刘永晖
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：郑州大学生物工程系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- PRRSV重组NSP7蛋白ELISA检测方法的建立
- 目前,猪繁殖与呼吸综合征依然是世界养猪业的一大难题。猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因组长约15KB,为单正链RNA病毒,它含8个开放阅读框,编码nsp7蛋白的基因是ORF1,该基因位于基因组的5’端。目前的研究表明NSP7蛋...
- 刘永晖
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒血清抗体检测
- 抗猪FcγRⅡb多抗阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖增强作用研究被引量：6
- 2012年
- 为验证猪FcγRⅡb在抗体依赖增强(ADE)作用中的功能,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清中提取IgG并制备F(ab′)2片段,将104 TCID50的PRRSV病毒与80μg/mL的F(ab′)2片段或抗PRRSV阳性血清(中和效价1/5.9,经128倍稀释)混合,共同感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞,发现亚中和滴度的阳性血清能显著增强病毒对PAM的感染,但不能增强病毒对Marc-145细胞的感染;而F(ab′)2片断不能增强病毒感染;用兔抗猪FcγRⅡb多抗孵育PAM细胞,再用上述病毒与阳性血清复合物感染PAM,结果阳性血清对病毒感染的增强作用受到明显抑制。表明猪FcγRⅡb能够介导PRRSV ADE作用。
- 蒋志政张改平刘明阳乔松林刘永晖王蕊万博鲍登克王爱萍
- 关键词：阻断
- 猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。
- 王蕊张改平乔松林刘永晖蒋志政万博鲍登克王爱萍
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp7蛋白的表达与纯化被引量：2
- 2012年
- 为了解nsp7重组蛋白的免疫学活性,采用RT-PCR的方法从猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)BJ-4毒株中扩增得到nsp7基因,将基因连接到pET-28a载体并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,利用Ni-NTA进行亲和纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析和鉴定,通过间接ELISA方法研究了重组蛋白的免疫学活性。结果表明,成功制备了nsp7重组蛋白,间接ELISA结果表明,重组蛋白具有良好的免疫活性,为建立nsp7特异性抗体的间接ELSIA检测方法及PRRS诊断试剂盒的研制奠定了基础。
- 刘永晖张改平乔松林刘明阳蒋志政王蕊万博鲍登克王爱萍
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒原核表达
