刘铮
- 作品数：10 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TLR4信号通路调节单核细胞趋化机制的研究
- 炎症(inflammation)是感染、非感染等多种损伤性刺激作用于机体,活化固有免疫系统的一种防御性反应,局部表现为红、肿、热、痛和功能障碍[1-3]。炎症是一把双刃剑,适度的炎症对机体是一种有效的防御措施,能起到杀灭...
- 刘铮
- 关键词：CCR2G蛋白偶联受体MCP-1
- 文献传递
- 人髓样相关蛋白14细胞内化的分子机制研究
- 目的:初步探讨人髓样相关蛋白14(Myeloid-related protein-14:MRP14)在Hela细胞内化的分子机制。方法:将MRP14与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescen...
- 刘铮徐佳伍丽琼王娟邓鹏姜勇
- 关键词：内化硫酸乙酰肝素蛋白多糖
- 文献传递
- SOD2启动子的克隆及转录活性的检测
- 2009年
- 目的:克隆小鼠锰超氧化物歧化酶基因(MnSOD,SOD2)5非编码区启动子序列,通过报告基因技术检测在静息或脂多糖(LPS)、亚砷酸钠(NaAsO2)等刺激下该段启动子的转录活性。方法:提取小鼠肝组织基因组DNA,PCR扩增小鼠SOD2启动子序列(-1554～+48);采用基因重组技术构建由SOD2启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,将该载体瞬时转染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),荧光显微镜下观察静息或NaAsO2、LPS、佛波酯(PMA)刺激下红色荧光蛋白表达。结果:正确扩增出小鼠SOD2启动子(-1554～+48)片段;成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染MEF细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经NaAsO2、LPS、PMA刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加。结论:小鼠SOD2启动子(-1554～+48)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后SOD2表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为研究SOD2的基因表达调控机制提供了重要基础和工具。
- 张秀娟王娟刘铮王达安刘芸姜勇
- 关键词：锰超氧化物歧化酶启动子基因
- 髓样相关蛋白8的内化机制研究
- 目的:MRP8蛋白是钙结合蛋白S100家族成员之一,其单体包含两个EF手型基序。MRP8具有丰富的生物学功能,与炎症高度相关,是许多急性和慢性炎症的重要调控因子。MRP8参与炎症、应激等反应的分子基础,尤其是相关信号过程...
- 吴丽琼刘铮刘爱华邓鹏姜勇
- 关键词：内化机制
- 文献传递
- 串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨
- 2009年
- 目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法:采用PCR方法分别扩增出CBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBP-SBP-CIF。利用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-α的水平变化。结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0.5ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P<0.05),并且在CIF1蛋白浓度0～2.5ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论:原核表达纯化了His-CBP-SBP-CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF-α的分泌表达。
- 刘芸邓鹏刘铮徐佳吴向玲姜勇
- 关键词：高迁移率族蛋白B1
- 髓样相关蛋白14真核表达载体的构建及其细胞内定位研究
- 2008年
- 目的:构建小鼠髓样相关蛋白14(MRP14)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增得到MRP14编码序列。然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后转染NIH3T3细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果:重组质粒经聚合酶链反应(PCR)、酶切和测序鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论:成功构建带HA标签的MRP14真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为下一步深入研究MRP14作用细胞的信号通路提供了一个重要工具。
- 刘铮徐佳伍丽琼王娟邓鹏姜勇
- 关键词：血凝素细胞内定位
- MRP14内化的分子机制及其生物学功能研究
- 人髓样相关蛋白14（myeloid-related protein-14,MRP14）是钙结合蛋白S100家族成员之一。MRP14相对分子质量比较小,其单体由两个EF手型基序组成,分别位于氨基末端和羧基末端,此结构为钙离...
- 刘铮
- 关键词：内吞脂筏硫酸乙酰肝素蛋白多糖
- 文献传递
- 小鼠HMGB1启动子红色荧光蛋白报告基因载体的构建及在真核细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建小鼠高迁移率族蛋白B1（HMGB1）启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体．为研究细胞内HMGB1的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具。方法采用基因重组技术构建含HMGBl1启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1—1—HMGB1P：脂质体法瞬时转染NIH3T3细胞．观察HMGB1启动子在正常情况下以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激后的细胞内活性。结果酶切鉴定和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体正确；该载体在NIH3T3细胞内静息状态呈低水平表达．经TNF—α刺激后，观察到表达高亮度红色荧光的细胞明显增多。结论所构建的HMGB1启动子红色荧光蛋白报告基因载体正确．具有正常启动蛋白表达的活性．可有效用于HMGB1基因表达信号调控机制的研究。
- 徐佳杨莉刘铮王娟黄劭邓鹏姜勇
- 关键词：高迁移率族蛋白B1启动子红色荧光蛋白报告基因
- 高迁移率族蛋白HMGB2的细胞内定位及移位研究
- 2009年
- 目的观察鼠高迁移率族蛋白B2(HMGB2)在真核细胞中的定位和移位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到HMGB2编码序列。然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒命名为pcDNA3-HA-HMGB2,随后将其转染NIH3T3细胞。荧光显微镜观察仅转染质粒的细胞和质粒转染与亚砷酸钠刺激30min和1h后细胞内HA-HMGB2融合蛋白的定位及移位情况。结果重组质粒经酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序鉴定证明构建正确,并在NIH3T3细胞中得到大量表达。荧光显微镜观察发现,HA-HMGB2蛋白主要分布于细胞核中,经亚砷酸钠刺激后30min,部分细胞中的蛋白从胞核移位到胞质,刺激1h后蛋白则主要分布于胞质中。结论成功构建带HA标签的HMGB2真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位、移位,为下一步深入研究HMGB2作用细胞的信号通路提供了一个重要工具。
- 王娟刘铮徐佳张秀娟伍丽琼邓鹏姜勇
- 关键词：高迁移率族蛋白质类血凝素类
- 脂多糖与高迁移率族蛋白B1联用对HepG2细胞释放细胞因子的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察脂多糖（LPS）与高迁移率族蛋白B1（HMGB1）单用或联用对人肝癌细胞释放细胞因子的诱导作用。方法培养人肝癌细胞株HepG2，用原核重组表达载体pET14b—HMGB1原核表达纯化HMGB1蛋白；用不同浓度的HMGB1蛋白（0、0．01、0．1、1、10mg／L）或不同浓度的LPS（0、0．1、1、10、100mg／L）以及1mg／LHMGB1和10mg／LLPS联用分别刺激培养的HepG2，24h后收集细胞上清液，用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测上清液中粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）10种细胞因子的表达水平。结果LPS可以剂量依赖性的方式刺激HepG2分泌IL-6、IL-8表达（P〈0．05或P〈0．01），而对GM—CSF、IFN-γ、IL—1β、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、TNF—α等作用不明显；不同浓度的HMGB1刺激HepG2后发现，低浓度的HMGB1可明显上调IL-6、IL-8的表达（P均〈0．01），但随着浓度升高，这种诱导作用逐渐减弱，并逐渐恢复至对照水平，而对其他8种细胞因子也无明显诱导作用。HMGB1和LPS联用时，高浓度的HMGB1可明显抑制LPS对HepG2分泌IL-6、IL-8的诱导作用（P均〈0．01）。结论人肝癌细胞株HepG2对炎性刺激仅能产生很少种类的细胞因子，其中LPS作用可以上调IL-6和1L-8水平，而HMGB1则表现出量效的反作用，并且高浓度的HMGB1可明显抑制LPS对HepG2分泌细胞因子的诱导作用。
- 刘志锋王娟刘铮唐柚青孟繁甦刘靖华苏磊
- 关键词：脂多糖高迁移率族蛋白B1HEPG2细胞细胞因子脓毒症
