赵朋云
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：温州医学院基础医学院分子病毒与免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 间接免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体抗原的研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨基于沙眼衣原体全菌体兔血清抗体的间接免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体抗原的研究。方法将6×103IFU沙眼衣原体接种于Hep-2细胞,培养72 h,PCR检测验证;以兔抗沙眼衣原体全菌体血清抗体为一抗,用免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体抗原,同时采用传统的Giemsa染色、Lugol′s碘染对沙眼衣原体包涵体进行鉴定,并统计和比较其包涵体的检出率。结果经PCR鉴定为阳性的沙眼衣原体感染的Hep-2细胞,间接免疫荧光检测在细胞浆中出现绿色荧光,检出率为28.84%;经Giemsa染色和Lugol′s碘染验证胞浆中存在典型的包涵体结构,检出率分别为15.19%和17.36%,与免疫荧光法比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论基于兔抗沙眼衣原体全菌体血清的间接免疫荧光法可显著提高沙眼衣原体包涵体的检出率。
- 巩文词朱珊丽赵朋云王佳陈俊陈韶李文姝张丽芳
- 关键词：间接免疫荧光法沙眼衣原体包涵体
- 人乳头瘤病毒L2氨基端蛋白的同源性及其交叉反应特性研究
- 2010年
- 目的 研究人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白（L2）在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法 采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2（1～200）肽段的碱基序列,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1得到重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）.将测序鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21（DF3）中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定;进一步通过Western blot检测HPV16L2（1～200）融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性临床患者血清的特异性结合能力;以镍螯合亲和层析柱（Ni-NTA Agarose）纯化的HPV16 L2（1～200）融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法对98例尖锐湿疣患者、135例宫颈癌患者及96例健康对照者血清进行特异性血清IgG抗体检测.结果 在HPV6、11、18、35等14个临床常见型别中,与HPV16 L2的1～200间的氨基酸序列比较,同源性达到52.7%～74.3%;成功构建了含有HPV16 L2（1～200）的重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）,含有HPV16 L2（1～200）的融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达,表达量占总蛋白的22.6%;表达产物的相对分子质量（Mr）约49×103,与预期Mr相符;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗进行Western blot分析,结果显示,在Mr约49×103处出现特异性条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组患者血清及健康对照者血清抗体均值分别为0.753±0.262、0.756±0.274和0.178±0.157,阳性率分别为89.8%、88.9%和9.4%.三组间血清抗体均值及阳性率比较差异均具有统计学意义（P均＜0.001）,而尖锐湿疣组和宫颈癌组间的血清抗体均值比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 HPV L2 N端1～200氨基酸序列具有高度同源性,并在HPV6、11、16和18型别间具有交�
- 李玲玲赵朋云王佳周珠哈朱珊丽薛向阳张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒同源性
