苗敏
- 作品数：16 被引量：16H指数：3
- 供职机构：合肥工业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金教育部“春晖计划”更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 番茄SlWD1基因的克隆及SlWD1与DDB1的相互作用被引量：2
- 2013年
- 在真核生物中,CDT2作为一个WD40家族蛋白,是CUL4-DDB1 E3泛素连接酶复合体的重要组成部分.其主要功能是将CUL4-DDB1 E3泛素连接酶和靶向蛋白连接起来,从而实现靶蛋白的泛素化修饰.利用RT-PCR技术和3’RACE技术,本研究在番茄中克隆到一个与人类CDT2同源的基因,命名为SlWD1.通过对番茄SlWD1蛋白序列与其它模式生物的蛋白序列进行氨基酸保守结构域分析和同源性比对,发现SlWD1具有2个非常保守的WD40家族的DWD结构域.酵母双杂交和免疫共沉淀实验都证明,SlWD1与DDB1具有相互作用;实时定量RT-PCR分析证明,SlWD1基因在各个组织中都表达,为组成型表达,但是,在生殖器官中的表达量要明显比其它的组织高.
- 张治国高永峰苗敏刘继恺孙晓春张凝李頔刘永胜
- 关键词：番茄E3泛素连接酶酵母双杂交免疫共沉淀
- 一种真核重组质粒及其应用
- 本发明涉及植物基因工程领域，公开了一种真核重组质粒，所述真核重组质粒为SlSUVH3组成型过量表达载体，所述SlSUVH3组成型过量表达载体由SUVH3基因与pBI121载体连接而成；本发明还公开了制备方法和应用。本发明...
- 苗敏高婕妤刘永胜高兰阳唐晓凤
- 文献传递
- 出芽酵母Saccharomyces cerevisiae转录抑制因子Rdr1负调控细胞胁迫应答被引量：5
- 2009年
- Rdr1是出芽酵母Saccharomyces cerevisiae的一个转录抑制因子,参与控制细胞的多重药物耐受性,并可能与细胞胁迫应答相关.利用PCR方法扩增RDR1基因片段,将其克隆至高拷贝表达载体pYES2/NTA上并诱导Rdr1蛋白在酵母细胞中过表达.为了揭示转录抑制因子Rdr1在胁迫应答中的作用,比较了RDR1过表达细胞、RDR1缺失突变体细胞和野生型细胞在过氧化氢处理、热胁迫和高盐处理条件下的生长状态,结果显示,RDR1过表达导致细胞对上述3种胁迫作用更敏感,而RDR1缺失则使细胞对这些胁迫作用的耐受性不受影响或有一定增强.为了揭示上述不同细胞在胁迫条件下生长状态的差异与细胞内抗氧化酶活性之间的关系,测定并比较了RDR1过表达细胞、RDR1缺失突变体细胞和野生型细胞中超氧化物岐化酶(superoxide dismutase SOD)、过氧化氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase G6PDH)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase GR)的活性.结果表明,RDR1缺失突变体细胞具高活性的SOD、过氧化氢酶、G6PDH和GR,而Rdr1过表达细胞中SOD、过氧化氢酶、G6PDH和GR的活性较低.RDR1对SOD和过氧化氢酶活性的影响要大于G6PDH和GR.细胞抗氧化酶活性的变化初步揭示,RDR1过表达细胞对胁迫的敏感和RDR1缺失突变体细胞对胁迫耐受性增加的原因.为转录抑制因子Rdr1在胁迫应答中的负调控作用及其机理提供了初步的遗传学和生物化学证据.
- 苗敏曹红平钟彦刘军王一慧刘昕张年辉刘科
- 关键词：胁迫应答抗氧化酶
- 番茄中一个抗病基因功能的研究
- 2017年
- 植物中最大的一类抗病基因(R)编码的蛋白质含有卷曲螺旋结构(coiled-coil,CC)、核苷酸结合位点(nucleotide-binding site,NBS)和富含亮氨基酸的重复序列(leucine-rich repeat,LRR)结构域。R基因以抗病著称。文章通过酵母双杂筛选方式获得了DDI3基因,该基因与番茄中重要功能基因DDB1具有相互作用,而又含有CC-NBS-LRR结构,预测具有R基因抗病性,参与植物抗病。研究中构建了DDI3过表达载体并通过根瘤农杆菌介导转化到野生型番茄中,筛选获得DDI3高表达的阳性转基因株系。通过病菌接种实验,观察植株发病情况和统计细菌菌落数,结果发现,转基因植株的抗病性明显高于野生型番茄。DDI3基因对提高番茄的抗病性有很高的价值,为采用基因工程方法改良番茄植株抗病性做出新的尝试,同时又与番茄DDB1基因具有相互作用,对研究DDB1基因在参与植物抗病途径中的功能研究提供新的方向。
- 许伟苗敏唐晓凤刘永胜
- 关键词：转基因番茄
- 番茄SlWDR141基因的克隆及功能研究被引量：4
- 2017年
- 为研究番茄WD40蛋白基因(SlWDR141)的功能,对SlWDR141蛋白进行生物信息学分析,发现SlWDR141蛋白在进化过程中高度保守,与土豆的同源性最高。在克隆SlWDR141基因全长序列的基础上,构建了亚细胞定位和酵母双杂交表达载体,证实SlWDR141蛋白主要定位在细胞核中,与DDB1具有相互作用。实时荧光定量PCR(real-time PCR)分析SlWDR141基因在组织中的表达谱,发现它在各个组织中均有表达,但在根中的表达量最高。为研究该基因的生物学功能,进一步构建了SlWDR141基因的干涉载体,用农杆菌介导法转化番茄得到转基因阳性番茄,荧光定量PCR鉴定出3个表达量下调的独立转基因株系。NaCl胁迫和Pst DC3000侵染野生型和转基因植株发现,转基因植株相对于野生型植株抗盐性和抗病性均下降,表明SlWDR141基因对盐胁迫和细菌侵染均起正调控作用。
- 余佳苗敏高兰阳杨述章邓恒郭秀红唐维刘永胜
- 关键词：番茄酵母双杂交转基因盐胁迫PST
- 一种基因、重组质粒及在提高番茄果实色素积累中的应用
- 一种基因，它具有序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。一种真核重组质粒，由序列表中SEQ ID NO：1所示核苷酸序列中的基因片段和真核表达载体构成，所述基因片段是起始密码子下游1135bp至1549bp的核苷...
- 刘永胜高永峰李颖楠刘继恺唐晓凤张治国苗敏
- 酵母(Saccharomyces cerevisiae)蛋白激酶SCH9激活环磷酸化调控胁迫应答被引量：6
- 2010年
- 通过比较野生型、△sch9和△sch9(SCH9-3HA)三种酵母菌种在葡萄糖、半乳糖、蔗糖和麦芽糖作碳源培养基上的生长表型研究SCH9是否参与酵母不同碳源代谢利用调控.结果显示,△sch9细胞菌落大小较野生型细胞小且有明显的生长缺陷,但这种生长缺陷在重新获得sch-3HA基因后得到恢复.通过比较野生型、△sch9和△sch9(SCH9-3HA)三种酵母菌种在渗透压胁迫和热胁迫条件下的生长表型发现sch9可能参与了酵母胁迫应答.利用抗SCH9570位磷酸化苏氨酸特异性抗体(anti-T570-P),通过变性免疫沉淀和免疫印迹方法,研究了生理条件下的△sch9(SCH9-3HA)细胞裂解液中SCH9激活环的磷酸化状态.结果显示,在生理条件下SCH9激活环T570位点发生了明显磷酸化.进一步研究了渗透压胁迫条件下SCH9激活环T570位点的磷酸化水平.结果表明,渗透压胁迫条件下SCH9激活环T570位点磷酸化水平较生理条件下显著增强.结果显示SCH9可能通过增强激活环磷酸化水平来参与调控酵母不同碳源代谢和胁迫应答.
- 刘军闾磊朱德燕苗敏曹红平钟彦刘科
- 关键词：酵母胁迫蛋白激酶信号传导
- 酵母转录抑制因子RDR1功能的初步研究
- 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)转录抑制因子 Rdr1,是锌簇蛋 Ga14p 家族中的一员,与酵母细胞的多向耐药机制有关。多向耐药性是存在于从细菌到人类的普遍现象。目前的研究表明, Rdr1通...
- 苗敏曹红平刘科
- 关键词：耐药性胁迫应答转录因子
- 文献传递
- 一种真核重组质粒及其应用
- 本发明涉及植物基因工程领域，公开了一种真核重组质粒，所述真核重组质粒为SlSUVH3组成型过量表达载体，所述SlSUVH3组成型过量表达载体由SUVH3基因与pBI121载体连接而成；本发明还公开了制备方法和应用。本发明...
- 苗敏高婕妤刘永胜高兰阳唐晓凤
- 番茄胞嘧啶甲基转移酶同源基因SlMET1功能研究被引量：1
- 2017年
- 真核生物中,DNA甲基化作为表观遗传学修饰的重要手段之一,影响了植物的大量生长发育过程。文章通过生物信息学分析确定番茄中的胞嘧啶甲基转移酶同源基因(SlMET1)并对其进行进化关系的分析;利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术从番茄cDNA中扩增出胞嘧啶甲基转移酶同源基因(SlMET1)全长,构建SlMET1与绿色荧光蛋白融合表达载体,通过在烟草瞬时表达系统,对其进行亚细胞定位;实时定量PCR分析SlMET1基因在番茄不同组织中的表达模式;同时,构建SlMET1与HA标签蛋白融合表达载体,通过免疫共沉淀分析其与DDB1的相互关系。研究结果表明:SlMET1基因在番茄各个时期和组织中都有表达,其中,叶片和花中表达量较高,在果实的变色期和红果时期表达量较低;通过绿色荧光融合蛋白载体的表达,确定SlMET1基因只在番茄细胞核中表达;通过免疫共沉淀分析确定SlMET1和DDB1之间存在相互作用。该研究为研究DDB1以表观遗传学的方式调控植物生长发育过程奠定了理论基础。
- 曹徐绿唐晓凤苗敏刘永胜
- 关键词：转基因番茄亚细胞定位免疫共沉淀
