陈敏
- 作品数：28 被引量：100H指数：6
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科技资源平台项目国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 狐狸源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：26
- 2012年
- 本研究通过生物学特性、16S rRNA基因和4种等看家基因的序列测定与分析,对分离自北京动物园死亡狐狸病变组织的1株细菌进行鉴定,并对其进行小鼠致病力试验及药物敏感性试验。结果显示:该细菌为革兰氏阴性杆菌,培养特性、理化反应与维氏气单胞菌温和生物型基本相同;根据16S rRNA基因和dnaJ、rpoD、gyrB、cpn60等看家基因的系统进化及其同源性分析,确定所分离的细菌与维氏气单胞菌属于同一系统发育分支,各基因同源性最高分别为97.6%～99.9%。分离菌株对CD-1小鼠有较强的致病作用,其半数致死量为2.8×105cfu/只;对氧氟沙星、头孢他啶等14种抗菌药物敏感,对青霉素G、克林霉素等9种抗菌药物耐药。
- 李伟杰赵耘刘燕岂晓鑫康凯陈敏
- 关键词：维氏气单胞菌系统发育分析药敏试验
- 胸膜肺炎放线杆菌血清学分型多重PCR方法的建立被引量：2
- 2006年
- 10株胸膜肺炎放线杆菌参考菌株,经过纯化、扩增、提取基因组DNA,设计一套特异性引物,运用多重PCR技术,对外毒素基因apxⅠ、apxⅡ和apxⅢ进行扩增,产物经1.6%琼脂糖凝胶电泳,可将10株参考菌株分为5个血清群。血清Ⅰ群由259(血清1型)、263(血清5型)、267(血清9型)组成。血清Ⅱ群由260(血清2型)、262(血清4型)、264(血清6型)、266(血清8型)组成。血清Ⅲ群、血清Ⅳ群和血清Ⅴ群分别由261(血清3型)、265(血清7型)和268(血清10型)单独组成。对于血清Ⅰ群和血清Ⅱ群,通过apxⅣ进行扩增,结果259(血清1型)、263(血清5型)和267(血清9型)分别扩出2.4kb、2.8kb和1.6kb片段;262(血清4型)、264(血清6型)、260(血清2型)或266(血清8型)分别扩出1.6kb、2.0kb、2.8kb片段。
- 朱良全薛青红蒋玉文陈敏康孟佼
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌多重PCR血清型
- 红斑丹毒丝菌SpaA抗原基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测被引量：6
- 2011年
- 参照红斑丹毒丝菌表面抗原A(SpaA)基因的核苷酸序列合成1对引物,对我国生产用红斑丹毒丝菌CVCC43005的SpaA全基因进行了PCR扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,SpaA基因全长1 881bp,含有1个开放性阅读框,编码626个氨基酸。与已提交的红斑丹毒丝菌血清型1a、1b、2a、2b、5、8、9、12、15、16、17、N型的氨基酸同源性为97.5%～100%,血清型4、6、11、19、21的氨基酸同源性为52.8%～55.2%。与已提交的丹毒丝菌血清型18的氨基酸同源性为57.5%～58.0%。采用Chou-Fasman和Karplus-Schulz方案预测蛋白质的二级结构和柔性区域;运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,按Jame-son-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N端的59～64、85～91、174～186、193～201、212～215、221～231、266～275、278～288、291～308、314～327、329～349、356～376、403～456、508～516、528～537、568～576和607～626。
- 李伟杰赵耘康凯岂晓鑫杜昕波陈敏
- 关键词：红斑丹毒丝菌
- 利用菌落多重PCR方法进行不同动物来源多杀性巴氏杆菌鉴定的研究被引量：4
- 2010年
- 参照文献报道的多杀性巴氏杆菌种和荚膜型的特异基因合成6对特异引物,建立多杀性巴氏杆菌鉴定的菌落多重PCR方法,结果5株多杀性巴氏杆菌荚膜型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对48株不同动物来源的多杀性巴氏杆菌进行了鉴定和荚膜型分型,同时与间接血凝试验以及Biolog细菌快速鉴定系统进行比对,结果表明,所建立的多重PCR方法与间接血凝试验、Biolog细菌快速鉴定系统的符合率均达到100%。
- 赵耘杜昕波李伟杰陈敏康凯
- 关键词：多杀性巴氏杆菌
- 狐狸源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及其耐药性分析
- 通过生物学特性、16s rRNA基因和dnaJ、rpoD、gyrB、cpn60等看家基因的序列测定与分析，对分离自北京动物园死亡狐狸病变组织的1株细菌进行了鉴定，并进行小鼠毒力试验及药敏试验。结果显示：细菌为革兰阴性杆菌...
- 李伟杰赵耘刘燕岂晓鑫康凯陈敏
- 关键词：狐狸维氏气单胞菌耐药机制系统发育药敏试验
- 菌落多重PCR鉴定不同荚膜血清型的多杀性巴氏杆菌被引量：3
- 2010年
- 参照文献报道的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和荚膜生物合成位点hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJf、cbD基因的序列合成了6对特异性引物,建立了多杀性巴氏杆菌种和型的菌落多重PCR方法。结果表明,本所保藏的A、B、D、E、F各型多杀性巴氏杆菌均扩增出了相应的预期片段,PCR结果与Biolog鉴定结果和Carter氏间接血球凝集试验结果相一致;而支气管败血波氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠埃希菌、猪链球菌和粪肠球菌的扩增均为阴性。
- 李伟杰赵耘杜昕波康凯陈敏
- 关键词：多杀性巴氏杆菌
- 利用菌落多重PCR对传染性胸膜肺炎放线杆菌进行血清分型被引量：1
- 2010年
- 参照文献报道的传染性胸膜肺炎放线杆菌的特异基因合成5对特异引物,建立传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的菌落多重PCR方法,结果为10株传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对41株传染性胸膜肺炎放线杆菌分离菌株进行血清型分型,结果所有菌株均扩增出了相应的特异片段,其中6株为1型,5株为7型,1株为5型,29株为9型。
- 赵耘杜昕波李伟杰陈敏康凯
- 关键词：传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型
- 产毒素多杀性巴氏杆菌的鉴定被引量：2
- 2010年
- 采用菌落多重PCR方法对分离保存的28株多杀性巴氏杆菌进行种型和毒素基因的检测,结果表明,菌株C51-6、M-4和P-2237为产毒素多杀性巴氏杆菌,菌株C51-6和P-2237为荚膜血清D型,菌株M-4为荚膜血清A型。同时用金黄色葡萄球菌抑制试验、中性吖啶黄沉淀试验和豚鼠皮肤坏死试验对PCR方法进行了验证。基于对甘露醇、卫茅醇、山梨醇、海藻糖的发酵能力和产生鸟氨酸脱羧酶的特性,3株菌株鉴定为多杀性巴氏杆菌多杀亚种。
- 李伟杰赵耘杜昕波康凯陈敏
- 关键词：产毒素多杀性巴氏杆菌多重PCR
- 胸膜肺炎放线杆菌毒素ⅠBD基因特异性片段的克隆及表达
- 2005年
- 以胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型标准菌株基因组为模板,用PCR扩增ApxⅠBD基因的特异性片段;对PCR产物纯化回收后与载体pMD 18-T进行连接、转化,经酶切和序列分析鉴定后亚克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pETⅠBD;转入大肠埃希氏菌BL21中,以IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳。结果,从APP中克隆的ApxⅠBD DNA序列与已发表序列的同源性为100%,长1 447 bp,编码482个氨基酸,所表达的融合蛋白相对分子质量约54ku,与预期的大小相符。结果表明,含有ApxⅠBD基因特异性片段的重组表达载体pETⅠBD已成功构建。
- 薛青红蒋玉文朱良全陈敏康孟佼
- 关键词：克隆
- 多重PCR鉴定不同毒素型的产气荚膜梭菌菌落被引量：6
- 2008年
- 参照文献报道的产气荚膜梭菌α,β,ε,τ毒素基因cpa、cpb、etx及iA序列合成了针对4种毒素基因的4对特异引物,建立了一种简单的产气荚膜梭菌定型的菌落多重PCR方法。结果本所保存的A,B,C,D,E各型产气荚膜梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期条带,而诺维氏梭菌、腐败梭菌和破伤风梭菌的扩增均为阴性;将单个菌落稀释100倍利用此菌落多重PCR仍能扩增到相应的目的片段。并利用此多重PCR对13株不同动物来源的产气荚膜梭菌进行了定型鉴定,并与毒素中和试验鉴定结果进行了比较,结果表明两种方法具有较高的符合率。本方法的建立对于产气荚膜梭菌的快速检测、定型具有十分重要的意义。
- 赵耘杜昕波李伟杰康凯陈敏
- 关键词：产气荚膜梭菌毒素
