罗杰
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市重大科技专项计划项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低浓度胰酶多次差速酶消纯化乳鼠雪旺细胞的实验研究被引量：3
- 2009年
- 目的介绍一种新的简便有效的体外培养和纯化雪旺细胞（SCs）方法，以获取足够数量、高纯度的SCs。方法取新生3～5d的SD乳鼠坐骨神经和臂丛神经，用胶原酶消化后收集细胞进行原代培养，细胞接种浓度为3×10^5个／mL，在接种72h内用胰酶分步多次消化进行提纯。结果该方法与1．25g／L胰酶差速酶消提纯SCs相比．能更有效地将SCs和成纤维细胞分离，经免疫荧光染色显示，SCs的纯度能达到95％以上。结论本方法简便易掌握，可重复性高，能获得足够数量、高纯度的SCs供细胞移植研究。
- 林建浩徐如祥马旭张洪钿闫中杰罗杰李西锋卢凤飞
- 关键词：雪旺细胞纯化
- 多孔金属材料镍钛合金与大鼠骨髓基质细胞的生物相容性研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究多孔处理的新型镍钛合金材料与大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)的生物相容性,探索新型生物工程材料的生物学特性。方法SD大鼠体外培养BMSCs,将细胞分别接种于致密、大孔、小孔组镍钛合金材料表面,建立体外共同培养。采用MTT法检测第3天BMSCs的增殖率;第7天采用Hoechst33342标记细胞,荧光显微镜下观察各材料组细胞数的差异;扫描电镜观察细胞在各组材料上的附着和生长情况。结果大孔、小孔组材料表面的细胞在第3天细胞增殖率和致密组相比有显著性差异(P<0.05),第7天在荧光纤维镜下发现各组镍钛合金材料上均有细胞生长,大孔、小孔组细胞数和致密组相比有显著性差异(P<0.05),大孔、小孔材料之间细胞增殖率和细胞数无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜观察大孔、小孔组新型镍钛合金材料表面接种的BMSCs形态正常,增殖旺盛,黏附性良好。结论多孔处理的新型镍钛合金材料在体外实验中有良好的生物相容性,可促进BMSCs黏附、聚集和增殖。
- 罗杰柯以铨徐如祥姜晓丹薛杉吕云李森
- 关键词：镍钛合金多孔骨髓基质细胞生物相容性
- p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用被引量：3
- 2012年
- 目的构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株。方法采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线。结果经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7×106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组。结论成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖。
- 荆玉明罗杰张艳玲陈三三万沛颜仁和王宏昌陈白虹谭万龙李红卫
- 关键词：P38丝裂原激活蛋白激酶前列腺癌慢病毒
- 大鼠瘦素基因重组腺相关病毒的构建及在原代神经元细胞中的过表达被引量：2
- 2013年
- 目的构建携带大鼠瘦素(leptin)基因的重组腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),并鉴定其在原代鼠神经元细胞中介导的瘦素过表达,为肥胖症基因治疗研究奠定实验基础。方法提取大鼠脂肪组织总RNA,利用RT-PCR技术,获取目的基因瘦素cDNA,通过重组DNA技术,得到瘦素cDNA与pGEM-T载体的重组质粒,阳性重组子用PCR及测序分析鉴定。用Spe I和EcoR V双酶切将pGEM-Leptin中的瘦素基因片段切出,再克隆到AAV2表达质粒pTR-UF22中,构建瘦素重组AAV2载体pAAV2-CBA-leptin。以pDG作为辅助质粒用HEK293细胞包装AAV2-CBA-Leptin,并用一步重力流柱法纯化病毒,由荧光定量PCR测定病毒基因组DNA的拷贝数即为病毒滴度。然后将AAV2-CBA-Leptin及对照病毒AAV2-CBA-EGFP感染大鼠原代神经元细胞,分别用免疫染色和Western blotting鉴定外源基因在神经元的表达。结果测序证实瘦素基因与GenBank提供的原始序列完全一致。重组载体经酶切鉴定与预期结果完全一致,HEK293细胞包装病毒效果良好,得到滴度为1.5×1012vg/mL纯化的重组瘦素病毒AAV2-CBA-Leptin。Western blotting检测显示AAV2-CBA-Leptin能介导瘦素在大鼠神经元细胞中过表达,并随着病毒量的增加而增强。AAV2-CBA-EGFP感染鼠神经元细胞5d后95%左右的细胞有明显的绿色荧光,免疫染色和DAPI核酸染色显示荧光细胞均为神经元而神经胶质细胞无荧光。结论成功构建并包装了瘦素重组AAV2病毒并可介导瘦素在神经元细胞中高效、特异表达,从而为研究瘦素在中枢神经系统控制体重和糖尿病等方面的功能及基因治疗研究打下基础。
- 裴娜娜吴丽红高永新毛莹莹罗杰黄威刘闻张屹顾为望李红卫
- 关键词：瘦素腺相关病毒载体神经元细胞
