刘文军
- 作品数：13 被引量：58H指数：5
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒表面抗原S和前S1融合基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究被引量：2
- 2000年
- 构建了 pCHBSSIG质粒 ,其特点是CMV立即早期启动子调控乙型肝炎 (乙肝 )表面抗原S +前S1融合基因在前 ,SV40早期启动子调控GS扩增基因在后 ,此质粒转化到CHO dhfr-细胞中 ,经克隆加MSX及MTX筛选、扩增 ,建立了 7个高效表达乙肝表面抗原S及前S1融合蛋白细胞系GdSS1,并检测了其中GdSS1 18细胞系的生物学特性 ,结果表明 :未发现微生物污染 ,无致瘤性 ,遗传稳定 ,电镜下可观察到 2 2nm的颗粒 ,纯化后的蛋白在SDS PAGE及Westernblot中显示出特异性的 2 7kD、30kD乙肝表面抗原S和前S1的融合蛋白带。主蛋白的反向被动血凝(RPHA)滴度为 1∶2 5 6～ 1∶5 12 ,前S1蛋白的ELISA滴度为 1∶12 8。
- 田淑芳刘文军杨芙蓉宗芳李军阮薇琴陈红王文王秀平张陵林阮力
- 人血小板生成素在重组痘苗病毒中的分泌表达
- 1999年
- 目的研究人血小板生成素（ｈＴＰＯ）在重组痘苗病毒中的表达。方法以ＰＣＲ法从人胚肝ｃＤＮＡ文库中克隆完整的ｈＴＰＯ基因，将所克隆基因插入痘苗病毒表达质粒ｐＪＳＡ１１７５ＳｍａⅠ位点，置于７．５Ｋ启动子控制之下，并构建在３４９位氨基酸变异与非变异的两种ＴＰＯ重组痘苗病毒。以Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法和促ＴＰＯ依赖细胞增殖的活性测定，进行表达产物的检测。结果研究证实：ｈＴＰＯ可分泌性的表达于重组痘苗病毒感染细胞上清中，并具有特异性的生物学活性。结论ｈＴＰＯ在重组痘苗病毒中的表达为ＴＰＯ结构与功能研究提供了一条新途径。
- 魏博杨洁刘文军张玉倩阮力
- 关键词：人血小板生成素重组痘苗病毒基因表达
- 检测脊髓灰质炎IgM抗体捕捉法ELISA的建立及其在早期快速诊断中的应用被引量：2
- 1991年
- 首次建立了用于脊髓灰质炎快速、分型诊断的血清IgM抗体捕捉法ELISA。检测了52例疑似病人,IgM阳性率为76.9％(40/52),而粪便病毒分离率仅为44.2％(23/52),前者的阳性检出率明显高于后者。做病毒分型诊断结果,与分离病毒中和试验定型的总符合率为92.86％(39/42)。检测601例来自全国各省的脊灰疑似病人血清,其阳性率波动于13％～92.3％,平均为61.1％。阳性率与收集血清的病日相关,发病0～3天收集者,阳性检出率为69.5％,4～25天者为64％,26～54天者为52％,55天以上者则未能检出。本检测方法需时1.5天,简便、敏感、特异,重复性良好,适用于脊灰的早期快速诊断。对其实用性进行了讨论。
- 张礼璧刘玉清刘文军
- 关键词：ELISA脊髓灰质炎IGM抗体
- 乙型肝炎表面抗原S-蛋白糖化位点序列的人工变异及其哺乳动物细胞表达产物的性状研究被引量：7
- 1997年
- 利用末端重叠ＰＣＲ法和定点突变技术，获得了去除Ｎ－连接多糖结构的乙肝表面抗原Ｓ突变基因，将乙肝表面抗原Ｓ－蛋白中结合Ｎ－连多糖结构序列Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ中的第１４８苏氨酸的密码子ＡＣＴ，改变为编码甘氨酸的密码子ＧＧＴ。构建了该突变基因的表达载体并在ＣＨＯ细胞中表达，筛选到两株表达水平较高的细胞系。对其中的一株细胞系Ｃ４１的表达产物做了初步纯化和鉴定。纯化样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，只含有２３ｋＤ一条蛋白带，而对照原基因ＣＨＯ细胞的表达产物则含有２３ｋＤ、２７ｋＤ和３０ｋＤ三条蛋白带，证实经人工修饰后其哺乳动物细胞表达产物不再含有糖基，纯化样品在电镜下可清楚地显示２２ｎｍ的球形颗粒。单克隆抗体反应谱分析发现，ＣＨＯ细胞表达的无糖ＨＢｓＡｇ与含糖ＨＢｓＡｇ的抗原表位存在明显差别。
- 刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明
- 关键词：乙型肝炎表面抗原
- 一种可以在哺乳动物细胞中高效表达乙肝表面抗原的重组质粒
- 本发明提供一种利用CHO-dhfr阴性细胞的谷氨酰胺合成酶(GS)基因作为扩增加筛选基因构建的能表达乙肝病毒表面抗原基因的重组质粒pMSG。本发明的质粒结构中GS基因来源于CHO-dhfr阴性细胞，受SV40早期启动子调...
- 刘文军朱既明阮力杨芙蓉任贵方
- 文献传递
- 聚合酶链反应用于脊髓灰质炎病毒的诊断和定型被引量：8
- 1991年
- 利用聚合酶链反应(Polymerase chian reaction,PCR)对脊髓灰质炎病毒Sabin相关株进行了诊断和定型。选用的引物Map7、Map14与肠道病毒具有同源性,经扩增后产生大小为115bp的核酸片段;引物Sabin Ⅰ-1、Ⅰ-2对Ⅰ型Sabin株特异,经扩增后产生大小为97bp的核酸片段;引物Sabin Ⅱ-1、Ⅱ-2对Sabin Ⅱ型株特异,扩增产物为71bp;引物Sa-bin Ⅲ-1、Ⅲ-2对Sabin Ⅲ型株特异,扩增产物为44bp.此方法敏感性高,可检出10^(1.5)TCID_(50)/ml感染量的病毒核酸。利用PCR方法对我国各地送检的几株脊髓灰质炎病毒的定型结果,与中和试验完全一致。
- 马静雅张礼璧刘文军
- 关键词：脊髓灰质炎病毒聚合酶链反应
- 核酸免疫可特异地诱发小鼠对乙型肝炎病毒表面抗原S+PreS1免疫反应被引量：14
- 1996年
- 运用改造后的乙型肝炎病毒表面抗原Ｓ＋ＰｒｅＳ１融合基因（将ＰｒｅＳ１区肝细胞受体结合位点（２１－４７ａａ）编码基因融合到Ｓ蛋白Ｃ端２２３位残基下游），构建了一系列真核表达载体，并在ＣＨＯ细胞上有效表达了分泌型的、具有Ｓ＋ＰｒｅＳ１双重抗原性的融合蛋白颗粒。用上述质粒ＤＮＡ肌肉免疫Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，成功地检测到了抗－ＨＢｓ和抗－ＰｒｅＳ１抗体，加强免疫能显著改善免疫效果。本研究还建立了检测抗－ＰｒｅＳ１的竞争抑制法和羊抗人ＨＢｓＡｇ封闭法，两种方法符合率达９６％，但后者更为敏感。用羊抗人ＨＢｓＡｇ封闭法测得抗－ＰｒｅＳ１滴度最高可达１：１２８０以上。
- 梁雨田淑芳刘文军李军阮力朱既明
- 关键词：乙型肝炎表面抗原核酸免疫
- 中国湖南株丁型肝炎病毒cDNA（443－870）片段的克隆和序列分析
- 1994年
- 取１例湖南丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）ＲＮＡ阳性血清，经强变性剂法抽提ＨＤＶＲＮＡ，逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增，扩增的ＨＤＶＣＤＮＡ片段重组到ｐＵＣ１８质粒中，获得了中国湖南株ＨＤＶＣＤＮＡ（４３３－８７０）片段克隆，ＤＮＡ测序结果显示，该片段（４３８ｈｐ长，包括一端ＰＣＲ引物２５ｈｐ）与已知的美国、意大利、法国、诺鲁和中国台湾５株ＨＤＶｃＤＮＡ相同片段比较，同源性分别为９１．３％，９４．５％，９１．３％，８４．５％和８９．３％，其中与ＨＤＶＲＮＡ复制密切相关的第一个高度保守区与美国株、意大利株和法国株完全同源。
- 王国棠陈梅龄田庚善傅希贤张国庆刘文军任贵方郑欣薛海鹏
- 关键词：丁型肝炎病毒逆转录CDNA克隆
- 谷氨酸酰合成酶(GS)基因扩增选择系统的建立被引量：2
- 1997年
- 利用TR－PCR方法从CHOdhfr－细胞中克隆到五株GS基因。对三株GS基因进行了功能分析和序列分析。结果表明，895位核苷酸全部由G变为C，相应的氨基酸白Gly变为Arg，此处变异是CHOdhfr－细胞本身所固有的，不影响GS基因的功能。而399位核苷酸G到A的变异，直接影响到GS基因的功能。用只有895位核苷酸变异的GS基因作扩增选择基因构建表达CAT基因的质粒，转化细胞后，GS基因不仅自身具有扩增的能力，而且能够带动外源基因进行扩增。细胞内外源基因CAT拷贝数可达1000—2000拷贝／细胞，较已有报导的GS基因具有更高的扩增效率，基因扩增前后CAT基因的表达产量提高了10—20倍左右。
- 刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明
- 关键词：基因扩增CAT基因
- 高效表达乙肝表面S(主蛋白)和前S1(大蛋白)融合抗原的转基因哺乳动物细胞系
- 在乙肝表面抗原PreS1(21－47)基因片段与S基因的第223位相连的基础上在其下游引入RNA加聚A信号AATAA、乙肝病毒增强子1(En1)和增强子2(En2),及突变的x基因(mX)构成pCHBSS1G质粒。将pC...
- 田淑芳阮力刘文军杨芙蓉宗芳李军陈红王文阮薇琴王秀平
- 文献传递
