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乙型肝炎病毒PreS2S基因在毕赤酵母中表达的研究: 构建重组质粒PHIL-D2/PreS2S以研究乙肝病毒PreS2(120-146)S基因编码蛋白在毕赤酵母中的表达.通过PCR扩增获得PreS2S片段,插入含AOX1启动子的Pichia Pastoris表达载体PHIL...; 李利金立杰杨屹邵丽军谷丽娟刘岩松董厉子王宇; 关键词：S基因毕赤酵母; 文献传递

大流行流感病毒疫苗(甲型H1N1流感疫苗)的研究: 郭立君戚凤春张雪梅赵大鹏李晓波张玉辉范宇红惠琦任琦庄茂欣毕业刘岩松张赐强; 大流行流感病毒疫苗(甲型H1N1流感疫苗简称甲流)研究项目是2009年“甲流”在中国境内大肆流行时吉林省科技厅启动的应急项目。长春所接到任务后，在短短3个月时间内，完成了各项研究工作，改进了流感疫苗的生产工艺，提高了疫苗...; 关键词：; 关键词：流感病毒疫苗生产工艺

毕赤酵母表达乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化和免疫效果被引量：1: 2007年; 目的研究重组毕赤酵母表达的乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化方法及免疫效果。方法甲醇诱导含preS2S基因的重组毕赤酵母菌,采用蔗糖区带速率离心、Butyl-S-Sepharose 4FF疏水层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析等方法,对表达产物进行纯化。纯化后蛋白经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定,制备成疫苗,并进行效力试验。放射免疫法检测免疫小鼠血清抗体浓度,计算ED50和相对效力。ELISA法检测血清中的preS2S抗体。结果纯化后的preS2(epi)S蛋白相对分子质量约为27000,且能与特异性抗体结合。两批纯化蛋白制备的疫苗ED50分别为0.35和0.48μg/ml,参比苗为0.52μg/ml。2批疫苗的体外相对效力分别为1.5和1.1,均合格,血清抗体平均浓度为808和784mIU/ml,参比苗为312mIU/ml。2批疫苗免疫小鼠后均产生了preS2抗体。结论该纯化方法实用有效,纯化后的preS2(epi)S蛋白比S蛋白具有更好的免疫原性。; 李利金立杰赵小琳杨屹刘岩松董厉子郝富勇李建平; 关键词：乙型肝炎病毒 PRES2蛋白 S蛋白纯化免疫效果

甲型流感病毒DNA疫苗的小鼠免疫效果: 2009年; 目的观察甲型流感病毒M2基因与GM-CSF基因DNA疫苗的小鼠免疫效果。方法提取甲型流感病毒DNA疫苗质粒。将BALB/c小鼠随机分成流感裂解疫苗对照组、空载体pVAXI对照组、pVAX/GM-CSF对照组、pVAX/M2实验组、pMIG实验组,按0、2、4程序免疫BALB/c小鼠,第一针免疫后1周,定期对小鼠眼眶采血。用血凝抑制(HI)试验检测特异性抗体,流式细胞术双标法检测脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量,ELISA方法检测细胞因子IL-4和IFN-γ的含量,并进行保护性试验。结果流感裂解疫苗对照组HI平均值均>40,产生了特异性血凝素抗体,其余各组均未检测到抗体;流感裂解疫苗组具有较强的刺激淋巴细胞增殖的作用,各组间T淋巴细胞表面CD4+及CD4+/CD8+的水平比较,差异有统计学意义;DNA疫苗组可刺激机体产生较高水平的细胞因子,且保护率较流感裂解疫苗对照组提高了一倍。结论甲型流感病毒DNA疫苗可诱导小鼠的免疫应答,且细胞免疫水平显著高于流感裂解疫苗。; 孙洋张雪梅赵大鹏汪春义戚凤春赵虹刘岩松任琦辛暨华徐建国; 关键词：甲型流感病毒 DNA疫苗免疫效果

Vero细胞对狂犬病病毒aGV株的易感性: 2015年; 目的探讨WHO引进的Vero细胞对狂犬病病毒（rabies virus,RV）aGV株的易感性。方法将RV aGV按MOI 0.01-0.1感染Vero细胞主代和工作代,显微镜下观察细胞形态;免疫荧光法观察感染24、48、72和96 h细胞内病毒的增殖情况;连续培养15 d,每天取上清液,采用免疫荧光法检测病毒滴度。结果 RV感染Vero细胞可致细胞圆缩病变,病毒感染第7天,病变率约为20%;RV感染Vero细胞主代和工作代24 h单个细胞内可见特异性荧光灶,48 h 20%-30%细胞内可见荧光灶,72 h 60%-80%细胞内可见荧光灶,96 h 90%-100%细胞内可见荧光灶;病毒感染后2-8 d,上清液中检测到的RV滴度均在103-108 FFU/ml之间波动,均为第8天达到高峰,达5.0×108FFU/ml以上。结论 WHO引进的Vero细胞对RV aGV株有较强的易感性,可应用于狂犬病疫苗的规模化生产。; 赵淑洁陈立新刘岩松朱琨莹丁丽丽柴博雅李春艳崔文广苗丽; 关键词：狂犬病病毒 VERO细胞易感性

应用篮式生物反应器制备森林脑炎灭活疫苗(Vero细胞)被引量：3: 2015年; 目的探讨篮式生物反应器制备森林脑炎灭活疫苗（Vero细胞）。方法应用14 L篮式生物反应器,以Vero细胞作为森林脑炎病毒增殖的细胞基质,采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养,探讨不同细胞接种浓度对生物反应器内细胞密度及病毒产量的影响。连续收获的森林脑炎病毒液经超滤浓缩、1∶4 000（v/v）β-丙内酯灭活、柱层析纯化后,获得疫苗原液,按照《中国药典》三部（2010版）进行相关检测。结果用（5-7.5）×105个/ml细胞浓度接种Vero细胞培养森林脑炎病毒可连续收获30 d以上,平均病毒滴度为8.4 lg LD50/ml;1∶4 000（v/v）β-丙内酯灭活24 h可完全灭活病毒,3批病毒浓缩液灭活验证试验均未检出残余活病毒;柱层析纯化后杂蛋白去除率可达89.56%;疫苗原液经无菌检查合格,其他各项质量指标均符合《中国药典》三部（2010版）规定。结论应用篮式生物反应器培养Vero细胞制备了合格的森林脑炎灭活疫苗,该工艺适用于森林脑炎灭活疫苗的规模化生产。; 刘岩松王华孙宏亮安继新纪权邢坤鹏张朔刘梦妮邹勇; 关键词：生物反应器 VERO细胞

乙型肝炎病毒PreS_2S基因在毕赤酵母中表达的研究: 2006年; 构建重组质粒PHIL-D2/PreS2S以研究乙肝病毒PreS2(120-146)S基因编码蛋白在毕赤酵母中的表达。通过PCR扩增获得PreS2S片段,插入含AOX1启动子的Pichia Pastoris表达载体PHIL-D2中,构建重组表达质粒PHIL-D2/PreS2S,转化酵母宿主菌GS115。挑取阳性克隆摇床培养,甲醇诱导表达。通过ELISA、RPHA鉴定表达产物。成功构建了PHIL-D2/PreS2S真核表达载体,经过序列分析,插入的基因为在中国流行的adr亚型。在毕赤酵母中重组载体表达了S蛋白,S蛋白的表达量为34.9 mg/L,PreS2抗原检测为强阳性。利用毕赤酵母表达系统能够有效地表达乙型肝炎病毒的PreS2S蛋白,PreS2S蛋白具有良好的生物学活性。; 李利金立杰杨屹邵丽军谷丽娟刘岩松董厉子王宇; 关键词：S基因毕赤酵母

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刘岩松