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韩先干: 作品数：177 被引量：360H指数：9; 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

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VI型分泌系统2核心组分VgrG对禽致病性大肠杆菌致病性的影响被引量：6: 2016年; 【目的】构建禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)VI型分泌系统2(Type VI secretion system 2,T6SS2)结构基因vgrG缺失株,研究其对APEC生物学特性及致病性的影响。【方法】通过Red同源重组方法构建DE719菌株vgrG基因缺失株,并利用低拷贝质粒pSTV28构建互补株。比较分析野生株、缺失株与互补株的生长特性、运动性、生物被膜形成能力、黏附侵袭能力、动物致病力等差异。【结果】vgr G基因缺失不影响DE719的生长速度、运动能力及生物被膜形成能力。致病性试验表明缺失vgrG导致体内定殖能力及致病力显著下降,然而对DF-1细胞的黏附能力增强。【结论】T6SS2核心组分VgrG在APEC感染过程中发挥重要作用,为了解APEC的致病作用提供参考。; 刘新王少辉孟庆美韩先干许漩杨登辉丁铲彭大新于圣青; 关键词：禽致病性大肠杆菌

一株禽致病性大肠杆菌菌株及其在疫苗制备中的应用: 本发明属于生物技术领域，本发明提供一株禽致病性大肠杆菌菌株，为禽致病性大肠杆菌luxS和aroA双基因缺失株，其保藏号为CGMCC10601。本发明所述禽致病性大肠杆菌菌株可用于制备禽致病性大肠杆菌灭活、弱毒疫苗和菌蜕疫...; 韩先干于圣青王少辉杨立军陈兆国黄燕米荣升贾海燕; 文献传递

布氏杆菌外膜蛋白D15的克隆表达及生物学活性分析: 本实验通过PCR技术扩增牛型布氏杆菌外膜蛋白基因D15,将D15全长克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-D15,转化大肠杆菌BL21（DE3）后,在IPTG诱导下表达大小约为130Ku的融...; 孙晓庆韩先干童永亮宋军丁铲胡青海于圣青; 关键词：外膜蛋白生物学特性; 文献传递

一种用于检测金黄色葡萄球菌的试剂盒、引物对、探针和方法: 本发明公开了一种用于检测金黄色葡萄球菌的试剂盒、引物对、探针和方法。所述的试剂盒包括RPA反应体系，所述的RPA反应体系包括RPA引物探针混合液，所述RPA引物探针混合液包括一引物对和探针，所述引物对中上游引物的核苷酸序...; 蒋蔚韩先干王权王亚磊; 文献传递

一株鸭疫里默氏杆菌脂多糖突变株及其应用: 本发明提供了一株鸭疫里默氏杆菌脂多糖突变株及其应用，本发明所述鸭疫里默氏杆菌脂多糖突变株，保藏编号为CGMCC 10147。本发明用鸭疫里默氏杆菌脂多糖突变株研制的油乳剂灭活疫苗对鸭疫里默氏杆菌国内优势血清型1、2和10...; 于圣青邹洁驰王小兰丁铲王少辉韩先干田明星; 文献传递

单增李斯特菌单克隆抗体制备及免疫磁珠分离方法的建立: 2023年; 免疫磁珠技术操作简单、快速高效,目前已广泛应用于细菌的快速分离纯化等领域,本研究旨在建立一种捕获率高、特异性好的单增李斯特菌免疫磁珠分离方法。首先通过杂交瘤技术制备出8株抗单增李斯特菌单克隆抗体,效价均达到1∶1024000,且特异性较好。利用效价最高的腹水6-E6制备单增李斯特菌免疫磁珠,并对单增李斯特菌免疫磁珠最适条件进行优化,结果选择MEST(7.0)为偶联缓冲液、磁珠直径为750 nm、免疫磁珠添加量为0.4 mg、捕获时间45 min、单增李斯特菌含量在1×10^(4)CFU/mL时,免疫磁珠捕获率最高可达76.29%。在模拟牛奶样品中免疫磁珠特异性捕获率可达到67.71%。该分离方法可快速且特异地分离单增李斯特菌,操作简便,为快速分离食品中的单增李斯特菌并实现快速检测提供了技术支持。; 叶方钰谢雨芮王权刘爽张海洋韩先干蒋蔚; 关键词：单增李斯特菌单克隆抗体免疫磁珠

免疫蛋白组学技术鉴定鸭疫里默氏杆菌的免疫原性蛋白GroEL: 鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)可引起家鸭、火鸡及多种禽类的急性或慢性败血性传染病,给养鸭业造成巨大的经济损失。在其21个血清型中,国内引起鸭发病的主要是血清1、2和10型。因目前...; 韩先干胡青海陈文静丁铲何亮于圣青; 文献传递

副溶血弧菌SH112株OmpA蛋白的高效表达及免疫学特性被引量：6: 2019年; 【目的】我们前期研究表明副溶血弧菌SH112株的OmpA蛋白在该菌的致病过程中发挥重要作用,是亚单位疫苗研制的潜在靶标抗原。本研究进一步对ompA(VPA1186)基因进行克隆表达,并研究其免疫学特性。【方法】扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段,定向克隆至表达载体,基因测序后对其编码蛋白质进行生物信息学分析。重组蛋白His-OmpA经纯化后,免疫ICR小鼠制备鼠多抗血清。Western blotting检测该蛋白的免疫原性及鼠多抗血清的特异性。动物实验验证其免疫保护率。【结果】成功表达分子量约为40.0 kDa的重组蛋白His-OmpA。制备的鼠多抗血清ELISA效价可达1∶50000以上。Westernblotting检测结果显示,该血清可与His-OmpA蛋白、总外膜蛋白和全菌蛋白发生特异性反应,说明所表达的目的蛋白保持原蛋白的免疫原性。此外,该高免血清可与其他主要血清型的副溶血弧菌发生特异性交叉反应,而与其他非副溶血弧菌菌株无交叉反应,表明该血清特异性较高,且提示OmpA蛋白可能是副溶血弧菌属的共同保护性抗原。小鼠免疫保护实验结果表明,该蛋白可提供约35%的免疫保护率。【结论】OmpA蛋白可作为诊断副溶血弧菌感染和亚单位疫苗研制的靶蛋白,为进一步开展该蛋白的功能研究提供了参考。; 王亚磊王权白雪瑞别闯南陈兆国韩先干蒋蔚; 关键词：副溶血弧菌 OMPA 免疫原性

鸭疫里默氏杆菌Mtan对底物SAH的催化活性: 2017年; 【目的】分析鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)不同血清型pfs基因的序列差异,并开展其编码蛋白S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Mtan,又称Pfs)的催化活性研究。【方法】PCR扩增9株不同血清型RA的pfs基因,分析其核苷酸序列的同源性;构建该基因的重组表达载体p Cold-RA-pfs,表达、纯化RA的重组蛋白Mtan(RA-Mtan);测定RA-Mtan对底物S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)的催化活性,运用哈维弧菌报告菌株BB170检测催化底物的自诱导物2(Autoinducer-2,AI-2)活性。【结果】对RA的pfs序列分析结果表明,不同血清型RA的核苷酸一致性在93.9%-100%之间;SDS-PAGE检测结果表明,RA-Mtan呈可溶性表达;酶活测定表明RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌(Avain pathogenic Escherichia coli,APEC)的Lux S蛋白共同作用于底物时,可产生浓度为176.7μmol/L的同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY);AI-2活性检测结果表明,产生的AI-2具有生物学活性。【结论】RA不同血清型的pfs高度保守,RA pfs基因的编码产物RA-Mtan在体外具有催化SAH的活性,RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌的Lux S蛋白共同作用于底物SAH时,能产生有活性的AI-2,为进一步研究pfs对RA的调控作用提供参考。; 吴小卡徐达荆雅玮吕小龙胡剑刚米荣升黄燕王成明陈兆国韩先干; 关键词：鸭疫里默氏杆菌 S-腺苷同型半胱氨酸密度感应系统

phoP/Q双组分系统对禽致病性大肠杆菌的毒力调控作用被引量：5: 2016年; phoP/Q作为一种外在环境感受器,参与调节细菌对外部环境的适应性。本研究拟探讨phoP/Q双组分系统对禽致病性大肠杆菌(APEC)的生长、定植、毒力等生物学特性的影响。利用Red重组系统构建APEC AE 17株的phoP/Q双组分调控系统缺失株,并构建phoP/Q双组分调控系统回复质粒,转化缺失株,构建回复株。通过生长运动性试验、黏附入侵CEF细胞试验、毒力基因转录水平检测以及半数致死量(LD50)等试验比较野生株、缺失株、回复株的生物特性。与野生株相比,phoP-phoQ缺失不改变其生长特性;运动性较野生株下降63%;黏附与入侵CEF细胞能力分别降低69.83%(P<0.01)和62.17%(P<0.05);LD50显示毒力减弱13.3倍;polA、tsh基因转录水平分别上调41%、54%;sodA、iss分别下调64%和98%。phoP/Q双组分系统参与对APEC致病性的调控,该系统的缺失会降低APEC的致病性。; 李春晓张宇曦祁克宗韩先干涂健薛挺周秀红; 关键词：禽致病性大肠杆菌荧光定量PCR

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