陈少娟
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
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- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 一种表达生物素化抗原的方法
- 本发明公开了一种表达生物素化抗原的方法，其使用一种表达载体，该表达载体携带两个串联的开放阅读框，每个开放阅读框都有自己独立的启动子，前面一个开放阅读框具有多克隆位点MCS，用于插入外源基因序列，表达出与谷胱甘肽-S-转移...
- 雷明军买制钢林枫陈少娟
- 文献传递
- 单纯疱疹病毒II型糖蛋白G主要抗原表位的表达和抗原性检测
- 2007年
- 利用PCR拼接技术，合成含单纯疱疹病毒II型糖蛋白G（gG2）抗原表位（氨基酸序列第561～578位）的片段，并进一步利用基因工程技术获得该表位的双拷贝片段，克隆入pET—KDO表达载体进行原核表达。经IPTG诱导后，高效表达出分子量大小约为39kDa的融合蛋白，经Western blot检测具有良好的抗原性。表达的融合蛋白经凝血酶切割和亲和层析纯化，得到双拷贝gG2（561～578aa）目的蛋白，经ELISA检测具有良好的灵敏度和特异性。该重组抗原的构建和表达可用于HSV-2特异性血清学诊断的研究。
- 王晓红卢海蓉章刚陈少娟黄德新李凌云林枫
- 关键词：抗原表位
- 一种表达生物素化抗原的方法
- 本发明公开了一种表达生物素化抗原的方法，其使用一种表达载体，该表达载体携带两个串联的开放阅读框，每个开放阅读框都有自己独立的启动子，前面一个开放阅读框具有多克隆位点MCS，用于插入外源基因序列，表达出与谷胱甘肽-S-转移...
- 雷明军买制钢林枫陈少娟
- 梅毒螺旋体重组抗原的表达及在梅毒血清学诊断中的应用被引量：3
- 2009年
- 目的:克隆、表达梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)膜蛋白TpN47、TpN17、TpN44.5和TpN15,建立双抗原夹心ELISA法,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法:应用聚合酶链反应法(PCR)从Tp全基因组中扩增4个目的片段,克隆到载体pET-HT-JKM中,在BL21(DE3)plysS菌中诱导表达,Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,辣根过氧化物酶标记,双抗原夹心酶联免疫吸附法检测人血清中的特异性IgM和IgG抗体。结果:成功表达了4种重组蛋白用作ELISA包被和酶标抗原检测国家Tp参比血清,特异性和灵敏度均为100%;检测385份临床血清样本,结果与TPPA法相比符合率达到99%(P<0.01),灵敏度和特异性分别为98.2%(162/165)和99.5%(219/220)。结论:表达的4种重组抗原具有很好的生物活性,为理想的梅毒的血清学诊断用抗原。以这4种表达蛋白为基础建立的双抗原夹心ELISA法灵敏度高,特异性好,而且方法简单,结果客观,易于自动化操作,值得临床大力推广。
- 卢海蓉王晓红陈少娟王峰章刚黄德新
- 关键词：重组蛋白梅毒螺旋体
- 免疫层析检测装置及其检测方法
- 本发明公开了一种免疫层析检测装置及其检测方法，装置包括膜基体，膜基体上依次设置有样品垫、承载由反应性物质和指示性物质组成的标记物的标记物垫、包被或化学交联有反应性物质的检测带、吸水垫，标记物为反应性物质和指示性物质偶联在...
- 买制刚林枫李凌云陈少娟卢海蓉易俊波雷明军王晓红黄德新姜丽华
- 免疫层析检测装置及其检测方法
- 本发明公开了一种免疫层析检测装置及其检测方法，装置包括膜基体，膜基体上依次设置有样品垫、承载由反应性物质和指示性物质组成的标记物的标记物垫、包被或化学交联有反应性物质的检测带、吸水垫，标记物为反应性物质和指示性物质偶联在...
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- 文献传递
- HCV核心抗原N-端片段生物素化表达质粒的构建及表达被引量：3
- 2009年
- 目的构建HCV核心(C)抗原N-端1～130aa片段的生物素化表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达。方法PCR扩增HCV C抗原N-端1～130aa片段的编码基因,拼接上生物素-蛋白连接酶底物肽序列(BSP),构建重组原核表达质粒pGEX4T-1-CN130BSP,转化大肠杆菌Rosetta,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE后,电转至硝酸纤维素膜上,以抗HCVC抗原的单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素对表达产物进行分析。结果PCR扩增出约466bp的目的基因片段;质粒pGEX4T-1-CN130BSP经PCR及双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定基因无突变;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为42000,22℃诱导16h可溶性表达产物含量较高;表达的重组蛋白可被抗HCV C抗原的单克隆抗体所识别,并能特异性结合辣根过氧化物酶标记的亲和素。结论已成功构建了HCV C抗原N-端1～130aa片段生物素化表达质粒,并表达出带生物素标签的GST融合蛋白,为进一步研制HCV双抗原夹心检测试剂奠定了基础。
- 雷明军买制刚陈少娟黄德兴林枫李凌云
- 关键词：核心抗原生物素化
- 多聚赖氨酸为载体的聚合物标记物在丙型肝炎病毒核心抗原检测中的应用被引量：2
- 2010年
- 目的探讨以多聚赖氨酸为载体的聚合物标记物在丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)核心抗原检测中的应用。方法以多聚赖氨酸作为载体,将HCV核心抗原单克隆抗体与辣根过氧化物酶(HRP)偶联形成聚合物标记物,同时制备过碘酸钠标记物,比较两种标记物中的抗体相对含量及抗体反应性;将两种标记物分别应用于ELISA和Western blot法检测HCV核心抗原中,比较二者的检测结果,并与市售试剂盒进行比较。结果通过竞争抑制和直接结合试验结果显示,当达到50%抑制率时,聚合物标记物和过碘酸钠标记物的游离抗体浓度分别为0.0019和0.0011mg/ml;当A403值为1.0时,聚合物标记物的稀释度为1:200000左右,而传统标记物为1:20000左右。聚合物标记物和过碘酸钠标记物应用于ELISA法,检测HCV核心抗原的最低检测限分别为2.0和10pg/ml,试验内、试验间变异系数均<10%,特异性良好,临床血清标本检测结果与市售试剂盒的符合率分别为97.0%和98.6%;在Western blot检测中,与过碘酸钠标记物相比,聚合物标记物至少可以提高检测灵敏度10倍。结论以多聚赖氨酸为载体的聚合物标记物可应用于HCV核心抗原的ELISA和Western blot检测,且能提高酶、抗体的比例,进而提高检测的灵敏度,防止漏检。
- 买制刚雷明军易俊波陈少娟
- 关键词：多聚赖氨酸标记物丙型肝炎病毒核心抗原
