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JY佐剂对人乳头瘤病毒18型L1蛋白病毒样颗粒黏膜免疫效果的影响: 2013年; 目的探讨JY佐剂对人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)18型L1蛋白病毒样颗粒(Virus-like parti-cle,VLP)黏膜免疫效果的影响,并观察鼻腔反复免疫后与HPV58、11和6型的免疫交叉反应。方法用含或不含JY佐剂的HPV18 L1 VLP分别经肌肉和鼻腔免疫BALB/c小鼠,并设PBS对照组,于第0、3、6周各免疫1次,免疫后第2、5、8周采血,ELISA法检测血清IgG抗体滴度;于第8周分离脾淋巴细胞并收集呼吸道灌洗液,采用IFNγELISPOT试剂盒检测细胞免疫效果,ELISA法检测黏膜免疫效果;鼻腔免疫各组取5只小鼠,继续免疫10次,每次间隔3周,收集第14、20、26、32和38周的血清,ELISA法检测HPV18 L1蛋白与HPV58、11和6型的免疫交叉反应。结果免疫3次后,不含或含有佐剂的HPV18 L1蛋白经肌肉免疫后的血清IgG抗体滴度(均为104.6)高于经鼻腔免疫后的血清IgG抗体滴度(分别为101.9和102.8)。含有佐剂的HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫后呼吸道灌洗液中sIgA抗体浓度(30.06μg/ml)明显高于不含佐剂的HPV18 L1蛋白鼻腔免疫组(23.47μg/ml)(P<0.01),但肌肉免疫组未检测到sIgA抗体。含有佐剂的HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫诱导的细胞斑点数明显高于不含佐剂的HPV18 L1蛋白鼻腔免疫组(P<0.01),不含佐剂与含佐剂的HPV18 L1蛋白肌肉免疫组诱导的细胞斑点数差异无统计学意义(P>0.05)。HPV18 L1免疫小鼠后的血清与HPV58、11和6型之间均有交叉反应,在第32周血清特异性IgG抗体滴度最高。结论 HPV18 L1 VLP经肌肉免疫后,其血清抗体水平高于鼻腔免疫组,但该蛋白鼻腔免疫后细胞免疫反应和黏膜sIgA抗体水平均高于肌肉免疫组;JY佐剂能增强HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫后的小鼠细胞反应及黏膜sIgA抗体应答,但肌肉免疫组佐剂作用不明显;HPV18 L1蛋白反复鼻腔免疫后,可拓宽抗原保护谱。; 麻粉莲袁武梅张骞郑文芝赵智慧郑丽舒; 关键词：人乳头瘤病毒18 L1蛋白病毒样颗粒黏膜免疫

人博卡病毒VP2蛋白的纯化及其单克隆抗体的制备: 病毒感染所引起的呼吸道疾病已经成为世界性的常见疾病之一。人博卡病毒/(HBoV/)作为引起呼吸道感染的常见病毒之一,虽然发现相对较晚,但受到科研工作者的广泛关注。而有效的诊断和治疗需要具有高效价的抗体,才能建立系统的方法...; 赵智慧; 关键词：人博卡病毒 VP2蛋白单克隆抗体; 文献传递

人博卡病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备被引量：2: 2012年; 目的表达纯化人博卡病毒（human Bocavirus，HBoV）VP2蛋白，采用杂交瘤方法制备抗HBoVVP2蛋白的单克隆抗体。方法应用原核表达载体pET-30a和大肠埃希菌表达VP2蛋白，并用固定化金属亲和层析，纯化后的蛋白作为抗原免疫BALB／c小鼠，利用杂交瘤技术和间接ELASA方法筛选阳性的杂交瘤细胞，并对单克隆抗体进行分型检测和滴度测定。结果表达并纯化获得了重组HBoVVP2蛋白，利用杂交瘤技术得到单克隆IgG抗体，抗体效价达到1：4×10^5。结论利用HBoVVP2蛋白免疫制备了单克隆抗体，并具有较高的效价。本研究为快速诊断和研究HBoV打下基础。; 赵智慧薛鹏浩魏建民张骞郑文芝麻粉莲袁武梅郑丽舒; 关键词：人博卡病毒

甲型H1N1流感病毒HA基因RT-LAMP检测方法的建立与初步应用被引量：9: 2011年; 目的:建立反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)检测甲型H1N1流感病毒HA基因的方法,并用于检测临床样本。方法:通过在线软件Primer Explorer V4设计H1N1 HA基因的RT-LAMP引物,建立RT-LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度。结果:与传统RT-PCR方法相比,RT-LAMP检测方法具备更高的灵敏度,达到10个拷贝,并且具有良好的特异性;在76份呼吸道感染儿童的咽拭子标本中检测到2份阳性,与RT-PCR方法检测结果相同。结论:建立的H1N1 RT-LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,具备H1N1现场检测应用前景。; 王翔张骞张钫袁武梅麻粉莲薛鹏浩赵智慧郑文芝郑丽舒; 关键词：甲型H1N1流感病毒 RT-PCR RT-LAMP

呼吸道合胞病毒TaqMan探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：1: 2012年; 目的：建立呼吸道合胞病毒（RSV）核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，并对临床样本进行检测。方法：比对编码RSV非编码蛋白的基因序列，选取其保守片段设计引物和探针，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法，并与传统RT-PCR方法进行比较，分别对两者的灵敏性、特异性、重复性及临床样本检验的适用性进行评价。结果：所建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于RSV的特异性检测。相对于传统RT-PCR方法100拷贝，反应的检测灵敏度，实时荧光定量RT-PCR的检测灵敏度达到10拷贝／反应，检测范围为1010-101拷贝／反应，且具有良好的特异性和重复性。从169份临床呼吸道标本中检出RSV阳性40例，高于普通PCR方法（31／169）。结论：建立了RSV的TaqMan探针实时定量PCR检测方法，并可用于临床鼻咽拭子样本的检测，在临床上具有较好的应用前景。; 郑文芝张骞魏建民薛鹏浩王翔赵智慧郑丽舒; 关键词：呼吸道合胞病毒 TAQMAN探针实时定量RT-PCR

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赵智慧

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