邓华玲
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南京大学生命科学学院分子医学研究所更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 固相合成抗凝血药比伐卢定及合成条件的优化被引量：2
- 2010年
- 目的:研究使用Wang树脂与Fmoc保护策略固相合成抗凝血药比伐卢定(bivalirudin)的实验方法。方法:比伐卢定的合成经过了逐步偶联、TFA裂解、脱保护、HPLC纯化等一系列步骤。为了优化反应条件,选择了不同氨基酸取代度的树脂(0.29、0.48、0.59mmol/g)和不同的缩合试剂(HBTU、DCC、HATU)进行试验。结果:成功得到了纯度为98%的比伐卢定。活性测定表明,不同方法合成的比伐卢定均具有与标准样品相当的抗凝活性,并且显示:①氨基酸取代度为0.3～0.4mmol/g的Wang树脂可以得到产率及纯度均较高的产品,取代度太大(>0.5mmol/g)得到的产品副产物多、纯度低;②用HBTU/HOBt为缩合试剂具有操作方便、成本经济、合成效率高等优点。根据以上实验结果选择优化条件,用5gWang树脂合成克级单位的比伐卢定,得到的粗品产率可达84%,纯度可达68%以上。结论:通过固相合成的方法,考察了不同氨基酸取代度、不同缩合试剂及规模大小对合成比伐卢定的产率、纯度及活性的影响,对比伐卢定的大量合成具有一定的指导作用。
- 沈忱刘建宁王莹邓华玲唐艳春
- 关键词：凝血酶固相合成比伐卢定取代度
- Hirulog18在大肠杆菌中的表达及其生物学活性检测
- 2006年
- 以化学合成的H iru log 18基因为模板,经PCR扩增、限制性内切酶Xho I和Kpn I消化,将编码H iru-log 18的基因片断插入表达载体pET-32b中编码硫氧化还原蛋白(Trx)基因序列的下游.用重组质粒转化感受态大肠杆菌-BL21(DE3),并用IPTG诱导表达Trx-H iru log 18融合蛋白.复性、肠激酶酶切、N i-Sepharose和HPLC纯化后,用质谱测定其分子量并进行活性测定.检测结果表明构建的PET-32b/H iru log 18能够在大肠杆菌中高效表达,表达的H iru log 18具有较低的凝血酶抑制活性并能够竞争抑制Angiomax活性.
- 王东孙自勇陈俊勇邓华玲王莹唐艳春刘建宁
- 关键词：克隆融合蛋白HPLC
