黄俏佳
- 作品数：51 被引量：90H指数：6
- 供职机构：福州总医院更多>>
- 发文基金：南京军区医药卫生科研基金国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MEKK2基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEKK2的表达抑制被引量：1
- 2012年
- 设计并合成针对人MEKK2基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,将合成的互补片段退火后克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,并使其在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组。将经鉴定正确的重组腺病毒质粒转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEKK2-siRNA重组腺病毒。病毒体外转导人胃腺癌AGS细胞,Western blot印迹法检测其对MEKK2表达的抑制。经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEKK2-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误。Western blot印迹检测结果显示,重组腺病毒表达载体可抑制MEKK2基因的表达,以pAd-MEKK2-siRNA2(针对MEKK2 cDNA 992-1 010的片段)抑制效果为最佳,pAd-MEKK2-siRNA1(针对MEKK2 cDNA 1 456-1 474的片段)和pAd-MEKK2-siRNA3(针对MEKK2 cDNA 1 351-1 369的片段)则未见明显的抑制效果。DNA Ladder和细胞存活测定结果表明,敲减MEKK2的表达后,AGS细胞接受H2O2刺激后的凋亡受到较强抑制、细胞存活数增加,明显高于野生型细胞和转导siRNA阴性对照腺病毒细胞接受H2O2刺激后的,差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。该研究成功地构建了针对MEKK2基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEKK2基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础。
- 钱凤英兰风华董荔红黄俏佳
- 关键词：腺病毒载体RNA干扰H2O2细胞凋亡
- siRNA表达载体稳定沉默肺癌A549细胞MEKK3基因的细胞株建立被引量：1
- 2010年
- 目的构建人MEKK3基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体并建立稳定沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株。方法设计并合成针对人MEKK3基因4个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列，以BamHI及Hindm酶切位点分别克隆入pSilencer4．1-CMVhygro载体，测序鉴定后以脂质体分别转染入A549细胞，Western印迹检测它们对MEKK3表达的抑制，并选择抑制效率最高的表达载体转染入A549细胞，潮霉素筛选后获得含该载体的抗性细胞克隆株，荧光实时定量PCR检测该细胞克隆株中MEKK3表达抑制。结果测序鉴定表明4个MEKK3siRNA表达载体正确无误；Western印迹结果显示对MEKK3的表达有抑制作用，其中pSilencer4．1-MEKK3siRNA2的抑制率达84％；荧光实时定量PCR结果表明，pSilencer4．1-MEKK3siRNA2可稳定沉默MEKK3mRNA的表达，有效率达83％。结论成功地构建了针对人MEKK3基因的siRNA表达载体，并成功地建立了能高效且稳定地沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株。
- 沈瑞明兰风华钱凤英董荔红黄俏佳
- 关键词：肺癌A549细胞株基因表达荧光实时定量PCR
- Akt2 may contribute to inhibit GAPDH mediated-apoptosis in ovarian cancer cells leading to increased cell survival
- Many cancers are genetic diseases.A lots of studies have demonstrated that the aberration or mutation of signa...
- 黄俏佳兰风华郑智勇韩俊勇董荔红解燕川郑峰
- 文献传递
- MyD88基因真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的:构建人髓样分化因子88(MyD88)基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体,观察其在GES-1细胞中的表达.方法:从健康人外周血单个核细胞中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增MyD88基因cDNA全长序列,经NheI和KpnI酶切位点,插入到pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒中,构建成MyD88基因的真核表达载体;用脂质体Lipo-fectamine2000将其转染入人胃黏膜细胞株GES-1细胞中,Western Blot检测其在GES-1细胞中的表达.结果:重组载体经酶切鉴定和测序证实目的基因正确无误;Western Blot结果显示MyD88基因在GES-1细胞具有良好的表达.结论:成功构建了pcDNA3.1/myc-His(-)A-MyD88真核表达载体,并在GES-1细胞中进行了表达,为进一步研究MyD88的结构和功能奠定了基础.
- 沈瑞明凌彩虹黄俏佳
- 关键词：基因克隆基因转染
- MEKK3对IL-1受体和Toll样受体信号转导途径的差异调节被引量：2
- 2009年
- 目的探讨有丝分裂原激活的蛋白激酶/细胞外信号调节激酶的上上级激酶3（MEKK3）在IL-1R和TLR信号转导途径中的作用。方法①分别用IL-1、LPS和CpG刺激MEKK2、MEKK3基因敲除及MEKK2和MEKK3基因双敲除的小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）,通过检测IL-6的表达,确定MEKK3在IL-1R-TLR信号转导中的作用;②将NF-кB报告基因分别与MEKK3负性表达载体、MEKK3、MyD88、IRAK1和TRAF6基因,共转染入野生型（MEKK3-WT）或MEKK3基因敲除（MEKK3-/-）的MEFs中,通过检测IL-1及LPS刺激后NF-кB基因的表达,确定MEKK3在IL-1R-TLR信号转导链上的位置;③Westernblot、激酶活性及NF-кBDNA结合活性测定检测ERKMAPK、JNKMAPK、p38MAPK和NF-кB的活性,确定MEKK3的下游信号途径;④免疫共沉淀测定检测MEKK3与TRAF6的相互作用,初步研究MEKK3在IL-1R-TLR信号途径中的激活机制;⑤将MEKK3基因重新导入MEKK3-/-MEFs中,观察其接受IL-1和LPS刺激后IL-6产生的恢复能力,确定MEKK3调控IL-1R-TLR的特异性。结果通过与MEKK3-WT对比,发现接受IL-1及LPS刺激后,MEKK3-/-MEFs中IL-6的产生明显受阻（CpG刺激无变化）;MEKK3-/-MEFs中NF-кB报告基因的激活受到显著抑制;MEKK3-/-MEFs中NF-кB信号途径以及JNKMAPK、p38MAPK的激活明显受阻;MEKK3-/-MEFs丧失了与TRAF6相互作用的能力;当MEKK3-/-MEFs重新获得MEKK3基因后,恢复了IL-1和LPS刺激后IL-6的产生。结论MEKK3是IL-1R-TLR4信号转导途径的关键性信号分子,在信号转导链上,它位于MyD88-IRAK1-TRAF6复合物的下游,在接受IL-1和LPS刺激后,通过与TRAF6形成复合物被激活;MEKK3在IL-1和LPS介导的NF-кB、JNKMAPK和p38MAPK信号途径的激活中起关键性作用,NF-кB、JNKMAPK和p38MAPK是MEKK3在IL-1R-TLR4信号转导途径中激活的下游信号通路;MEKK3不参与调控CpG–TLR9信号转导途径。
- 黄俏佳Su Bing
- 关键词：白细胞介素-1细菌脂多糖细胞信号转导
- 健康人对胃癌特异性抗原的体液免疫应答的研究
- 2007年
- 目的验证健康人血清中是否存在能与胃癌细胞抗原反应的抗体,为研究机体是否存在抗胃癌特异性抗原的体液免疫监视奠定基础。方法将经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）后的6株不同的人胃癌细胞株的裂解液转移至硝酸纤维素膜后分别与4-6岁、9-11岁、14-16岁、30-50岁及50-70岁的5个不同年龄段的无任何肿瘤病史的人体血清（第1抗体）进行反应后,再分别与辣根过氧化物酶标记的抗人IgG及抗人IgM的第2抗体进行反应,用化学发光底物检测膜上的抗原-抗体复合物后显示结果。结果无论第2抗体为抗人IgG还是抗人IgM,5组不同年龄段的共150份血清与6株不同的胃癌细胞株反应结果与作为阴性对照的正常人胃黏膜细胞株（GES-1）的结果差异无统计学意义。结论健康人血清中不存在能与胃癌细胞抗原反应的特异性抗体,为研究机体是否存在抗肿瘤的体液免疫监视奠定了一定的基础。
- 黄俏佳林建银林旭
- 关键词：抗原胃癌免疫印迹技术
- 脆性X智力障碍1基因新型可变剪接外显子和剪接异构体的发现
- 目的：对脆性X智力障碍1基因( FMRI)的剪接异构体进行鉴定,并探讨不同个体间、不同组织间FMR1基因可变剪接的差异.
方法：提取外周血总RNA,用长链RT-PCR扩增FMR1基因全长编码序列,胶回收试剂盒纯...
- 沈瑞明兰风华钱风英董荔红王志红林炎鸿黄俏佳
- 关键词：剪接异构体
- 一例肾上腺脑白质营养不良患者及其家系的基因突变分析被引量：12
- 2002年
- 目的 鉴定 1例肾上腺脑白质营养不良 (ALD)患者及其家庭成员的ALD基因突变类型。方法 采用RT PCR技术 ,分 4个片段扩增患者和 1例对照个体的ALD基因编码序列 ,用末端终止法测定PCR产物序列 ,用限制性酶切分析验证测序结果。结果 患者ALD基因第 2 80密码子存在 1个未见报道的错义突变 ,即CGC→CTC ,该突变使原来的精氨酸被亮氨酸替换 ,并使相应部位的 1个Hin 6I酶切位点消失。对照个体不存在此突变。在患者家庭成员中检测出 2个杂合子。结论 在一个中国肾上腺脑白质营养不良家系发现 1个新的ALD基因突变 ,即R2
- 吴一波杨渤生吴玉水黄俏佳兰风华
- 关键词：肾上腺脑白质营养不良基因突变RT-PCR
- MEKK3基因siRNA表达载体的构建及其RNAi效应的初步研究
- 目的:构建人MEKK3基因的siRNA表达载体并初步研究其RNAi效应.方法:设计针对MEKK3 mRNA 4个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,并合成相应的寡核苷酸,经退火后在5′及3′端分别形成带有BamHⅠ和...
- 黄俏佳沈瑞明兰风华董荔红
- 关键词：SIRNA
- 文献传递
- 快速斑点免疫金渗滤法检测抗双链DNA抗体被引量：10
- 1997年
- 抗双链DNA(ds-DNA)抗体的检测对于系统性红斑狼疮(SLE)的诊断和病情监测具有重要的意义。我们以纯化的细菌质粒ds-DNA为抗原,采用胶体金标记和快速膜斑点渗滤技术,建立了一种新的检测抗dsDNA抗体的斑点免疫金渗滤法(dot immunogold filtratlon assay,DIGFA),现将其临床应用结果报道如下。一、资料和方法 1.受检血清:确诊的SLE患者128例,其中活动性SLE 51例,缓解期患者77例。混合结缔组织病(MCTD)19例,多发性肌炎和皮肌炎(PM/DM)19例,上述疾病的诊断标准见文献[1]。类风湿性关节炎(RA)25例,进行性系统性硬化症(PSS)11例,干燥综合征(SS)18例,
- 兰小鹏黄俏佳涂向东冯修高唐玉钗朱忠勇周明萱
- 关键词：系统性红斑狼疮抗双链DNA
