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AAV-TGFβ_1的构建及其与AV-TGFβ_1对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较被引量：1: 2008年; 目的探讨转化生长因子β1腺相关病毒表达系统(AAV-TGFβ1)的构建及其与转化生长因子β1腺病毒表达系统(AV-TGFβ1)对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较。方法采用PCR技术扩增转化生长因子β1(TGFβ1)基因,并于其两端分别连接EcoRI和SalI酶切位点。将TGFβ1基因亚克隆于腺相关病毒(AAV)载体中,并经酶切和测序分析进行鉴定。AAV-TGFβ1病毒被包装并转染H293细胞,通过免疫荧光检测AAV介导的目的基因表达。利用AAV-EGFP病毒检测AAV对髓核细胞的转染效率。AAV-TGFβ1和AV-TGFβ1分别转染髓核细胞后,通过Antonopulos法检测蛋白多糖的合成。结果测序分析证明TGFβ1序列与NCBI Gene Bank所报道的一致。经酶切鉴定证实AAV-TGFβ1重组质粒被成功构建。AAV可介导TGFβ1高效表达并高效转染髓核细胞。AV-TGFβ1可快速一过性地促进髓核细胞蛋白多糖合成,而AAV-TGFβ1可稳定促进蛋白多糖合成。结论AAV-TGFβ1病毒被成功构建并可稳定地促进髓核细胞蛋白多糖的合成。; 赛佳明胡有谷王德春; 关键词：腺相关病毒髓核蛋白多糖

慢病毒GV115-AIF siRNA重组表达系统的构建及鉴定: 2016年; 目的:构建高效的慢病毒GV115-AIF si RNA重组表达系统。方法:根据目的基因AIF以及RNA干扰序列设计原则,利用设计软件设计了3个可能的AIF si RNA序列。应用全基因合成技术和亚克隆技术构建GV115-AIF si RNA重组质粒,并采用聚合酶链反应技术(PCR技术)和基因测序技术对GV115-AIF si RNA重组质粒鉴定。利用GV115病毒包装辅助p Helper 1.0质粒和p Helper 2.0质粒进行病毒包装。病毒包装后转染人胚肾293T细胞,通过应用逆转录定量PCR技术(RT-PCR技术)检测转染后对人胚肾293T细胞中AIF基因的敲减效率,筛选最高效的AIF si RNA基因序列。结果:GV115-AIF si RNA质粒PCR鉴定显示位于341bp附近的条带。测序结果与设计的基因序列完全吻合。3个可能的AIF si RNA序列中基因敲减效率最高的可达到88.3%。结论:成功构建高效的慢病毒GV115-AIF si RNA重组表达系统。; 赛佳明马学晓邱晨生陈伯华胡有谷; 关键词：慢病毒 RNA干扰基因治疗

BMP_2-海藻酸钠-壳聚糖微球对骨折愈合影响被引量：4: 2016年; 目的探讨骨形态发生蛋白2(BMP_2)-海藻酸钠-壳聚糖微球的制备及其促进兔桡骨骨折愈合的作用。方法采用脉冲电场法制备BMP_2-海藻酸钠-壳聚糖微球,观测其形态、尺寸,测定BMP_2载药量、包封率,并进行体外释放实验。制备新西兰兔骨缺损模型,随机分BMP_2微球组、BMP_2注射组、空微球组及空白对照组4组。于术后第30天行X线检查,比较各组骨折愈合情况。结果微球具有很好的圆形形态,平均粒径为900.79μm;微球的平均包封率为(84.97±3.49)%,BMP_2载药量平均为(16.34±0.48)%。体外模拟体液中,微球所载BMP_2被缓释出来,在第7天时87.33%的BMP_2被释放出来,在第14天时BMP_2被完全释放出来。术后第30天BMP_2微球组的骨折愈合情况较各对照组好,差异有显着性(H=6.87,P<0.05)。结论 BMP_2-海藻酸钠-壳聚糖微球具有良好的缓释效果,局部植入能促进骨折修复愈合。; 赛佳明陈东亮江晓路; 关键词：海藻酸钠微球体骨折愈合

Ribbed非骨水泥股骨假体在人工全髋关节置换术中的近中期随访观察被引量：4: 2014年; 目的总结人工全髋关节置换术中解剖型非骨水泥股骨假体治疗髋关节疾病的临床疗效及经验。方法回顾性分析自2001-02—2010-12采用Top压配杯髋臼假体和Ribbed解剖型非骨水泥股骨假体对132例(178髋)髋关节疾病行人工全髋关节置换术,其中67例(93髋)获得完整随访。结果 67例获随访6~54个月,平均37.6个月。术后髋关节功能Harris评分76~98分,平均92.3分。X线检查未发现假体松动或下沉,表现出假体的骨长入性稳定。4例出现大腿痛。结论在人工全髋关节置换术治疗髋关节疾病中使用Ribbed解剖型非骨水泥股骨假体的近中期效果满意。; 吴玉仙赛佳明李玉椿陈东亮王光辉刘德恒; 关键词：髋部疾病解剖型非骨水泥股骨假体

AAV-TGFβ3的构建及其与AV-TGFβ1表达系统对反分化髓核细胞蛋白多糖合成的影响被引量：1: 2006年; 目的:比较转化生长因子(TGF)β3腺相关病毒(AAV-TGFβ3)与TGFβ1腺病毒(AV-TGFβ1)表达系统对反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖合成的生物学效应。方法:制备具有感染活性的AAV-TGFβ3并采用酶切电泳和免疫荧光对其进行鉴定。将AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1分别转染反分化早、晚期髓核细胞,采用免疫印迹法检测TGFβ3和TGFβ1蛋白的表达,并通过Antonopulos法分别检测AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1对蛋白多糖合成的生物学效应。结果:AAV-TGFβ3转染可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ3蛋白的表达,并促进其蛋白多糖的合成。转染后第12天,蛋白多糖含量达到峰值,分别为0.399±0.029和0.152±0.011,此后蛋白多糖含量缓慢降低;于转染后第2个月,蛋白多糖含量稳定在较高水平,分别为0.309±0.021和0.115±0.009。AV-TGFβ1转染亦可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ1蛋白的表达,但其仅促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,转染后第10天蛋白多糖含量达到峰值(0.413±0.041),此后蛋白多糖含量快速降低,转染后第2个月时蛋白多糖含量降至较低水平(0.198±0.013);对于反分化晚期髓核细胞,AV-TGFβ1则抑制其蛋白多糖的合成。结论:AAV-TGFβ3可稳定地促进反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖的合成;AV-TGFβ1仅一过性地促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,而且抑制反分化晚期髓核细胞蛋白多糖的合成。; 赛佳明胡有谷王德春; 关键词：转化生长因子Β3 髓核蛋白多糖

慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统的构建及鉴定: 2015年; 目的构建高效的慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统。方法根据RNA干扰序列设计原则,设计4个可能的caspase-3 siRNA序列。应用全基因合成技术和亚克隆技术构建GV115-caspase-3 siRNA并采用PCR和测序对其鉴定。病毒包装后转染人胚肾293T细胞,通过应用RT-PCR技术检测转染后caspase-3基因敲减效率,筛选高效的GV115-caspase-3 siRNA。结果 GV115-caspase-3 siRNA质粒PCR鉴定显示位于341bp附近的条带,测序结果与设计的基因序列完全吻合,4个可能的caspase-3 siRNA序列中基因敲减效率最高的可达到84.2%。结论成功构建高效的慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统。; 赛佳明马学晓邱晨生陈伯华胡有谷; 关键词：慢病毒 CASPASE-3 RNA干扰基因治疗

慢病毒载体GV115介导Caspase-3 siRNA转染人椎间盘髓核细胞的生物学效应被引量：2: 2015年; 目的：研究慢病毒载体GV115介导Caspase-3 si RNA转染人椎间盘髓核细胞的生物学效应。方法：采集12例外伤致脊柱爆裂性骨折患者（22~36岁）术中切除的椎间盘髓核组织,采用组织块法分离培养髓核细胞并传代。取第2代髓核细胞,分为GV115-Caspase3 si RNA组、GV115组和对照组,各组12个细胞培养孔。在荧光显微镜下观察计数阳性髓核细胞,计算GV115-Caspase3 siRNA对人椎间盘髓核细胞的转染效率;采用免疫荧光法检测三组髓核细胞中Caspase-3表达;采用MTT法检测三组髓核细胞活性;采用Western-Blot法和Antonopulos法分别检测三组髓核细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量。结果：椎间盘髓核细胞被成功分离培养,培养1周后细胞达到80%融合,进行传代培养。转染后1周（85.6±1.3）%的髓核细胞可被GV115-Caspase3 si RNA转染而表达绿色荧光素。GV115-Caspase3 siRNA组Caspase-3免疫荧光阳性细胞率[（19.4±3.2）%]较GV115组[（84.3±9.2）%]和对照组[（83.9±8.7）%]明显减少（P〈0.05）,OD值（1.56±0.21）较GV115组（0.91±0.15）和对照组（0.92±0.17）高（P〈0.05）,Ⅱ型胶原免疫印迹染色强度（1.32±0.09）较GV115组（0.81±0.05）和对照组（0.79±0.04）高（P〈0.05）,蛋白多糖含量（0.56±0.09）较GV115组（0.35±0.06）和对照组（0.34±0.05）高（P〈0.05）。结论：GV115-Caspase3 siRNA可高效转染人椎间盘髓核细胞,增强髓核细胞的生物活性,并促进细胞外基质的合成。; 赛佳明马学晓邱晨生陈伯华胡有谷; 关键词：髓核细胞慢病毒 CASPASE-3

腺相关病毒介导转化生长因子β1和血管内皮生长因子联合转染促进糖尿病溃疡愈合的生物学效应(英文)被引量：2: 2006年; 背景:糖尿病患者溃疡创面难愈合,目前认为是由糖尿病患者创面微循环障碍以及内源性生长因子含量降低等因素所造成。目的:观察腺相关病毒介导转化生长因子β1(AAV-TGFβ1)和血管内皮生长因子(AAV-VEGF)联合转基因治疗促进糖尿病皮肤溃疡愈合的生物学效应。设计:随机对照动物实验。单位:青岛大学医学院和青岛大学医学院附属医院。材料:实验于2004-07/2006-01在青岛大学医学院附属医院妇科实验室进行。选用成年健康大白兔24只,单纯随机分为联合转基因组和对照组各12只。方法:①采用耳缘静脉注入四氧嘧啶(130mg/kg)建立糖尿病模型,并通过手术方法建立溃疡创面。②联合转基因组创面局部浸润注射AAV-TGFβ1和AAV-VEGF(9×106/mL病毒颗粒);对照组注射生理盐水。主要观察指标:①术后1个月,通过聚合酶链反应检测愈合组织中转化生长因子β1和血管内皮生长因子基因的转录水平。②术后3周,用微循环显微镜计数创缘毛细血管密度值。③术后6个月通过蛋白凝胶电泳和半干电转移法对Ⅰ、Ⅲ型胶原进行分离及免疫印迹检测。④术后1d,1,2,3周,1,2,3,4,5,6个月时测定溃疡愈合组织中胶原含量。⑤术后观测创面愈合厚度、颜色、质地。结果:24只兔全部进入结果分析。①联合转基因组转化生长因子β1和血管内皮生长因子基因转录表达增多。②联合转基因组创缘毛细血管密度值高于对照组[(19.18±3.56),(6.43±1.52)个/mm2,P<0.05]。③联合转基因组愈合组织中胶原含量均增多(P<0.05),而且Ⅰ型和Ⅲ型胶原构成比中Ⅰ型胶原的比例增加。④在转染后1d,联合转基因组与对照组溃疡愈合组织中的胶原含量接近(P>0.05)。此后,联合转基因组胶原含量均高于对照组(P<0.05)。⑤对照组溃疡愈合明显滞后,愈合质量差。结论:AAV-TGFβ1和AAV-VEGF可联合高效转染糖尿病兔耳皮肤溃疡创面,可使溃疡组织中�; 赛佳明张慧琴; 关键词：转染血管内皮生长因子类

慢病毒介导生存素基因转染反分化早期和晚期椎间盘髓核细胞生物学效应的比较被引量：1: 2015年; 目的研究慢病毒介导生存素基因(Lentivirus-Survivin)对早、晚期反分化人椎间盘髓核细胞的生物学效应。方法应用组织块法分离培养人椎间盘髓核细胞,采用绿色荧光素标记法检测慢病毒载体对其转染效率。通过免疫荧光法、MTT法、Western-Blot法和Antonopulos法检测比较Lentivirus-Survivin对反分化早期和晚期椎间盘髓核细胞Survivin表达、细胞活性、II型胶原和蛋白多糖合成的影响。结果反分化早期髓核细胞中存在Survivin的表达,而反分化晚期髓核细胞中则极少表达。Lentivirus-Survivin可高效转染反分化早期和晚期椎间盘髓核细胞,并促进细胞中Survivin表达。对于反分化早期椎间盘髓核细胞,Lentivirus-Survivin可增强髓核细胞活性以及细胞外基质(II型胶原和蛋白多糖)的合成;对于反分化晚期髓核细胞,其反而抑制细胞活性以及细胞外基质的合成。结论 Lentivirus-Survivin适用于反分化早期椎间盘髓核细胞,而不适用于反分化晚期的髓核细胞。; 赛佳明马学晓邱晨生陈伯华胡有谷; 关键词：慢病毒生存素椎间盘髓核细胞

异位康冲剂治疗子宫内膜异位症的临床及实验研究: 张慧琴赵淑萍刘玉健杨宗利赛佳明姜玉珍刘素梅; 大量研究证实中医药治疗内异症的作用机理可能是通过调整内分泌和免疫系统、改善血液流变学等多方面的效应来实现的，如补肾祛瘀法、清热活血法、理气化瘀法、温经化瘀法、化瘀通腑法等都能够治疗内异症，而且作用和机制接近。中药“异位康...; 关键词：; 关键词：子宫内膜异位症

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赛佳明

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