郭鹤
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在蚕蛹中表达狂犬病病毒糖蛋白
- 2012年
- 目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在蚕蛹中高效表达狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)糖(G)蛋白。方法从狂犬病病毒CVS-11株总RNA中扩增G基因片段,插入供体质粒pFastBacⅠ-G中,构建重组供体质粒pFastBacⅠ-G,转化大肠杆菌DH10Bac,构建重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-G,将其转染BmN细胞,获得含G基因的重组杆状病毒。将重组病毒感染蚕蛹,收集血淋巴,进行Western blot分析。结果重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-G经PCR鉴定证明构建正确;狂犬病病毒糖蛋白在重组杆状病毒感染的BmN细胞中和蚕蛹中获得正确表达,在蚕蛹中表达的重组蛋白可与His标记的单克隆抗体和狂犬病病毒阳性血清特异性结合。结论成功构建了重组狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒,并在蚕蛹中获得了表达,表达产物具有良好的抗原性。
- 赵丽丽孙伟洋冯昊胡桂秋李岭李露郭鹤赵平森王化磊杨松涛夏咸柱
- 关键词：杆状病毒表达系统狂犬病病毒糖蛋白蚕蛹
- 我国2株野生动物源细小病毒VP2和NS1基因序列及所编码蛋白的分析被引量：3
- 2013年
- 为了解我国野生动物源细小病毒VP2、NS1基因序列和进化特点,用PCR方法获得貉源细小病毒CR86106和猴源细小病毒BJ-22的目的基因片段,对其核苷酸和氨基酸序列进行测定分析。结果显示CR86106和BJ-22细小病毒基因组长均为4 269nt,其中NS1基因全长2 007nt,共编码668个氨基酸;VP2基因全长1 755nt,共编码584个氨基酸。CR86106VP2蛋白除第300位氨基酸为脯氨酸(P)以外,其余关键氨基酸位点均与猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPLV)一致;BJ-22VP2蛋白除第323位为天冬酰胺(N)、第564位为丝氨酸(S)以外,其余关键氨基酸位点均与FPLV一致。CR86106NS1蛋白氨基酸序列与细小病毒参考毒株的相似性是98.4%～99.3%,VP2是97.6%～99.7%;BJ-22NS1蛋白氨基酸序列与细小病毒参考毒株的相似性是98.5%～99.4%,VP2是98.1%～99.3%。种系发生分析结果显示,CR86106VP2和NS1与FPLV亲缘关系较近;BJ-22NS1归到CPV分支,VP2归到FPLV分支且单独分在一支。结果表明,CR86106具有FPLV样细小病毒序列特征,BJ-22具有FPLV和CPV重组病毒特征,为猴源细小病毒的重组现象,研究结果同时也证实了基因重组在FPLV进化过程中起重要作用的推论。
- 梁萌梁萌王化磊冯昊胡桂秋金宏丽胡桂秋冯娜郭鹤张仁舟齐瑛琳冯娜郑学星张仁舟
- 关键词：细小病毒NS1基因VP2基因
- 猪瘟病毒囊膜E2蛋白原核表达及初步应用研究
- 猪瘟(Classical swine fever，CSF)是一种由猪瘟病毒(Classical swine fevervirus，CSFV)引起的猪病毒性传染病，各年龄段的家猪和野猪均可感染发病。猪瘟病毒是黄病毒科瘟病毒...
- 郭鹤
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区原核表达
- 文献传递
- 犬细小病毒VP2蛋白在家蚕/昆虫细胞中表达被引量：2
- 2013年
- 目的犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)能够引起犬急性出血性肠炎,在幼犬中的死亡率很高,为我国养犬业和经济动物养殖业带来巨大的经济损失。因而,寻找一种新型、安全、高效的疫苗为细小病毒性肠炎的防控具有重要意义。方法本研究利用Bac-to-Bac表达系统构建了表达CPV VP2蛋白的重组杆状病毒rBV-D-VP2。该重组病毒感染昆虫细胞和家蚕后,表达CPV VP2蛋白。体外表达的VP2蛋白自动装配成病毒样粒子。随后用蚕蛹中大量组装成的病毒样粒子分别通过口服和肌注两种途径免疫豚鼠。结果经电镜检测,观察到直径为25nm大小的球形病毒样粒子,表明重组杆状病毒表达的VP2能形成病毒样粒子,且在大小、形态上与天然病毒相似。间接免疫荧光检测表明成功构建了表达VP2的病毒样粒子。口服和肌注两种途径免疫豚鼠,均产生了血凝抑制效价。结论本研究为CPV新型亚单位疫苗的研究提供了依据。
- 胡桂秋郭鹤梁红茹冯昊王化磊郑学星赵永坤赵丽丽杨松涛夏咸柱
- 关键词：犬细小病毒VP2
