计越
- 作品数：12 被引量：38H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划吉林省科技发展计划基金吉林省科技厅重大项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 重组病毒环境安全试验被引量：1
- 2012年
- 为检测重组病毒的环境安全性,将构建的重组病毒免疫小鼠、豚鼠、仔猪、犊牛,通过PCR、中和抗体、病毒分离培养等方法,对接种动物饲养环境中的水、土壤及粪便进行基因检测和病毒分离培养;将重组病毒分别与粪便、土壤、水等比混合后分别置于37℃、4℃、-20℃下,研究其存活能力。结果表明:重组鸡痘病毒饲养环境中的水、土壤、粪便中未检测出病毒基因,重组鸡痘病毒在自然条件下存活时间短,免疫重组鸡痘病毒的动物不能将病毒传染给亲密接触的同居动物,不会污染环境和威胁人类健康。
- 金明兰侯继波鲁会军马鸣潇郑敏计越金宁一
- 关键词：重组鸡痘病毒PCR病毒培养
- 共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18的重组鸡痘病毒的构建被引量：4
- 2006年
- 目的:为获得能有效预防O型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法:在O型口蹄疫病毒P1-2A基因上游引入Kozak序列,下游通过Linker与细胞因子IL-18联接,获得P1-2A基因与猪IL-18基因融合表达基因盒P1-2A-IL-18,将该表达基因盒克隆至鸡痘病毒中间转移载体pUTAL-3C中,构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-3C-P1-2A-IL-18。通过脂质体转染法,将pUTAL-3C-P1-2A-IL-18与鸡痘病毒282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU三次加压筛选,挑选出单克隆重组病毒株。结果:经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-IL-18基因盒。结论:成功获得了一株共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘毒疫苗候选株rFPV-3C-P1-2A-IL-18。
- 刘慧娟金宁一马鸣潇金明兰张林李旭计越鲁会军金扩世
- 关键词：口蹄疫病毒IL-18基因
- 重组口蹄疫鸡痘病毒vUTAL3CP1的构建及其遗传稳定性和免疫原性被引量：9
- 2008年
- 目的构建重组口蹄疫鸡痘病毒,并检测其遗传稳定性和免疫原性。方法将口蹄疫病毒(FMDV)的衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因插入到鸡痘病毒表达载体中,构建重组鸡痘病毒转移载体pUTAL3CP1,并与鸡痘病毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU加压筛选获得重组鸡痘病毒vUTAL3CP1。重组病毒在CEF中连续传30代,分别进行毒力和基因检测,并免疫BALB/c小鼠,检测特异性抗体和中和抗体。结果重组鸡痘病毒经RT-PCR可扩增出目的基因;特异性荧光抗体反应呈阳性;在CEF中连续传30代,毒力稳定,基因未发生缺失和变异;免疫小鼠能产生较高水平的FMDV特异性抗体和中和抗体。结论已成功构建重组口蹄疫鸡痘病毒,且具有良好的遗传稳定性和免疫原性。
- 金明兰金宁一鲁会军马鸣潇郑敏金扩世霍晓伟计越
- 关键词：口蹄疫重组鸡痘病毒免疫原性
- 口蹄疫病毒基因重组疫苗的实验免疫研究
- 本研究以壳聚糖作为佐剂载体材料,采用复凝聚法制备了载基因壳聚糖纳米粒,对其相关性质进行初步研究。结果证明壳聚糖纳米粒可用作基因传递载体。 应用脱脂乳、蔗糖等成份,初步筛选出了两组保护效果较好的重组鸡...
- 计越
- 关键词：免疫佐剂冻干保护剂免疫应答
- 文献传递
- 口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1在猪体内的病毒、病毒核酸、病毒蛋白分布
- 重组鸡痘病毒vUTAL3CP1是本实验室所构建的,表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因的活载体疫苗。本实验以vUTAL3CP1为研究对象,通过临床观察、病理组织学检测、病毒培养等方法检测在猪体内毒性,病毒存...
- 金明兰金宁一鲁会军马鸣潇郑敏刘慧娟霍晓伟李旭计越
- 关键词：重组鸡痘病毒病毒核酸病毒蛋白口蹄疫生物安全性
- 文献传递
- 载基因壳聚糖纳米粒的制备及免疫增强作用的初步研究
- 目的制备壳聚糖载基因纳米粒,并对其体外转染效率及其在小鼠体内的免疫增强效果进行初步研究。方法以本课题组构建的口蹄疫DNA疫苗为模型药物,采用复凝聚法制备纳米粒;用透射电镜观察形态;用纳米粒度分析仪测定粒径、多分散度和ze...
- 计越金宁一鲁会军马鸣潇金明兰李旭刘慧娟郑敏
- 关键词：壳聚糖纳米粒转染免疫原性
- 文献传递
- 共表达O型口蹄疫病毒3C、P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘病毒免疫原性研究被引量：1
- 2007年
- 目的:对筛选到的一株共表达O型口蹄疫病毒3C基因、P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘病毒rFPV-3C-P1-2A-IL-18进行免疫原性研究。方法:分别用重组鸡痘病毒rFPV-3C-P1-2A-IL-18、rFPV-P1-2A-3C和对照组282E4株FPV、PBS对小鼠进行免疫接种,并检测各免疫组的T淋巴细胞亚类数量、CTL杀伤活性及抗体效价。结果:重组鸡痘病毒疫苗组免疫小鼠T淋巴细胞亚类数量,CTL杀伤活性和抗体效价均显著高于对照组,且重组鸡痘病毒rFPV-3C-P1-2A-IL-18的小鼠T淋巴细胞亚类数量和CTL特异性杀伤活性与rFPV-P1-2A-3C相比,差异显著。结论:为开发新型FMDV疫苗奠定了实验免疫基础。
- 刘慧娟金宁一马鸣潇金明兰沈国顺霍晓伟鲁会军金扩世李旭计越
- 关键词：口蹄疫病毒重组鸡痘病毒免疫原性
- 口蹄疫重组鸡痘病毒活载体疫苗在豚鼠、猪体内的毒性、分布及抗体消长规律被引量：6
- 2007年
- 利用临床观察、病理解剖、PCR、RT-PCR、ELISA、中和抗体检测等方法,对口蹄疫(FMD)重组鸡痘病毒(FPV)在豚鼠、仔猪体内的毒性、分布以及抗体消长规律进行研究。结果表明,FMD重组鸡痘病毒免疫的动物在整个试验期间,未表现出明显的临床症状和不良反应;病理组织切片检测无明显的组织学变化;PCR、RT-PCR检测证明,豚鼠、猪免疫FMD重组鸡痘病毒后,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脑、肠系膜淋巴结内检测到FPVDNA和FMDV DNA,且在大部分组织能存在3 d左右;FMD重组鸡痘病毒均可诱导免疫动物产生较高水平的抗FMDV特异性抗体和中和抗体,验证了所构建重组FPV的生物安全性及良好的免疫原性,为其他哺乳动物实验提供了必要的基础数据。
- 金明兰金宁一鲁会军马鸣潇郑敏霍小伟刘慧娟计越李旭
- 关键词：毒性
- 重组鸡痘病毒对豚鼠的生物安全性被引量：5
- 2007年
- 目的检测重组鸡痘病毒在妊娠豚鼠及其子代豚鼠体内的安全性。方法重组鸡痘病毒以正常剂量和超大剂量同时免疫妊娠豚鼠和子代豚鼠,通过临床观察、病理组织学、PCR等方法,检测重组鸡痘病毒对妊娠豚鼠的毒性和子代豚鼠生长的影响以及子代豚鼠的病毒DNA残留。结果临床观察和病理组织学检测表明在整个实验期间,免疫重组鸡痘病毒的妊娠豚鼠精神状态、饮水、采食等临床表现一切正常,未表现出临床症状和不良反应,未造成早产、流产、死胎、弱胎;用正常和超大剂量免疫重组鸡痘病毒的子代豚鼠均未出现任何临床症状,内脏器官未见明显的病理变化,且未检测到病毒DNA。结论构建的重组鸡痘病毒生物安全性好,对妊娠豚鼠和子代豚鼠无安全威胁。
- 金明兰金宁一鲁会军马鸣潇郑敏刘慧娟李旭计越霍小伟唐树勋
- 关键词：重组鸡痘病毒生物安全性子代
- 载基因壳聚糖纳米粒的制备及免疫增强作用的初步研究被引量：4
- 2008年
- 目的:制备壳聚糖载基因纳米粒,并对其体外转染效率及其在小鼠体内的免疫增强效果进行初步研究。方法:以构建的口蹄疫DNA疫苗为模型药物,采用复凝聚法制备纳米粒;用透射电镜观察形态;用纳米粒度分析仪测定粒径、多分散度和zeta电位;凝胶阻滞分析测定基因在纳米粒中的位置;用体外基因转染实验评价纳米粒的转染活性。用载基因壳聚糖纳米粒免疫雌性Balb/c小鼠,检测免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫水平。结果:所制备的载基因纳米粒形态规则、大多成球形,平均粒径约为150nm,多分散度<0.26,zeta电位约为21mV;凝胶分析结果表明质粒DNA与壳聚糖分子间可以通过电性结合作用而完全结合,基因几乎全部被包裹在纳米粒内部;体外基因转染实验表明壳聚糖作为一种新型的非病毒基因递送载体能够高效传递DNA进入BHK-21细胞,基因能够在该细胞中高效表达;小鼠免疫实验表明纳米粒不仅能诱导机体产生较高的细胞免疫水平,而且体液免疫水平也显著提高。结论:壳聚糖纳米粒能将基因递送到细胞内并且能够表达,小鼠免疫实验显示其具有良好的免疫增强效果。
- 计越金宁一鲁会军马鸣潇金明兰霍晓伟郑敏李旭刘慧娟
- 关键词：壳聚糖纳米粒转染免疫原性
