陈麟凤
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 供职机构：第三军医大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组人可溶性B淋巴细胞激活因子的制备及活性分析被引量：1
- 2004年
- 目的 制备具有功能活性的人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactortotheTNFfamily ,BAFF)胞外区 134～ 2 85氨基酸残基段 ,为BAFF的深入研究创造条件。方法 提取人新鲜扁桃体组织总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 134～ 2 85氨基酸残基cDNA ,经序列测定后 ,构建于原核表达载体 pQE 80L并转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达及Ni2 + NTA柱层析纯化目的蛋白 ,行SDS PAGE和Western印迹检测。最后经MTT法检测其增殖活性。结果 RT PCR扩增得到了 4 5 9bp的cDNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF13 4 2 85的cDNA序列一致 ,SDS PAGE及Western印迹证实表达蛋白确实为 6×His BAFF13 4 2 85融合蛋白并存在于包涵体中。活性检测证实其能明显刺激肿瘤细胞的增殖。结论 利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF13 4 2 85,得到的纯化蛋白具有较高的生物学活性 ,为进一步的研究奠定了基础。
- 陈麟凤何凤田李蓉芬钟小林张艳高会广吉清
- 关键词：CDNA克隆原核表达淋巴细胞活化
- Th表位修饰的BLyS突变体的构建及活性分析
- 2005年
- 在已克隆可溶性BLyS(sBLyS)cDNA的基础上,经PCR构建了其缺失不同区域的突变体(msBLyS)cDNA,然后将msBLyScDNA与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位DNA序列重组,测序正确后分别克隆于原核表达载体pQE80L,并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导后,融合蛋白以包涵体的形式表达,表达量均在菌体总蛋白的30%以上。包涵体经洗涤、溶解并经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度均在90%以上。活性检测发现,所获重组蛋白均丧失了sBLyS所具有的生物学功能,这些工作的完成为进一步探讨其治疗作用打下了基础。
- 高会广府伟灵李蓉芬陈麟凤邢效如张艳何凤田
- 关键词：生物学活性B淋巴细胞刺激因子肿瘤坏死因子
- 人sΔBAFF的高效原核表达及纯化
- 2006年
- 目的克隆TNF家族B细胞激活因子（B cell activating factor to the TNF family,BAFF）胞外区134～285（sBAFF134-285）氨基酸残基段缺失突变体（s△BAFF）的cDNA,并进行表达及纯化.方法以构建的重组质粒pUC19/sBAFF为模板,采用一步反向PCR法,扩增缺失编码sBAFF的142～160位氨基酸的核苷酸序列.经测序证实后,克隆入原核表达载体pQE-80L.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达产物,Ni2＋-NTA柱层析纯化目的蛋白.结果经一步反向PCR扩增后得到401 bp的DNA片段,该片段序列与GenBank报道的编码人△BAFF的胞外区（s△BAFF）cDNA序列一致.含s△BAFF的表达载体在大肠杆菌中可表达出相对分子质量为18 000的蛋白质并以包涵体的形式存在,经Ni2＋-NTA柱层析纯化后得到高纯度的目的蛋白.结论已成功地制备出人s△BAFF蛋白,为其功能的研究创造了条件.
- 黄刚何凤田李蓉芬高会广陈麟凤龚薇胡颖胡大强
- 关键词：CDNA克隆原核表达纯化
- 人mBAFF在原核系统的可溶性表达及功能鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的利用含重组质粒pQE80L-mBAFF的DH5α大肠杆菌,优化表达B细胞活化因子的突变蛋白(mBAFF)。方法研究mBAFF的体外诱导条件,包括诱导时间I、PTG浓度、诱导温度对表达量的影响。对表达条件进行优化后进行大量表达,经Ni2+NTA亲和层析和SepharcryL S200凝胶过滤层析纯化。流式检测突变蛋白与细胞结合的能力以及MTT检测突变蛋白的生物学活性。结果最佳表达条件是诱导时间4 h,诱导温度37℃,IPTG终浓度0.2 mmol/L。mBAFF占菌体总蛋白的35%,蛋白纯度达98%以上,所获突变蛋白能与淋巴细胞表面受体结合,但不能刺激淋巴细胞增殖。结论优化可溶性表达后能提高mBAFF蛋白质在DH5α大肠杆菌表达,并经Ni2+NTA亲和层析和Sepharcryl S200凝胶过滤层析得到纯度高的表达产物,所获结果为进一步研究创造了条件。
- 张立何凤田高会广李蓉芬彭家和陈麟凤黄刚胡大强
- 关键词：纯化
- 人HMGB1 B Box的表达及其生物活性被引量：3
- 2005年
- 经RTPCR从人新鲜扁桃体组织中扩增人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的Bbox(88～162残基)的cDNA,构建于载体pUC19,经测序后与GenBank中报道的已知序列完全一致,再构建于原核表达载体pQE80LDHFR中,表达并鉴定目的蛋白.经Ni2+亲和层析柱、多粘菌素B层析柱纯化获得高纯度的DHFRHMGB1Bbox蛋白,然后将此重组HMGB1Bbox加入到人外周血单核细胞(PBMCs)中,37℃,5%CO2下,刺激PBMCs6h,用ELISA检测PBMCs释放TNFα、IL6的量,经检测后证明纯化后的重组HMGB1Bbox能显著地刺激PBMCs释放致炎因子TNFα、IL6.HMGB1Bbox的表达及其生物活性的初步研究,为进一步研究HMGB1Bbox的作用机制以及新型抗炎制剂的研发奠定基础.
- 张艳何凤田黎松李蓉芬钟小林高会广吉清戴双双陈麟凤邢效如
- 关键词：HMGB1BOXRT-PCR纯化ELISA生物活性
- 重组人可溶性BAFF及其突变体的制备与活性分析
- TNF家族的B淋巴细胞活化因子(BAFF)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的一个新成员，它属Ⅱ型跨膜蛋白，通过与其受体结合而广泛参与B细胞增殖分化及抗体的产生;同时也参与T细胞的活化与应答过程，在体液免疫和细胞免疫中具有重...
- 陈麟凤
- 关键词：肿瘤坏死因子B淋巴细胞活化因子突变体原核表达
- 文献传递
- 重组人BAFF_(134～285)的克隆及在大肠杆菌中的高效表达
- 2005年
- 目的克隆人TNF家族的B细胞激活因子(BcellactivatingfactortotheTNFfamily,BAFF)胞外区cDNA,并进行高效表达和纯化。方法提取人新鲜扁桃体组织总RNA,经RTPCR扩增编码人BAFF胞外区134～285氨基酸残基cDNA,经序列测定后,克隆至pQE80L载体中,并转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达及Ni2+NTA柱层析纯化目的蛋白,最后经SDSPAGE和Westernblot检测。结果RTPCR扩增得到了459bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF134～285的cDNA序列一致,SDSPAGE及Westernblot证实表达蛋白确实为6×HisBAFF134～285融合蛋白,并存在于包涵体中。结论利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF134285,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。
- 陈麟凤何凤田李蓉芬钟小林
- 关键词：大肠杆菌GENBANKCDNA片段CDNA序列IPTG
- 甘氨酸/丝氨酸置换146位半胱氨酸对sBAFF功能的影响
- 2006年
- 目的探讨甘氨酸/丝氨酸置换146位半胱氨酸对sBAFF功能的影响,为深入探讨sBAFF的功能和机制奠定基础。方法采用一步反向PCR法,将编码sBAFF第146位半胱氨酸(Cys)的核苷酸序列置换为甘氨酸(G)和丝氨酸(S)的编码序列,测序正确后,亚克隆到高效原核表达载体pQE80L;以IPTG诱导表达,SDSPAGE和Westernblot检测表达产物,Ni2+NTA柱层析纯化目的蛋白;最后经MTT法检测其促B淋巴细胞增殖活性。结果经一步反向PCR扩增后均得到459bp的DNA片段,经测序分析表明分别为sBAFF第146位半胱氨酸残基点突变为甘氨酸和丝氨酸的序列,目的蛋白在大肠杆菌中得到高效表达。活性检测证实其能明显刺激B淋巴细胞系Raji细胞增殖,与正常sBAFF相比,置换为丝氨酸后活性升高,置换为甘氨酸后活性无明显改变。结论在原核表达时,通过置换146位半胱氨酸为丝氨酸可明显提高sBAFF的活性,为进一步探讨sBAFF的功能机制奠定了基础。
- 黄刚何凤田李蓉芬高会广陈麟凤张立胡大强
- 关键词：CDNA克隆蛋白纯化细胞活化
- 人BLyS免疫抑制分子的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2005年
- 目的用异源性T辅助细胞表位修饰人可溶性BLyS突变体(msBLyS),构建和表达BLyS的新型免疫抑制分子。方法经PCR方法构建msBLyScDNA,然后分别与鸡卵清溶菌酶(HEL)或卵清蛋白(OVA)Th表位DNA序列重组,行序列测定后,构建于高效原核表达载体pQE-80L并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导表达,Ni-NTA层析纯化后,通过细胞增殖实验检测融合蛋白的生物学活性。结果DNA测序表明,重组HELmsBLyS和OVAmsBLyS的DNA序列与文献报道的序列完全一致。HELms-BLyS和OVAmsBLyS在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达。经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度可达90%以上。活性检测发现,重组蛋白均不能促进Raji细胞增殖。结论成功构建了BLyS的免疫抑制分子,并获得了高效表达及纯化,纯化产物已丧失了sBLyS所具有的细胞增殖活性,为进一步探讨其治疗作用打下了基础。
- 高会广何凤田府伟灵李蓉芬陈麟凤卞爱娜吉清戴双双
- 关键词：B淋巴细胞刺激因子免疫抑制分子
- 人可溶性APRIL基因的克隆、表达及生物学活性检测被引量：7
- 2005年
- 为探索人可溶性增殖诱导配体 (sAPRIL)在多种肿瘤细胞的增殖和存活以及促肿瘤形成中的作用 ,用RT PCR从扁桃体总RNA中扩增出人sAPRIL基因 .经克隆测序后进行同源性比较 ,证实所克隆的基因即为sAPRIL .将克隆载体经酶切并构建表达载体 ,在大肠杆菌中表达 ,表达量达4 3 6 % .纯化蛋白后进行3 H TdR参入实验 ,表明sAPRIL有明显促进肿瘤的形成及肿瘤细胞的增殖与存活的作用 .
- 戴双双何凤田杨朝辉彭家和李蓉芬张艳陈麟凤
- 关键词：增殖诱导配体基因克隆
