袁婷
- 作品数：11 被引量：7H指数：2
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 小型猪体细胞克隆试验被引量：1
- 2010年
- [目的]建立体细胞克隆小型猪的技术平台并了解克隆效率。[方法]运用体细胞核移植技术,以小型猪胎儿成纤维细胞作为核移植供体细胞,以体外成熟卵母细胞作为核移植受体细胞进行体细胞克隆猪生产,并利用STR序列对所出生的克隆猪进行个体识别。[结果]将重构胚胎移植到5头代孕母猪体内,其中一头代孕母猪成功产下2头克隆小型猪。经过个体识别试验证实克隆小型猪来自供核细胞,与代孕母猪无直接亲缘关系。[结论]克隆小型猪的成功出生表明所建立的技术平台适于小型猪的克隆。
- 黄永业李小平周焱谢万华段新平谭广云李栋袁婷高飞谢光洪赖良学欧阳红生逄大欣
- 关键词：体细胞核移植小型猪克隆猪性别鉴定
- TIMP1基因重组真核表达质粒的构建及其在MCF-7细胞中的表达
- 2011年
- 目的构建3种TIMP1基因重组真核表达质粒,并在人乳腺癌MCF-7细胞中表达。方法将TIMP1基因分别插入3种真核表达载体pcDNA3.1(+)、pVAXⅠ和pEGFP-C1,构建3种重组表达质粒pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAXⅠ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1,转染MCF-7细胞,采用Real-time PCR和Western blot法检测TIMP1基因在MCF-7细胞中的表达。结果 3种重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;重组表达质粒pEGFP-C1-TIMP1转染MCF-7细胞48 h后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,而pcDNA3.1(+)-TIMP1和pVAXⅠ-TIMP1转染的细胞则观察不到绿色荧光;在转染的MCF-7细胞中,TIMP1基因mRNA转录水平和蛋白表达水平从高到低依次为pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAXⅠ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1。结论已成功构建了3种TIMP1基因重组真核表达质粒,其在MCF-7细胞中的表达量有差异。
- 李鹏马艳娇赵娜袁婷宫鹏涛李建华欧阳红生张西臣
- 关键词：基质金属蛋白酶抑制剂1真核细胞基因表达乳腺肿瘤
- 茎环法RT-qPCR定量检测细胞抗猪瘟病毒siRNA的
- RNAi(RNA interfererice)已成为特异抗病毒治疗研究的热点，但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(s...
- 刘帅李江南袁婷杨凡力逄大欣涂长春
- 文献传递
- 表达FLP重组酶pCEP4-FLP载体的构建及其在FLP/FRT重组系统中的应用
- 2012年
- 构建重组载体pCEP4-FLP和pEF1a-FRT-stop-FRT-GFP,重组载体pEF1a-FRT-stop-FRT-GFP瞬时转染PK-15细胞24h后,再将重组载体pCEP4-FLP瞬时转染该细胞,利用荧光显微镜观察PK-15细胞GFP蛋白的表达情况,利用细胞流式技术统计绿色荧光蛋白表达效率.结果表明:重组载体pCEP4-FLP在细胞内能够表达FLP重组酶,并且表达的FLP重组酶能够识别FRT位点,删除两同向FRT位点间的DNA片段,为FLP/FRT位点特异性重组系统在转基因猪的应用奠定了基础.
- 肖雪宾袁婷纪元宋奇韩晓蕾武蓉林晓晨欧阳红生李莉
- 关键词：位点特异性重组
- Fat-1转基因克隆猪的制备研究
- ＜正＞ω-3不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids,PUFAs）是一类被广泛研究和关注的脂肪酸,越来越多的研究证明ω-3 PUFAs是人类及其他哺乳动物的生长和健康所必须的物质,对维持其正常...
- 袁婷谢万华谭广云周炎黄永业逄大欣赖良学欧阳红生
- 文献传递
- 绿色荧光小鼠胚胎干细胞的分离与培养
- 2010年
- 目的:建立绿色荧光小鼠胚胎干细胞系。方法:以ICR及GFP转基因小鼠为实验动物,冲取交配后3.5天小鼠GFP-/+囊胚,去透明带后进行完全培养,以13.5天鼠胚胎成纤维细胞(MEF)为饲养层,并对细胞克隆用亚克隆的方法分离扩大培养。结果:获得了边缘清晰,表面平滑,结构致密,隆起生长的鸟巢状克隆,碱性磷酸酶染色呈强阳性,干细胞特异性的多能因子OCT4及Nanog表达呈阳性,且能稳定表达绿色荧光的雄性干细胞系。结论:本文为小鼠ES细胞系的建立提供了一种稳定而可靠的方法。
- 谭广云谢万华周焱黄永业宋红肖李栋宋娜袁婷段新平逄大欣欧阳红生
- 关键词：EGFP胚胎干细胞小鼠
- 茎环法RT-qPCR定量检测细胞抗猪瘟病毒siRNA的表达被引量：3
- 2012年
- RNAi(RNA interference)已成为特异抗病毒治疗研究的热点,但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siN1和siN2)在细胞中的表达水平,设计并以交叉组合方法筛选了具有较高特异性和灵敏度的siRNA特异茎环引物(SLP-N1-6和SLP-N2-8),成功地建立了最优的siN1和siN2的茎环法RT-qPCR检测方法。该方法表现出良好的特异性和较高的灵敏度,能检测出102至108个拷贝的siRNA,至少可达7个数量级的检测范围,平行性好(Rsq=0.999),扩增效率高(Eff.=98.2%)。茎环法RT-qPCR能准确地定量检测抗CSFV的PK-15细胞克隆的siN1/siN2表达水平,可结合常规的检测病毒水平的间接免疫荧光和TCID50等技术定量评价RNAi抗CSFV的有效性,为未来抗猪瘟转基因猪的抗病毒效果评价提供了先进的检测技术。
- 刘帅李江南袁婷杨凡力逄大欣涂长春
- 关键词：实时定量PCR
- CCNL1真核表达载体的构建及其在MDA-MB-231细胞中表达的鉴定
- 2011年
- 目的:构建pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1和pEGFP-C1-CCNL1三组重组载体,鉴定其在MDA-MB-231细胞中的表达情况。方法:用PCR方法扩增得到CCNL-1基因,然后用EcoRⅠ、HindⅢ酶切CCNL1基因,将其分别与pcDNA3.1(+)、pVAXⅠ和pEGFP-C1载体连接,构建pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1和pEGFP-C1-CCNL1三组重组载体,然后用Fugene HD转染试剂将构建的真核表达质粒转染入MDA-MB-231细胞,48h后,用荧光定量PCR和Western blotting方法检测CCNL1在MDA-MB-231细胞中的差异表达。结果:转染MDA-MB-231细胞48h后,在荧光显微镜下,pEGFP-C1-CCNL1重组载体能观测到绿色荧光,而pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1重组载体未观测到;在MDA-MB-231细胞中CCNL1的mRNA和蛋白质表达水平由高到低依次为pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1和pEGFP-C1-CCNL1。结论:成功构建pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXI-CCNL1和pEGFP-C1-CCN1三组重组载体,且pcDNA3.1(+)-CCNL1在MDA-MB-231细胞中高表达。
- 李鹏马艳娇徐晓芳袁婷宫鹏涛李建华李赫欧阳红生张西臣
- 关键词：真核表达载体
- 卵泡抑素结构域在人A204横纹肌肉瘤细胞中对肌生成抑制素的抑制研究
- 肌生成抑制素，又名生长分化因子8，属于TGF-β超家族成员之一，主要是负调控骨骼肌的生长与发育，也是目前已知的最强的骨骼肌生长抑制物。利用生物技术方法来阻断肌生成抑制素的活性是目前最常用的恢复肌肉生长和治疗肌肉相关疾病的...
- 袁婷
- 关键词：卵泡抑素肌生成抑制素抑制剂
- 文献传递
- 骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ转基因猪胚胎成纤维细胞克隆的构建与鉴定
- 2012年
- 目的:构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有FSⅠ-Ⅰ基因的细胞克隆,为研究FSⅠ-Ⅰ对猪骨骼肌的影响奠定基础。方法:通过RT-PCR方法从猪骨骼肌中扩增FS A(包含FS N端和结构域FSⅠ)和结构域FSⅠ;利用PCR方法分别从鼠基因组、人血液基因组和pcDNA3.1(+)载体上扩增出MCK增强子、ACTA 1启动子和BGHpolyA。将上述4个片段分别连接到真核表达载体pGKneotpAlox2上,构建骨骼肌特异性表达FSⅠ-Ⅰ(包含FS N端和2个连续FSⅠ结构域)的载体pGK-MCK-ACTA 1-FSⅠ-Ⅰ-BGHpolyA;用FuGENE○RHD转染猪胚胎成纤维细胞,经药物G418筛选和PCR鉴定阳性克隆。结果:成功构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ的表达载体pGK-MCK-ACTA1 promoter-FSⅠ-Ⅰ-BGHpolyA,并成功整合到猪胚胎成纤维细胞的基因组中,获得了整合有目的基因FSⅠ-Ⅰ的猪胚胎成纤维细胞克隆。结论:获得了骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ的猪胚胎成纤维细胞克隆,为通过核移植方法获得表达FSⅠ-Ⅰ转基因猪提供了供体细胞。
- 袁婷刘帅李小平唐成程韩晓蕾逄大欣欧阳红生
- 关键词：卵泡抑素真核表达
