阳小卫
- 作品数：18 被引量：42H指数：3
- 供职机构：苏州大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 以对造血细胞转基因为基础的基因治疗策略研究
- 陈子兴傅建新岭建农阳小卫王季石王玮夏学鸣
- 研究了对造血系统的恶性肿瘤的基因治疗，以逆转录病毒载体介导的体外转基因技术为基础，设计了以标记基因转入造血干/祖细胞保护造血功能两种基因治疗策略。建立了以逆转录病毒载体介导的安全高效的转基因体系。应用逆转录病毒载体将MD...
- 关键词：
- 关键词：基因治疗造血干细胞基因转移
- 洛伐他汀对NB4细胞ras基因p21^(Ras)膜结合作用影响的体外试验被引量：3
- 2002年
- 目的 :探讨洛伐他汀 (LOV)对人白血病NB4细胞的作用及其机制。方法 :以MTT比色法首先观察LOV对NB4细胞增殖的影响 ;利用逆转录 -聚合酶链反应半定量测定LOV作用于NB4细胞不同时间H -ras、K -ras、N -ras癌基因mRNA表达水平 ;同时采用流式细胞术测定NB4细胞p2 1Ras总蛋白、膜蛋白的表达。结果 :①LOV抑制NB4细胞增殖 ,IC5 0为 12 5 9μmol/L。②NB4细胞H、K、N -ras基因表达均为阳性。③LOV处理不同时间的NB4细胞H、K、N -ras基因转录水平无明显变化 ;p2 1Ras总蛋白水平也无变化 ,而细胞膜表面p2 1Ras蛋白水平随时间进行性下降。结论 :LOV抑制NB4细胞增殖。LOV靶向HMG -CoA还原酶 ,抑制p2 1Ras蛋白异戊二烯化、阻滞p2 1Ras蛋白与细胞膜结合 ;不影响ras癌基因以及p2 1Ras总蛋白的表达。
- 国风岑建农陈子兴王玮傅建新阳小卫
- 关键词：RAS洛伐他丁原癌基因蛋白质P21RAS基因
- 人白细胞介素-18的基因克隆及原核表达被引量：5
- 2000年
- 目的 为进一步研究人白细胞介素 (hIL - 18)的生物学特性打下基础 ,进行hIL - 18的基因克隆及原核表达。方法 采用反转录PCR(RT -PCR)法从正常人外周血白细胞中克隆hIL - 18基因 ,并重组于PBV2 2 0表达载体上 ,经酶切初步鉴定后进行DNA序列分析 ,继而观察重组hIL - 18基因在大肠杆菌中不同诱导时间表达量的差异。结果 所克隆的基因与预期结果一致 ,并在 42℃诱导 5h时表达量最高。结论 成功地克隆了hIL - 18基因 。
- 缪海珍杨吉成盛伟华阳小卫李丽娥
- 关键词：RT-PCR基因克隆
- 逆转录病毒双顺反子策略有效转导和共表达ALDH1基因与mdr1基因的研究被引量：1
- 2001年
- 目的 研究含内在核糖体进入位点 (IRES)的逆转录病毒双顺反子载体介导的醛脱氢酶基因 (ALDH1 )与多药耐药基因 (mdr1 )转导和共表达。方法 以携带ALDH1与mdr1基因的重组逆转录病毒双顺反子G1Na ALDH1 IRES mdr1 (G1Na AIM)为载体 ,电穿孔法转导双嗜型包装细胞PA3 1 7,长春新碱筛选 ;所得病毒生产细胞PA3 1 7 AIM与单嗜型包装细胞GP +E86乒乓感染提高病毒滴度 ;以重组病毒上清转染K562细胞 ,应用聚合酶链反应 (PCR)和Southernblot检测转移基因的整合 ,流式细胞术(FCM)及MTT分析基因表达 ,集落培养法测定转导效率。结果 双嗜型病毒上清滴度达 1 .0× 1 0 5cfu ml。基因修饰细胞K562 AIM经PCR和Southernblot证实双基因稳定整合至基因组 ,对 4 氢过氧化环磷酰胺 ( 4 HC)及长春新碱 (VCR)耐药 (提高 3～ 1 0倍 ) ,FCM及集落法检测基因转导效率为 62 %～70 %。结论 逆转录病毒IRES双顺反子载体能引导不同类型的耐药基因有效共表达 ,可用于扩大耐药范围 ,进行体内显性选择。
- 阳小卫陈子兴王玮傅建新国风岑建农夏学鸣
- 关键词：逆转录病毒多药耐药基因MDRL基因
- 应用Southern印迹杂交法检测转移基因在宿主细胞中的整合被引量：7
- 2001年
- 目的 应用Southern印迹杂交法 (Southernblot)证实转移基因整合至宿主细胞基因组DNA。方法 酚氯仿法提取基因转导的PA317/AIM及K5 6 2 /AIM细胞基因组DNA ,以聚合酶链反应 (PCR)扩增转移基因片段 ;随机引物法标记3 2 P -DNA探针 ,与经BamHI酶切、琼脂糖凝胶电泳、转移至尼龙膜的基因组DNA进行Southern杂交反应 ,检测转移基因的整合。结果 PCR反应和Southernblot分析证实转移基因存在于受体细胞基因组DNA中。结论 Southern印迹杂交法证实转移基因稳定整合至逆转录病毒生产细胞PA317/AIM及靶细胞K5 6 2 /AIM中。
- 阳小卫王玮夏学鸣陈子兴
- 关键词：聚合酶链反应转移基因基因组肿瘤基因治疗宿主细胞
- 醛脱氢酶基因转移介导的环磷酰胺耐受性研究
- 目的:观察醛脱氢酶基因(ALDH1)转导的造血细胞对环磷酰胺的耐受.
方法:以逆转录病毒载体pLXSN-ALDH1将醛脱氢酶基因导入人造血细胞系K562，应用PCR检测原病毒的整合，RT-PCR检测ALDH1基...
- 阳小卫岑建农王玮夏学鸣陈子兴
- 关键词：环磷酰胺耐受性造血细胞基因转移逆转录病毒
- 文献传递
- 电穿孔法介导醛脱氢酶基因与多药耐药基因的转移和表达被引量：1
- 2002年
- 背景与目的:将不同类型的耐药基因同时导入造血细胞,以扩大耐药范围和进行体内选择是基因治疗的重要策略,这类载体基因片段较长,进行基因转移有一定的难度。本研究旨在寻找安全有效的长片段基因转移途径。方法:将携带不同类型的耐药基因醛脱氢酶基因(ALDH1)和多药耐药基因(MDR1)的逆转录病毒载体G1Na-AIM以NdeI酶切线性化,电穿孔法转导PA317细胞,经长春新碱(VCR)和4-氢过氧化环磷酰胺(4-HC)选择后,应用Southernblot法确定原病毒的整合,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)分析转移基因的表达,筑巢式聚合酶链反应(nestedPCR)检验转移系统的安全性。结果:电穿孔法有效介导了ALDH1与MDR1基因的同时转移,Southernblot法证实ALDH1与MDR1基因稳定整合至宿主细胞基因组,RT-PCR检测到转移基因的转录,FCM测定下游基因MDR1蛋白表达增高4倍,转导率达98%。nestedPCR未检测到辅助病毒(env)。结论:电穿孔法安全有效地介导了ALDH1与MDR1基因的共转移和高表达。
- 阳小卫国风王玮傅建新岑建农夏学鸣陈子兴
- 关键词：电穿孔基因转移多药耐药基因基因治疗
- 慢性粒细胞白血病血清LDH测定的临床意义被引量：2
- 1998年
- 检测38例慢性粒细胞白血病治疗前的血清乳酸脱氢酶（LDH）总活力，结果LDH明显高于非白血病血液病组（P＜0．01）；治疗获缓解后明显下阵至恢复正常，与非白血病血浓病组无明显差异（P＞0．05）。认为血清LDH活力可作为慢性粒细胞白血病的辅助诊断依据和判断疗效的指标之一。
- 冯正祥虞斐阳小卫
- 关键词：慢性白血病乳酸脱氢酶粒细胞性
- 逆转录病毒介导的耐药基因转移以保护造血功能的实验研究
- 该文由一、逆转录病毒双顺反子载体介导的耐药基因ALDH1与MDR1共表达;二、逆转录病毒介导的以造血干细胞为靶细胞的基因转导条件的优化;三、经多药耐药基因修饰的小鼠骨髓细胞的造血重建和保护作用.进行了详细论述.
- 阳小卫
- 关键词：逆转录病毒多药耐药基因电穿孔基质细胞
- 多药耐药基因修饰的小鼠骨髓细胞对造血功能的保护作用
- 2002年
- 目的 :将体外转染了人多药耐药基因 (MDR1 )的小鼠骨髓细胞 ,移植给经致死剂量照射的受体小鼠 ,观察该基因对小鼠造血功能的保护作用。方法 :分离经 5 -Fu预处理的供体小鼠骨髓有核细胞 ,体外转染由逆转录病毒介导的人多药耐药基因MDR1 ,然后移植给经 8 5Gy致死剂量照射的同系受体小鼠 ,以紫杉醇 (Taxol)、长春新碱(VCR)、柔红霉素 (DNR)筛选 ,观察小鼠血象、生存期和生存率变化 ,应用聚合酶链反应 (PCR)和流式细胞仪 (FCM)分析人多药耐药基因在小鼠中的整合与表达。结果 :致死剂量辐照后 ,移植组小鼠造血功能逐渐恢复 ,未移植组 1 5d内全部死亡。腹腔注射紫杉醇或静脉注射长春新碱、柔红霉素后 ,实验组生存率和生存期明显高于对照组 (P <0 0 5)。表明MDR1基因能保护骨髓细胞 ,并且具有体内选择和富集作用 ,PCR分析提示 ,实验组外周血、骨髓、肝、脾组织中均检测到原病毒整合 ,RT -PCR与FCM检测到MDR1基因表达。结论 :人MDR1基因修饰的小鼠骨髓细胞 ,能有效重建经致死剂量照射的受体小鼠造血功能 。
- 阳小卫岑建农傅建新国风王玮夏学鸣陈子兴
- 关键词：基因骨髓移植造血系统
