韩保光
- 作品数：15 被引量：27H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病人血清中PreS1/2抗原检测方法的建立及初步应用
- 1999年
- 目的：建立乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）ＰｒｅＳ抗原检测方法。方法：表达与纯化了ＨＢＶＰｒｅＳ１／２抗原，并用纯化蛋白免疫家兔，利用纯化抗血清包被ＥＬＩＳＡ板，吸附病人血清中包含ＰｒｅＳ１／２抗原的ＨＢＶ病毒颗粒或病毒亚单位，特异吸附颗粒用抗ＨＢｓＡｇ的酶标单抗检测。结果：利用金属螯合柱层析的方法高度纯化了ＰｒｅＳ重组抗原，用复性的重组抗原免疫家兔３次，血清抗体滴度可达１∶５１．２万。利用纯化抗血清建立的ＰｒｅＳ１／２抗原测定方法具有较高的灵敏度与特异性。在３００份ＨＢｅＡｇ阳性与１９２份ＨＢｅＡｇ阴性血清中分别检测到２６０份（８７％）与１４２份（７４％）阳性血清。结论：初步结果表明。
- 陈坤韩保光马贤凯张贺秋孟莉王国华夏芳宋晓国凌世淦
- 关键词：乙型肝炎抗原E抗原
- 利用6× His/ Ni-NTA 表达纯化系统一步纯化乙型肝炎前S抗原被引量：1
- 1999年
- 目的：利用 ６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统表达并纯化带有 ６ 个 Ｈｉｓ 纯化标签的乙型肝炎前 Ｓ抗原。方法：利用 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ 亲和层析，比较了 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白分别在非变性和变性条件下的各种纯化条件和产率，并用三种方式对 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白进行了复性。结果： Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白均存在于 ２５０ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ 咪唑洗脱峰中。从 １ Ｌ 诱导菌体中可以分别纯化 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白 １０～１５ ｍ ｇ，纯度达到电泳纯。三种复性方式中，在 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 柱上复性 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白的复性率达 ６０．５％ 。结论：６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统不仅可以使外源蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，而且可以通过简单的纯化步骤得到较高纯度的目的蛋白。该表达纯化系统为利用大肠杆菌制备重组蛋白提供了一种简便可行的方法。
- 孟莉韩保光陈坤宋晓国张贺秋凌世淦马贤凯
- 关键词：重组蛋白质组氨酸标签乙型肝炎前S抗原
- HIV-1整合酶单链抗体对整合酶生物学活性抑制作用的研究被引量：1
- 1999年
- 从抗ＨＩＶ１ 整合酶（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ ，ＩＮ） 单链抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ｆｒａｇ ｍｅｎｔ ｖａｒｉａｂｌｅ ，ＳｃＦｖ） 的ＨＢ２１５１ 表达菌中选取３ 个克隆，进行ＳｃＦｖ 的可溶性表达与纯化，并观察ＳｃＦｖ 对ＩＮ 体外生物学活性的影响。结果显示，在ＳｃＦｖ ：ＩＮ摩尔浓度为８ ∶１ 时，３ 个克隆的ＳｃＦｖ 可明显抑制ＩＮ 的３′端加工、链转移及去整合活性； 而相同浓度的ＢＳＡ 及抗人交联纤维的ＳｃＦｖ 对ＩＮ 活性无明显影响。测序结果表明，此３ 个克隆的ＳｃＦｖ 基因序列完全相同，符合鼠抗体可变区序列。完全抑制３′端加工及去整合反应所需ＳｃＦｖ 的浓度高于链转移反应。研究结果提示，抗ＩＮ 的ＳｃＦｖ 可抑制ＩＮ 的体外生物学活性，此结论为进一步研究此类ＳｃＦｖ 对ＨＩＶ 在细胞内复制的影响及其机制奠定了基础。
- 张健慧李南宋晓国孟莉韩保光凌世淦马贤凯
- 关键词：艾滋病毒整合酶生物活性单链抗体
- HIV-1整合酶单链抗体在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定被引量：3
- 1999年
- 将具有HIV－1整合酶结合活性的单链抗体重组噬菌体感染HB2151大肠杆菌，经IPTG诱导．在周质腔萃取物及培养基上清中，均检测到有较特异与整合酶结合的可溶性单链抗体的表达。利用HiTrapAnti－Etags对单链抗体进行了亲和层析纯化。Western-blot结果初步表明，单链抗体不仅可与整合酶的单体反应，而且也可与其二聚体结合。提示：研制的单链抗体可用于对HIV－1整合酶活性影响的研究。
- 张健慧宋晓国孟莉冯玉英韩保光凌世淦马贤凯
- 关键词：整合酶单链抗体艾滋病毒大肠杆菌纯化
- HIV-1整合酶蛋自(p31)的表达、纯化及其在血清学诊断中的应用被引量：4
- 1999年
- 在大肠杆菌中，利用pET－3c表达载体，高效表达了具有全长序列的HIV—1整合酶蛋白（p31）。表达产物主要以包涵体的形式存在，用1mol／LNaCl溶解包涵体可部分地溶解p31蛋白，溶解上清中p31蛋白具有很高的纯度。本文进一步描述了一种在变性条件下重组蛋白的纯化方法，即将包涵体用8mol／L尿素溶解，先后经过S-SepharoseFastFlow与Sephacryl-300柱层析，可将重组产物纯化到电泳纯。纯化蛋白以1μg／ml包被ELISA板，分析正常人及HIV－1阳性个体的血清，结果重组p31与检测的所有41份阳性血清均可发生特异反应，而与36份正常血清则不起反应，表明纯化的重组蛋白可用于检测血清中的抗HIV-1抗体。
- 韩保光孟莉马贤凯宋晓国陈坤张贺秋凌世淦
- 关键词：整合酶艾滋病毒纯化血清诊断
- 重组HIV-1 Gag/Env融合抗原在大肠杆菌中的表达及免疫学分析被引量：2
- 1999年
- 在大肠杆菌中， 利用ｐＤＯＧ 载体来源的表达载体ｐＤＧａｇＥｎｖ ， 高效表达了相对分子质量（ Ｍｒ） 为４６ ５００（ｐ４６） 的重组ＨＩＶ１Ｇａｇ／ Ｅｎｖ 融合抗原（Ｇａｇ２０９ ～４３７ ＋ Ｅｎｖ４７４ ～５１８ ＋ Ｅｎｖ５４８ ～６７５） 。表达产物同时还包括：Ｍｒ ～２８ ５００ ， Ｍｒ ～２２ ０００ 与 Ｍｒ ～１９ ０００ ３ 种（ｐ２８ ，ｐ２２ 和ｐ１９） 蛋白。此４ 种表达产物均存在于包涵体中，不能被８ ｍ ｏｌ／Ｌ 尿素溶解。Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹分析表明，４ 种重组蛋白均能与ＨＩＶ１ 阳性血清发生特异反应；其中ｐ４６ 与ｐ２８ 蛋白能与抗ＨＩＶ１ｐ２４ 反应，而ｐ２２ 与ｐ１９ 蛋白则不与其起反应。其中ｐ１９ 蛋白对应于Ｅｎｖ４８２ ～５１８ ＋ Ｅｎｖ５４５ ～６７５ ，ｐ２２ 蛋白可能是从Ｇａｇ／ Ｅｎｖ 表达质粒的ｇａｇ 基因内部的甲硫氨酸（ＡＴＧ４２３） 起始的翻译产物。将包涵体充分洗涤后，利用制备电泳方法纯化了ｐ４６ ，ｐ２２／ｐ１９ 及ｐ１９ 蛋白。将后两种纯化蛋白质以２ ｍ ｇ／Ｌ 的浓度包被ＥＬＩＳＡ 板，检测了国家卫生部药品生物制品检定所提供的ＨＩＶ１／ ＨＩＶ２ 质检血清。结果可检出其中包含的所有１８ 份ＨＩＶ?
- 韩保光孟莉宋晓国陈坤张贺秋马贤凯凌世淦
- 关键词：艾滋病毒融合抗原大肠杆菌
- 分泌抗 HIVp24 单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其初步鉴定被引量：1
- 1997年
- 以含人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）核心抗原ｐ２４全部氨基酸序列的重组蛋白ｐＧ１免疫小鼠，用免疫脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，成功地建立了５株分泌抗ＨＩＶｐ２４单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，这５株ＭｃＡｂ与乙肝核心抗原（ＨＢｃＡｇ），丙肝Ｃ区、ＮＳ３区抗原不发生交叉反应，而与重组ｐ２４抗原产生特异反应。本组单抗的研制成功为建立检测ＨＩＶｐ２４抗原的方法奠定了基础。
- 刘荷中凌世淦董邦权董邦权宋晓国孟莉韩保光金伯泉
- 关键词：单克隆抗原杂交瘤艾滋病毒
- 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
- 1995年
- 在大肠杆菌中,利用新构建的含T7g-10L RBS以及λ-PR启动子的新型原核表达载体,通过表达gag-pol基因片段,获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白p24的高效表达。克隆的gag-pol基因片段在其阅读框架移位区域插入了4bp碱基,其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与gag一致,从而实现了对gag-pol融合蛋白的有效加工,产生成熟的核心蛋白p24及其它产物。重组p24以可溶形式存在,可以被抗p24的单克隆抗体特异识别。测定的N端8个氨基酸序列与从病毒纯化的p24完全一致。在使用硫酸铵沉淀后,采用两步离子柱层析,可将重组蛋白纯化到95％以上的纯度。结果表明,纯化的p24可以作为特异性很强的试剂而用于HIV感染的诊断及病情的预后,并可用于p24的生化及结构分析。
- 韩保光孟莉邹民吉凌世淦宋晓国赵春文段聚宝王嘉玺马贤凯
- 关键词：HIV-1核心蛋白纯化
- HIV－1多表位重组膜抗原及其表达
- 本发明涉及HIV－1多表位重组膜抗原。该重组膜抗原包括了gp120上C－端高度保守的亲水区域482—518位氨基酸(7224nt－7333nt)及gp41膜外区域548—675位氨基酸(7423nt－7805nt),几乎...
- 韩保光孟莉马贤凯宋晓国凌世淦王鸿雁
- 文献传递
- 利用噬菌体表面呈现技术制备HIV-1整合酶单链抗体的初步研究被引量：2
- 1998年
- 目的：研制ＨＩＶ－１整合酶（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ，ＩＮ）的重组噬菌体单链抗体。方法：采用噬菌体表面呈现方法。结果：由ＩＮ蛋白免疫的小鼠脾细胞ｍＲＮＡ中构建了单链抗体基因ｃＤＮＡ文库，克隆入噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ，经转化大肠杆菌ＴＧ１，获得了库容为３．５×１０５的表达文库。利用包被在酶联板上的ＩＮ蛋白进行四轮亲和富集，筛选出７６株具有ＩＮ结合活性的重组噬菌体。对随机挑选的一株克隆进行了ＤＮＡ序列分析，证明其符合小鼠抗体序列。结论：获得了抗ＨＩＶ－１ＩＮ的噬菌体单链抗体，为其进一步研究打下基础。
- 张健慧孟莉韩保光宋晓国冯玉英凌世淦马贤凯
- 关键词：艾滋病毒整合酶单链抗体噬菌体
