郭晓英
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第四医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 野生型及突变型人白细胞介素13的原核表达及活性分析
- 2006年
- 目的:在大肠杆菌中表达野生型和突变型重组人IL13,经纯化复性获得具有有活性的蛋白。方法:用PCR扩增IL13基因片段,用定点突变PCR获得其突变体(IL13’)基因。将IL13和IL13’基因分别克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组体pET30a(+)IL13和pET30a(+)IL13’,分别命名为pETIL13和pETIL13’。以重组体转化E.coliBL21(DE3)在IPTG诱导下进行表达。表达产物用NiNTA层析柱进行纯化。纯化产物用氧化还原谷胱甘肽系统透析复性后,检测其生物学活性。结果:在E.coliBL21(DE3)中表达了IL13/IL13’His6融合蛋白。经SDSPAGE显示,融合蛋白的Mr约17000,经Westernblot证实为人IL13。表达的融合蛋白以包涵体的形式存在,纯化后得到较高纯度的重组蛋白。复性后的包涵体检测具有生物学活性。结论:成功地获得具有生物学活性的野生型和突变型人IL13重组蛋白,为下一步研究奠定了基础。
- 姜晓峰郭晓英万丽平
- 关键词：原核表达活性分析
- 白细胞介素13及变异体刺激呼吸道平滑肌后差异蛋白分析
- 2007年
- 目的应用双向电泳及质谱技术对野生型及变异型白细胞介素13(IL-13)刺激后的ASMC 总蛋白进行差异比较研究,借此分析差异表达蛋白与支气管哮喘的关系,为哮喘的治疗提供新的靶标。方法用固相 pH 双向电泳分离,分别给予野生型 IL-13及变异型 IL-13刺激的 ASMC 总蛋白组成分,找出异常 IL-13处理后与野生型 IL-13处理后有明显差别的蛋白斑点,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF)进行鉴定部分差异蛋白质。结果获得了分辨率高,重复性好的电泳图谱,在野生型 IL-13刺激组和变异型 IL-13刺激组分别平均有(840±21)个和(892±17)个蛋白点(n=3)被检测,匹配的点数为(685±19)个,选取5个未匹配点做质谱分析,鉴定其中3个分别为 stathmin 1,Ribosomal protein p0,NADH dehydrogenase。结论本研究结果显示不同处理组的ASMC 总蛋白表达存在差异,这些差异蛋白有可能为阐明野生型 IL-13及其变异体引发哮喘机制提供新的实验证据。
- 姜晓峰郭晓英梁红艳杜雪飞辛瑜薛丽傅松滨
- 关键词：白细胞介素13肌细胞平滑肌电泳
