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郑东霞: 作品数：46 被引量：196H指数：7; 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>; 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金青岛市科技发展计划项目更多>>; 相关领域：农业科学自动化与计算机技术生物学医药卫生更多>>

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一株鸵鸟源新城疫病毒的分离及其分子生物学特性被引量：2: 2007年; 从2005年山东省某鸵鸟饲养场发病鸵鸟分离出1株新城疫病毒,命名为SD01,采用一步法RT-PCR扩增了该分离株F基因的重要功能区片段(535 bp),并将其克隆到pMD18-T载体中,进行序列测定,研究了其分子生物学特性。序列分析结果表明,该分离株F基因裂解位点的氨基酸组成与NDV强毒株的特征性结构一致(112R-R-Q-K-R-F117);遗传进化分析表明,该分离株在分类地位上属于基因Ⅶd型,与目前报道的鸵鸟源和其他禽类NDV毒株基因型一样,说明目前我国流行的仍然是NDV基因Ⅶ型。提示,对于鸵鸟新城疫的防治,除进行疫苗免疫之外,采取生物安全措施也是非常重要的。; 汪艳刘华雷伏小平郑东霞徐天刚王志亮; 关键词：鸵鸟新城疫病毒分子鉴定进化树

新城疫强毒株荧光定量RT-PCR检测技术的建立及应用被引量：5: 2018年; 基于国内流行的新城疫病毒强毒株F蛋白裂解位点分子特征设计特异性引物及Taqman探针,建立了一种可检测新城疫强毒株的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。通过体外转录法制备cRNA标准品作为阳性模板制作标准曲线以及临床样品的检测绘制出ROC曲线,对诊断指标进行系统评价。结果显示：该方法的标准曲线为Y=-3.390X＋38.23,相关系数R2为0.9999;灵敏度试验显示,该方法的最低检测限为2拷贝/μL,比常规RTPCR高10倍;特异性试验显示该方法与常见禽病病毒无交叉反应;重复性试验的组内和组间的变异系数分别低于1%和1.5%。通过检测1 974份临床样品绘制ROC曲线显示,ROC曲线下面积为0.9861,当Youden Index为93.12时,cutoff值设为35,诊断的敏感性和特异性分别为94.82%、98.3%,与病毒分离方法的Kappa系数为0.919。本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好、诊断准确性极好,给实验室提供一种快速、实用的检测临床样品的方法。; 罗瑶瑶王静静吕艳赵云玲郑东霞魏润宇于松梅于松梅左媛媛单虎刘华雷刘华雷; 关键词：强毒荧光定量RT-PCR ROC曲线

应用原代细胞繁殖非洲猪瘟病毒的研究进展: 2023年; 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是影响养猪业发展的最重要疫病之一,其病原体为非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)。由于该病毒基因组庞大,生物学特性复杂,其增殖、分离通常需要使用猪原代细胞并且只能在经授权的生物安全三级以上实验室进行,阻碍了对该病的基础研究及疫苗研发。对ASFV开展深入的生物学特性研究和疫苗研发,原代细胞仍然是不可或缺的工具。因此,对目前已报道可用于ASFV繁殖的原代细胞种类、优缺点,以及研究应用现状进行综述,目的是为从事相关工作的科研人员提供思路和参考。; 左媛媛路皓东巩明霞巩明霞郑东霞王英丽迟田英徐福朋徐天刚徐天刚; 关键词：ASFV 原代细胞疫苗

2005年中国新城疫病毒分子流行病学研究被引量：40: 2006年; 采用2005年从国内不同地区、不同宿主分离到的NDV分离株，选取其中具有代表性的83株，用RT-PCR技术扩增其F基因重要的功能区片段，进一步进行序列测定。序列分析表明所扩增的目的片段长度为535bp，序列测定结果已经登陆到GenBank，登陆号为DQ439866-DQ439948。参照国内外已发表的部分毒株的F基因序列，构建了NDV的遗传进化树，分析毒株间的遗传进化关系。通过遗传进化分析表明83株NDV分离株中有65株属于基因Ⅶ型，9株属于基因Ⅱ型，5株属于基因Ⅰ型，3株属于基因Ⅵ型，1株属于基因Ⅲ型。表明我国目前ND的流行情况比较复杂，其中基因Ⅶ型新城疫病毒所引起的新城疫在国内呈流行趋势，同时也存在其它基因型的散发，从而为我国目前新城疫的防治提供了科学的参考依据。; 刘华雷王志亮吴延功郑东霞孙承英宋翠平左媛媛王伟华; 关键词：新城疫病毒分子流行病学基因型

Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定被引量：1: 2011年; 目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。; 陈云霞管峰赵云玲郑东霞张维刘华雷王志亮; 关键词：病毒拯救

五种核酸提取试剂盒对新城疫病毒RNA提取效率的比较被引量：5: 2017年; 本研究采用罗氏、天隆、赛默飞世尔等公司生产的5种核酸提取试剂盒,对新城疫病毒RNA的提取效率进行比较,以优选出提取效率高、耗时短、成本低的核酸提取方法,为各级实验室开展新城疫病毒核酸检测提供技术参考。采用5种商品化核酸提取试剂盒,对不同浓度(稀释度10~0~10^(-8)/EID50 10^(8.3))的新城疫病毒标准样品进行RNA提取,通过实时定量荧光RT-PCR进行检测,以Ct值评价5种试剂盒的RNA提取效率,并对试剂盒的RNA提取时间和价格等进行综合比较分析。结果显示:High Pure Viral RNA Kit(罗氏)、动物疫病病毒RNA核酸提取试剂盒(天隆)和Lab Serv Viral Total NA Kit(赛默飞世尔)的RNA提取效率较高。其中,Lab Serv Viral Total NA Kit对低浓度样本的RNA提取效率最高,价格最便宜;Tian Long的RNA提取所需时间也较短,但操作最为简便。综合提取效率、时间及成本等因素,分析认为Lab Serv Viral Total NA Kit(赛默飞世尔)性价比最高,适用于大批量临床样品的集中检测。; 吕艳王静静罗瑶瑶李林赵云玲郑东霞左媛媛于松梅刘华雷王志亮; 关键词：新城疫病毒 RNA提取荧光RT-PCR

中等毒力新城疫病毒ND03-026株全基因组遗传特性分析被引量：1: 2008年; 从2003年临床发病鸡群当中分离到1株NDV,经致病指数测定为中等毒力。通过RT-PCR技术扩增了其F基因主要功能区片段,并构建了遗传进化树,发现其在分类地位上属于基因Ⅱ型,与我国现用的疫苗株LaSota处于不同的亚群,且裂解位点的组成为典型强毒株序列。对其全基因组序列进行测定,结果已登陆GenBank,登录号为DQ060053。此分离株基因组由15 186个核苷酸组成,编码6种结构蛋白,顺序为3-′NP-P-M-F-HN-L-5′。通过对其6个编码区进行遗传进化与核苷酸和氨基酸同源性分析,结合致病性结果发现其与Roakin毒株的遗传关系最近。; 刘华雷包静月郑东霞孙旭辉吴延功王志亮; 关键词：新城疫病毒中等毒力基因组测序遗传进化同源性分析

基因Ⅶ型新城疫病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：4: 2010年; 根据基因ⅤⅡ型新城疫病毒F基因裂解位点特征设计一对引物和TaqMan探针,建立一种敏感、特异、重复性良好的基因ⅤⅡ型毒株荧光定量RT-PCR鉴别检测方法。以体外转录法制备的cRNA标准品为标准阳性模板,构建标准曲线,并进行各项指标的检测。结果表明,建立的方法特异性良好,最低可检测到102拷贝·μL-1的模板RNA,敏感性比普通RT-PCR高100倍。本试验建立了基因ⅤⅡ型新城疫病毒荧光定量RT-PCR检测方法,且该方法能够鉴别检测常规方法不能区分的新城疫病毒基因ⅤⅡ型强毒株,表明本研究建立的方法可用于此种基因型毒株的快速鉴别检测。; 孙军峰刘华雷王志亮赵云玲郑东霞张维刘文华冯莉莉常娓娓; 关键词：新城疫病毒荧光定量RT-PCR

宁夏地区新城疫分子流行病学特点分析被引量：4: 2008年; 试验对2005～2006年从宁夏地区分离到的6株新城疫病毒进行遗传学特性研究,采用RT-PCR扩增了分离株F基因主要功能区片段并进行序列测定,序列分析表明6株分离株扩增片段的长度均为535bp,与预期扩增片段长度大小一致。裂解位点的氨基酸组成均为112R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株的典型分子特征。通过构建新城疫病毒F基因的遗传进化树,表明6株宁夏分离株在分类地位上均属于基因Ⅶd亚型,与我国近年来新城疫病毒主要流行优势基因型一致,同时表明在宁夏地区至少有2个不同来源的毒株同时流行。; 刘华雷王晓亮刘国华郑东霞孙承英吴延功王志亮; 关键词：新城疫病毒分子流行病学基因型

鹅源新城疫病毒感染鹅的组织学变化研究: 2008年; 自1997年以来．在江苏省苏南、苏北许多地方的鹅群中流行一种以消化道呈糠麸样并有溃疡、胰腺肿胀且表面有灰白色点状坏死灶为特征的具有高度发病率和死亡率的鹅病。目前此病在山东、福建、安徽、浙江、上海、四川、吉林、江苏等全国大部分地区大面积流行．尤其对雏鹅的感染率和死亡率都很高。我们从发病鹅群中分离到一株病毒，; 张倩王志亮单虎郑东霞; 关键词：组织学变化鹅群新城疫消化道

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