徐海聂廖秀云沙才华王小玉杨素陈静静侯亚琴
- 本研究建立了一种分型检测禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)并能同时区分鸡新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）和鸡减蛋综合征病毒(Egg Drop Syndro...
- 关键词：
- 关键词：新城疫病毒基因芯片禽流感
- 昆虫杆状病毒系统表达口蹄疫病毒3ABC基因被引量：4
- 2005年
- 以O型口蹄疫病毒为研究对象,经过RTPCP扩增得到非结构蛋白3ABC基因,克隆到转移载体pFastbacHT,将其转入含穿梭载体Bacmid的DH10Bac,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到3ABC的重组穿梭载体Bacmid3ABC,再将其转染昆虫细胞HiFive。PCR鉴定证实3ABC基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过SDSPAGE和Westernblot检测,3ABC基因在昆虫细胞中表达了大小约为50kDa的蛋白条带,3ABC基因在BactoBac系统中的成功表达为建立以基因工程产品为抗原、鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条件。
- 罗宝正薄清如陈金顶王伟毅程钢何蕴韶
- 关键词：口蹄疫病毒杆状病毒
- 四重RT-PCR快速检测2013新型H7N9禽流感病毒被引量：6
- 2013年
- 目的建立能快速准确检测发热病人咽拭子样本中2013新型H7N9禽流感病毒的四重RT-PCR方法。方法针对甲型流感病毒的M基因设计通用引物,针对2013新型H7N9禽流感病毒的HA和NA基因设计特异性引物,选择人源看家基因beta-actin设计质控引物,通过优化实验条件建立一步法四重RT-PCR反应体系。与商品化实时荧光RT-PCR试剂盒进行方法比对。结果成功建立四重一步法RT-PCR筛查2013新型H7N9禽流感病毒的检测技术。结论该方法简便、实用、成本低廉,适用于2013新型H7N9禽流感病毒的快速检测。
- 莫秋华罗宝正杜田赵俊华祝琰王琪滕勇勇林继灿杨泽
- 关键词：甲型流感病毒
- Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分被引量：1
- 2015年
- 针对鲨鱼产品掺杂造假增多而缺乏有效鉴定技术的情况,作者根据Gen Bank中鲨鱼基因的线粒体DNA(mt DNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 2.0设计了一套特异性引物和探针,用来建立Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分的方法。结果表明,对13份已鉴定为鲨鱼鱼翅的样品进行检测,全部出现特异性扩增曲线,阴性对照没有荧光增长。方法特异性强,对市场购买的12份鲨鱼源性样品及9份其他鱼类样品进行检测,12份鲨鱼样品均出现荧光扩增曲线,而非鲨鱼样品均未出现荧光增长;方法灵敏度较高,可检测到的最低质粒拷贝数量级为10拷贝/μL;方法快速准确,操作简便,重复性好,稳定可靠,可应用于市场上鱼翅等常见鲨鱼源性产品的真假鉴定。
- 陈轩廖秀云陶旻罗宝正薄清如沙才华黄海超徐海聂杨素
- 关键词：TAQMAN探针荧光PCR
