华占楼
- 作品数：4 被引量：56H指数：2
- 供职机构：成都军区昆明总医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 消化性溃疡胃镜分析和流行病学分析被引量：44
- 2002年
- 边中启华占楼郑冬青
- 关键词：消化性溃疡胃镜分析流行病学
- 云南少数民族地区乙型肝炎病毒功能基因变异的研究
- 本文采用分子生物学技术对云南少数民族地区34例慢性乙型肝炎/(chronic hepatitis B，CHB/)患者/(17例不同的少数民族患者与17例汉族患者/)乙型肝炎病毒/(hepatitis B virus，HB...
- 华占楼
- 关键词：少数民族HBVSDS-PAGE
- 文献传递
- 中国云南少数民族地区慢性乙型肝炎患者病毒基因型的鉴定被引量：12
- 2006年
- 目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基因型在不同民族慢性乙型肝炎(CHB)患者中是否存在进化差异及临床意义。方法应用聚合酶链反应(PCR)对中国云南少数民族地区50例CHB患者(25例少数民族CHB患者与对照组25例汉族CHB患者)HBV前S2/S(preS2/S)和C(core,C)基因进行扩增,将PCR扩增产物克隆到载体pBS(pBluescriptⅡSK,pBS)上进行测序分析。结果50例患者HBVpreS2/S基因全长846bp,GC含量占49.1%,编码281个氨基酸(aa);C基因全长552bp,GC含量占46.1%,编码183个aa。并在GenBank登录注册(AY517619、AY517620、AY517488、AY517489、AY517598、AY517599)。通过与GenBank数据库中HBV基因及亚型序列比较,发现全部患者HBV基因与ayw1亚型具有高度同源性,preS2/S基因aa同源性为97.5%～98.6%,C基因aa同源性为94.5%～97.8%。所有患者S基因在“a”抗原决定簇aa第122位为精氨酸(AGA)、第160位为赖氨酸(AAA)。发现全部患者HBV基因型均为B型(属ayw1亚型),未发现其他基因型。HBV准种发生频率为4%。25例少数民族CHB患者之间与对照组25例汉族患者之间HBV基因型B差异比较,差异无统计学意义(P>0.05)。所有患者preS2/S基因均存在aa124精氨酸(R)→赖氨酸(K124)(1.1%)、172亮氨酸(L)→脯氨酸(P172)(1.3%)、306蛋氨酸(M)→苏氨酸(T306)(1.5%)和361异亮氨酸(I)→蛋氨酸(M361)(1.6%)的aa替代,其发生替代的频率>1%。但所有患者发生aa145甘氨酸(G)→精氨酸(R)(0.4%)替代的频率<1%。50例患者C基因在T细胞和B细胞表位存在27～63、80～110、135～153位间aa变异,其中45例患者C基因由于nt1979A→G,nt2012T→A,nt2088G→T,nt2304C→A和nt2339A→G的变异,分别引起V27、N38、V63、Q135和A147的aa替代,其发生替代的频率>1%。而另外5例重型CHB患者C基因由于nt2159A→G,nt2189A→C的变异,分别引起甘氨酸(G87)和亮氨酸(L97)的aa替代。所有患者preS2/S和C基因中未发现碱基的插入或缺失。结论中国云南少数民族地区HBV流行毒株为基因
- 边中启华占楼严维耀刘明秋吴殿源郑兆鑫
- 关键词：肝炎病毒乙型基因型
- 中国云南少数民族地区慢性乙型肝炎患者病毒基因在大肠杆菌中的表达及其抗原性被引量：1
- 2006年
- 目的研究不同民族慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV前S2/S(preS2/S)和C(core,C)基因在大肠杆菌Escherichia coli(E.coli)中表达的稳定性和水平,并对其抗原性进行鉴定,为创制新型疫苗提供抗原材料。方法从中国云南少数民族地区50例慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV基因组DNA,将聚合酶链反应(PCR)扩增-克隆-测序的HBV preS2/S和C基因插入到表达载体pλPR上,构建重组pλPR-S2S和pλPR-C表达质粒,并在大肠杆菌TOP10中表达。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定表达产物非融合蛋白,并对其抗原性用Western印迹和ELISA方法进行检测。结果SDS-PAGE检测到全部慢性乙型肝炎患者pλPR-S2S和pλPR-C重组质粒在大肠杆菌TOP10中存在稳定性和高水平的表达,表达的非融合蛋白相对分子质量分别为31000和21000,非融合蛋白浓度约占16%,纯度达96%。Western印迹和ELISA分析,非融合蛋白能分别与HBVpreS2/S抗原单抗、C抗原单抗及慢性乙型肝炎患者血清发生反应,而与对照的甲型肝炎(HAV)患者血清、丙型肝炎(HCV)患者血清及正常血清之间无交叉反应。结论中国云南少数民族地区慢性乙型肝炎患者HBV preS2/S和C基因在大肠杆菌TOP10中有稳定性和高水平的表达,表达的非融合蛋白具有抗原性。这些发现为创制新型疫苗具有潜在应用价值。
- 边中启华占楼严维耀刘明秋郑兆鑫
- 关键词：大肠杆菌WESTERN印迹
