刘佳建 作品数:12 被引量:30 H指数:4 供职机构: 南开大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部科学技术研究重点项目 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
牛泡沫病毒两类启动子活性的比较和机制探讨 被引量:1 2000年 Two promoters, LTR (long terminal repeat) and IP (internal promoter), exist in genomes of foamy viruses. Cell transfection and transient expression assay demonstrated that: the basal activity of BFV (bovine foamy virus) IP is much higher than that of BFV LTR; transactivator of BFV—Borf 1, which activates gene expression directed by BFV LTR, also functions on BFV IP with an activation fold higher than that on LTR. The results suggest that BFV IP and LTR may regulate viral gene expression by different mechanisms, and that Borf 1 may stimulate BFV IP and LTR in different ways. In addition, an in vivo DNA competition assay demonstrated that a common transcription factor may be involved in both mechanisms of the two promoters. 王世珍 张莉 刘佳建 刘淑红 陈启民 耿运琪关键词:牛泡沫病毒 长末端重复序列 启动子 甘油对单链构象多态性分析的影响 被引量:16 1998年 单链构象多态性(single strand conformation poly-morphism,SSCP)分析是以PCR技术为基础检测DNA多态性的一种方法。其基本原理是:单链DNA在进行不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)时,迁移率除与DNA单链的长短有关外,更主要取决于DNA单链所形成的具有一定空间结构的构象。这种构象由DNA单链碱基顺序决定,其稳定性靠分子内部局部顺序的相互作用来维持。相同长度的单链因其顺序的不同,甚至单个碱基的不同,所形成的构象不同,导致迁移率的变化而出现泳动变位(mobili-ty shift)。该方法自建立起来不断地发展、完善,应用范围也日益广泛。特别是在人类癌基因和抑癌基因突变的检测、基因诊断、连锁分析、基因作图等领域成效突出。 刘佳建 耿运琪 彭中镇 李奎关键词:多态性分析 构象 DNA多态性 PCR-SSCP BSV LTR和Tas的克隆及调节机制研究 刘淑红 耿运琪 陈启民 马明 王金忠 孙庆 刘佳建 张莉 乔文涛 王世珍 该项目发现并证实Borf-1蛋白不仅是牛泡沫病毒编码的反式激活因子,而且是序列特异性DNA结合蛋白,可直接结合LTR中的TREII及IP中的TREIP,而不依赖于细胞因子的介导。TREII与TREIP之间在结合Tas的过...关键词:关键词:泡沫病毒 LTR TAS 牛泡沫病毒LTR的反式激活因子靶序列研究(英文) 被引量:1 1999年 牛泡沫病毒(BFV)是反转录病毒科泡沫病毒属成员之一.其基因组除编码gag,pol,env三个结构基因外,在env和3'LTR之间有2个ORF(ORF-1和ORF-2),编码自身的反式激活因子Tas等调节蛋白.本研究利用我们实验室分离鉴定的BFV3026中国毒株[12]为材料,克隆Orf-1基因,构建pBFVORF-1表达质粒,通过带有luc基因的LTR系列缺失质粒与pBFVORF-1共转染,瞬时表达分析结果将BFVLTR上Tas应答元件(TRE)定位于-983/-668(TREI),-470/-140(TREI)和RU5区.其中TREI、TREII为正调控区域,RU5为负调控区域,并进一步证明RU5在异源启动子(BIVLTR)上具有抑制其下游基因表达的功能.这些结果表明BFVTas作用机理与慢病毒(Tat)。 刘佳建 耿运琪关键词:泡沫病毒 长末端重复序列 牛泡沫病毒(BSV)反式激活因子的克隆及功能分析 刘淑红 耿运琪 陈启民 马明 王金忠 刘佳建 乔文涛 孙庆 梁栋 对泡沫病毒(foamy viruses,FVs)进行研究,以自主分离的牛泡沫病毒中国毒株BFV3026为材料,克隆病毒反式激活因子tas基因并进行了序列分析。在E.coli中合成并纯化了Tas蛋白,证实Tas蛋白是BFV...关键词:关键词:牛泡沫病毒 克隆 功能分析 牛泡沫病毒(BSV)对牛免疫缺陷病毒(BIV)的激活作用 被引量:4 1999年 用瞬时表达分析等方法,证明牛泡沫病毒( B S V)3026 中国毒株能在体外激活牛免疫缺陷病毒( B I V) 基因表达, B S V3026 编码的反式激活因子 Borf1 行使这种激活作用。缺失突变分析表明, Borf1 在 B I V L T R 上靶序列位于- 410/ - 115( + 1 为转录起始位点) 区域,但其中的 N Fκ B 位点( - 367/ - 319) 与这种激活作用无关,包括转录起点下游( R U5 区) 在内的- 115/ + 204 区域也与这种激活作用无关。该结果对研究 B I V 致病机理及防治 A I D S 有重要意义。 刘佳建 刘淑红 陈启民 耿运琪关键词:牛泡沫病毒 牛免疫缺陷病毒 不同病毒超感染对牛免疫缺陷病毒(BIV)基因表达的影响 耿运琪 陈启民 马明 刘淑红 王金忠 刘佳建 孙庆 梁栋 乔文涛 王世珍 该课题发现包括DNA病毒和RNA病毒在内的多种病毒均可成为BIV感染中的共因子。超感染过程中病毒间相互作用的探索,为阐明慢病毒持续性感染和致病机理提供了重要依据,同时丰富和深化了人们对细胞信号网络及调节机制的了解。该课题...关键词:关键词:免疫缺陷病毒 基因表达 牛泡沫病毒调节蛋白功能及其在LTR上应答元件的研究 被引量:6 2000年 牛泡沫病毒 (BFV)具有复杂的基因组结构 ,其基因组除编码反转录病毒共有的 gag、pol、env 三个结构基因之外 ,在其env和 3′LTR之间有两个重叠的读码框 (ORF - 1和ORF - 2 ) ,编码Borf- 1、Borf- 2、Bet等多种调节蛋白 ,其中Borf- 1(2 49aa)为BFV反式激活因子 (Tas)。为研究Borf - 1的结构与功能 ,Borf - 1在LTR上的应答元件及作用机制 ,Borf- 2、Bet等调节蛋白在BFV基因表达调控中的作用 ,本研究以本室分离鉴定的BFV30 2 6中国毒株为材料 ,克隆Borf- 1等基因片段构建系列质粒 ,与带有luc报告基因的LTR系列缺失质粒共转染 ,作瞬时表达分析。结果表明 ,Borf- 137aa~ 114aa、C端 2 18aa~ 2 49aa为其行使激活功能所必需区域 ;Tas在BFVLTR上的应答元件 (TRE)位于 - 983/ - 6 6 8(TREI)、- 470 / - 140 (TREII)和RU5区 ,其中TREI、TREII均位于U3区 ,为正调控元件 ,RU5区为负调控元件。进一步研究证明 ,TREII能在异源启动子 (BIVLTR)上行使功能 ,且与其自身的方向无关 ,类似于增强子元件。此外还发现 ,RU5区具有抑制其下游基因表达的功能 ,该区在异源启动子 (BIVLTR)之后使其下游基因表达量降低。计算机分析结果表明 ,BFVRU5区的负调控作用可能是因为该区mRNA具有稳定的二级结构 。 刘佳建 王世珍 张莉 乔文涛 陈启民 耿运琪关键词:牛泡沫病毒 调节蛋白 基因表达 泡沫病毒的基因内部启动子 被引量:2 1998年 泡沫病毒的基因内部启动子刘佳建耿运琪(南开大学生命科学学院,天津300071)关键词泡沫病毒内部启动子反式激活因子泡沫病毒在分类上属反转录病毒科(Retroviridae)的泡沫病毒属(Spumavirus),因其感染细胞后可诱导产生类似泡沫的大量空... 刘佳建 耿运琪关键词:泡沫病毒 基因 Borf-1蛋白是牛泡沫病毒的反式激活因子 被引量:4 1999年 以近来分离并鉴定的BFV30 2 6中国毒株为材料 ,用PCR方法扩增BFV5′全长LTR( - 983/+ 32 2 )及非结构基因Orf 1 ,Orf 2 ,构建带不同长度LTR的克隆质粒及Borf_1 ,Borf_2等非结构蛋白表达质粒 ,引入Luc基因为报告基因做瞬时表达分析 .首次证明BFV编码的 2 49个氨基酸的Borf_1蛋白即为自身的反式激活因子 ,并且发现Borf_1反式激活作用的正调控元件位于LTR的U3区 - 1 40上游 ( + 1为转录起点 ) ,负调控元件位于转录起点下游 + 2 9/+ 32 3(RU5区 ) . 刘佳建 刘淑红 陈启民 耿运琪关键词:泡沫病毒