黄丹
- 作品数：5 被引量：9H指数：1
- 供职机构：西南大学农学与生物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
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- eSRK_s酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测
- 2011年
- 为研究甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域高变区(eSRKs)的相互作用,构建了eSRKs基因的酵母双杂交诱饵载体,检测其自激活作用,并验证是否适用于后续的相互作用研究.以甘蓝B3为材料,通过RT-PCR技术获得eSRKs目的基因片段,将其克隆到pGBKT7载体中,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-eSRKs;测序正确后,将重组质粒转入Y2HGold,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性以及对报告基因有无自激活作用,结果获得了正确的eSRKs基因片段,并成功克隆到pGBKT7诱饵载体中,且转化在有诱饵载体pGBKT7-eSRKs的Y2HGold在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,表明表达产物对酵母细胞无毒性;显色反应结果表明对报告基因也无自激活作用,为下一步利用酵母双杂交系统检测SCR蛋白与SRK蛋白胞外域高变区的相互作用奠定基础.
- 杨红朱利泉彭一波罗兵杨昆张贺翠吴志刚黄丹高启国
- 关键词：酵母双杂交自激活作用
- 利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝SCR与SRK胞外域片段间的相互作用被引量：8
- 2011年
- 【目的】利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域(eSRK)片段间可能的相互作用区域。【方法】以结球甘蓝B3为材料,利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的全长SCRB3、SCRB3-1、SCRB3-2的重组诱饵质粒;以pGADT7为载体的全长eSRKB3、eSRKB3-1、eSRKB3-2的重组激活域(AD)质粒。用PEG/LiAc法将上述重组诱饵质粒转化感受态酵母菌Y2HGold,重组AD质粒转化感受态酵母菌Y187;Y2HGold[pGBKT7-SCRB3-s]、Y187[pGADT7-eSRKB3-s]两两融合培养,观察交配菌在SD/-Trp-Leu/x-α-gal/AbA(DDO/x/A)、SD/-Trp-Leu-Ade-His/x-α-gal/AbA(QDO/x/A)平板上的生长情况。【结果】酵母双杂交重组表达载体构建成功,且无毒性和自激活作用产生;9个试验组中只有SCRB3-1、SCRB3-2与eSRKB3-1、eSRKB3-2重组表达质粒转化子两两组合的4个融合株在QDO/x/A平板上出现蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2。【结论】酵母双杂交系统适用于SCR与SRK蛋白相互作用的研究,初步确定了SCR与eSRK存在相互作用,SRK跨膜域的存在与否对其相互作用的研究没有影响。
- 杨红朱利泉张贺翠杨永军薛丽琰杨昆余浩彭一波罗兵吴志刚黄丹高启国王小佳
- 关键词：结球甘蓝自交不亲和酵母双杂交
- 甘蓝SRK激酶结构域编码区的克隆及其与MLPK的双色FISH定位研究
- 芸薹属自交不亲和性由S位点所控制。SRK基因是决定自交不亲和性反应的关键因子,前人已经从芸薹属中的甘蓝、甘蓝型油菜等物种中克隆出SRK基因。SRK基因的变异和表达量都会影响自交不亲和性。SRK基因的胞外域有着较大的多态性...
- 黄丹
- 关键词：甘蓝自交不亲和性SRK荧光原位杂交
- 文献传递
- 甘蓝SRK的S域及SCR酵母表达载体的构建及其相互作用区段的研究被引量：1
- 2011年
- 为了深入研究S位点受体激酶（SRK）和S位点富含半胱氨酸蛋白（SCR）甘蓝自交不亲和（self-incompatibility,SI）信号传导的雌雄决定因子的相互作用机制,以自交不亲和性高的结球甘蓝为材料,采用酵母双杂交体系,构建pGADT7-eSRKs和pGBKT7-SCRs重组载体,并分别转化到Y187和Y2HGold酵母中,通过SD/-Ade-His-Trp-Leu平板上菌落的形成,PCR以及x-α-gal显色反应鉴定转化到酵母中的两个重组质粒相互作用。结果表明,SRK S域的SRK1及SRK4分别与SCR2相互作用,且初步显示其相互作用区域为SRK第1个外显子的第16~421bp的片段和SCR第1876~2068bp的片段。这既为SRK-SCR相互作用提供了具体证据,也为甘蓝自交不亲和性分子机理的深入研究提供了新内容。
- 彭一波朱利泉杨红薛丽琰罗兵吴志刚黄丹杨昆高启国李成琼任雪松王小佳
- 关键词：甘蓝SRK酵母双杂交体系
- 利用三种核型分析方法构建甘蓝的精确核型图谱
- 本文通过传统的核型分析方法、5S rDNA和45S rDNA为特征位点的核型分析方法以及基因组原位杂交的核型方法的比较研究,旨在构建统一的甘蓝核型图谱。采用甘蓝染色体的相对长度、臂比以及随体的有无,成功的将甘蓝的18条染...
- 王永吴韦铷吴志刚黄丹朱利泉
- 关键词：荧光原位杂交核型分析甘蓝
- 文献传递
